Выписка из егрн на землю: Выписка из ЕГРН на земельный участок

Содержание

как получить расширенные выписки на ktotam.pro о кадастровой стоимости, цена

Выписка из ЕГРП на земельный участок содержит полную информацию о собственнике объекта недвижимости, его назначении, размере площади, наличии ограничений, обременений, притязаний или арестов. Этот документ рекомендуется получить заблаговременно еще до проведения и оформления купли-продажи земельного участка, чтобы убедиться в юридической чистоте проводимой сделки.

Стоит обратить внимание, что с 1 января 2017 года произошел ряд изменений в кадастровой сфере. В частности, появилось условие, где выписка из ЕГРП, равно как и кадастровый паспорт, свидетельство о госрегистрации заменяются на выписку из ЕГРН.

Сведения в выписке из ЕГРП на земельный участок

Выписка ЕГРП при продаже земельного участка является официальным документом, который содержит следующую информацию об объекте недвижимости:

  • наименование документа;
  • наименование ведомства, осуществляющего регистрацию прав;
  • исходящий номер выписки;
  • указание основания предоставления информации по объекту недвижимости;
  • наименование и площадь объекта недвижимости;
  • назначение земельного участка;
  • адрес;
  • информация о собственнике;
  • сведения о наличии обременений, притязаний, установленных судом ограничений по распоряжению землей;
  • информация о наличии договора долевого участия в строительстве;
  • ФИО заявителя для физических лиц;
  • наименование организации для юридических лиц.

Где заказать выписку из ЕГРП на земельный участок

Любое физическое, юридическое лицо и ИП может заказать выписку из ЕГРП на земельный участок. Для получения документа необходимо лично обратиться в территориальное подразделение Росреестра с паспортом и квитанцией об оплате госпошлины и составить письменное заявление. При обращении через законного представителя, доверенное лицо заявителя кроме паспорта должно предоставить также документ, подтверждающий его полномочия.

При отсутствии в населенном пункте подразделения Росреестра можно также обратиться в МФЦ, который выступая в роли посредника между заявителем и ведомством, принимает заявления и передает их по назначению. Если в Росреестре срок выдачи выписки составляет 5 рабочих дней, то в МФЦ это время может увеличиться, так как отсчет ведется не с момента подачи заявления в МФЦ, а с момента его передачи в Росреестр.

Можно отправить письменное заявление по почте. Однако данный способ займет намного больше времени. Зачастую справка необходима срочно или же в день обращения. За срочный бумажный вариант выписки придется уплатить двойной размер пошлины, что невыгодно.

Как заказать выписку из ЕГРП на земельный участок онлайн

Интернет дает нам еще один способ, как получить выписку ЕГРП на земельный участок быстро и без переплаты. Любой гражданин может подать онлайн-запрос на официальном сайте Росреестра, заполнив форму или направив запрос по электронной почте. В этом случае на адрес вашей электронной посты будет выслан электронный вариант выписки. В этом случае вам также придется подождать 5 рабочих дней, которое дается на выдачу документа.

Если вам необходим электронный вариант справки в день обращения, то вы можете заказать его на нашем сайте. Выписка будет готова в течение получаса после обработки вашего запроса. В запросе необходимо указать только адрес или кадастровый номер земельного участка.

Автор: проект Кто Там

5.

0

8270

1

Оцените статью

Заказать отчет об объекте недвижимости

Отчеты о недвижимости онлайн срочно и без регистрации

Адрес или кадастровый номер участка Найти

Кликните на карте на любой земельный участок или дом, чтобы получить информацию

Загрузка данных. ..

Пожалуйста, подождите.

Объект по этим данным не найден

На карте показываются только участки, для которых сделано межевание (т.е. измерены точные координаты углов).

Поэтому возможны 4 причины, по которым участка на карте нет

  1. межевание не делалось вообще
  2. межевание сделано давно (до 2006 года)
  3. межевание сделано недавно (1-2 месяца назад)
  4. технические ошибки кадастровой карты

Подробнее читайте в нашей статье


Объект по этому номеру не найден

Проверьте правильность кадастрового номера.

Он должен указываться с двоеточиями, и содержать 4 группы цифр. Например, 77:08:0009005:8

Или воспользуйтесь нашим расширенным поиском

Объект по этому номеру не найден

Проверьте правильность кадастрового номера.

Он должен указываться с двоеточиями, и содержать 4 группы цифр. Например, 77:08:0009005:8

Или воспользуйтесь нашим расширенным поиском

Объект по этому адресу не найден

Нужно указать более точный адрес.

Адреса бывают сложные, поэтому точнее найти объект по кадастровому номеру. Посмотрите его в документах. Например,

77:08:0009005:8

Или воспользуйтесь нашим расширенным поиском

Для сайтаДля форумаСсылка на координатыДинамическая картаСсылка на объектКарта ЯндексКарта GoogleКарта 2GISOpenStreetMapСпутник ЯндексСпутник GoogleСпутник Bingx4x5x6x7x8x9x10x11x12x13x14x15x16x17x18

Чтобы разместить карту на сайте или форуме, cкопируйте и вставьте код полностью и без изменений. А чтобы поделиться картой в социальных сетях — просто поставьте лайк:

На карте показываются только участки, для которых сделано межевание (т. е. измерены точные координаты углов).

Поэтому возможны 4 причины

, по которым участка на карте нет:

  1. межевание не делалось вообще
  2. межевание сделано давно (до 2006 года)
  3. межевание сделано недавно (1-2 месяца назад)
  4. технические ошибки при регистрации межевого плана
Подробнее читайте в нашей статье.

Карта Без картыКарта ЯндексКарта GoogleКарта 2GISOpenStreetMapСпутник ЯндексСпутник GoogleСпутник Bing

Кадастровые границы Без кадастровых границС кадастровыми границами

Тематическая карта

Распечатать

8 вопросов об уточнении границ земельного участка

01.09.2020  Просмотров: 5276

Как и зачем уточнять границы земельного участка? Какие документы пригодятся при уточнении границ старого участка? Как провести согласование результатов в сложной эпидемиологической обстановке? На эти и другие вопросы ответили эксперты Федеральной кадастровой палаты.

1. Что такое граница участка?

Описание местоположения границ земельного участка является одним из основных сведений, позволяющих определить земельный участок в качестве индивидуально определенной вещи. Местоположение границ земельного участка отображается в графической части межевого плана. Кроме того, границы земельного участка могут быть установлены на местности. Местоположение границ земельного участка устанавливается путем определения координат характерных точек таких границ.

2. Что такое межевание?

Межевание – это комплекс инженерно-геодезических работ по установлению границ земельного участка на местности. Межевание проводит кадастровый инженер, который устанавливает местоположение границ земельного участка, определяет его площадь, проводит согласование местоположения границ смежных участков с соседями и подготавливает межевой план.

3. Зачем уточнять границы земельного участка?

Точно определенные границы земельного участка могут стать защитой от юридических проблем, которые могут возникнуть с землей. Например, от споров с соседями по границам земельного участка, а также самовольному строительству объектов недвижимости на таком земельном участке. Также наличие границ земельного участка дает возможность беспроблемно совершать с участком любые операции и сделки, например, продать его будет проще, ведь вряд ли покупатели захотят приобретать участок без четких границ.

Уточнение границ поможет исправить возможные ошибки, в том числе в сведениях о фактически используемой площади. Она может отличаться от той, что указана в сведениях ЕГРН. А ошибочные сведения о площади участка могут стать причиной неверного определения его кадастровой стоимости и, как следствие, неверного определения размера земельного налога.

Если вы решили разделить земельный участок, такой раздел возможен только при наличии установленных границ существующего земельного участка.

4. Как узнать, какие сведения о земельном участке внесены в Единый государственный реестр недвижимости?

Вся необходимая информация содержится в выписке из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости.

Если реестр не содержит необходимых сведений о границах, в выписке будет особая отметка: «Границы земельного участка не установлены в соответствии с требованиями земельного законодательства». Площадь такого участка будет указана целым числом – тем же, что и в правоустанавливающем документе.

В случае если содержащиеся в ЕГРН координаты характерных точек границ земельного участка определены с точностью не ниже нормативной точности определения координат для земель определенного целевого назначения, уточнение местоположения границ земельного участка не требуется, за исключением случая, если в сведениях ЕГРН о местоположении границ земельного участка содержится реестровая ошибка.

Можно воспользоваться и справочным сервисом «Публичная кадастровая карта». Найти конкретный земельный участок на ней проще всего по адресу. Если в окне описания объекта стоит отметка «Без координат границ» или площадь указана как декларированная, значит, требуется уточнение местоположения границ.

Важно! При обращении к кадастровой карте будьте внимательными: у сервиса есть сайты-двойники, которые могут представлять информацию, не соответствующую действительности. Публичная кадастровая карта размещена по адресу: pkk.rosreestr.ru.

Подать запрос в бумажном виде на получение выписки можно лично, обратившись в многофункциональный центр (МФЦ) или Кадастровую палату. Чтобы получить сведения ЕГРН дистанционно, можно воспользоваться сервисом Федеральной кадастровой палаты, который позволяет получить выписку в течение нескольких минут, либо официальным порталом Росреестра. Электронная выписка заверяется усиленной электронной подписью.

5. Как уточнить границы участка?

Уточнение местоположения границ – это целый комплекс работ, которые может провести только специалист, обладающий правом на осуществление кадастровой деятельности (кадастровый инженер). Поэтому в первую очередь собственнику необходимо обратиться к кадастровому инженеру для проведения необходимых работ. Ознакомиться с информацией о действующих кадастровых инженерах можно через сервис «Государственный реестр кадастровых инженеров». При выборе кадастрового инженера стоит обратить внимание на его опыт, качество и сроки выполнения кадастровых работ.

Кадастровый инженер выезжает на место и проводит необходимые замеры. Если есть забор, то замеры проводят по нему. Если забора нет, лучше заранее обозначить углы участка колышками. Следующий этап – ознакомление с результатами замеров. Далее – процесс согласования границ с владельцами смежных участков. После этого кадастровый инженер подает пакет документов в орган регистрации прав.

При формировании границы он должен соблюдать ряд правил: например, граница земельного участка не должна пересекать границы населенных пунктов или муниципальных образований; граница не должна пересекать границу смежных участков.

Результатом становится подготовка межевого плана, содержащего сведения о координатах границ земельного участка.

6. Какие нужны документы?

Кадастровый инженер не сможет установить границы земельного участка просто так, как хочется собственнику. Для проведения работ, в числе прочего, ему потребуются документальные свидетельства, что участок выделен именно в этом месте и именно такой площади.

Согласно действующему законодательству, уточнение границ земельного участка проводится на основании сведений, которые содержатся в правоустанавливающем документе на земельный участок.

Дополнительно могут быть использованы сведения, указанные в документах, определявших местоположение границ участка при его образовании.

Если таковых нет – уточнение можно провести в соответствии с границами, существующими на местности 15 и более лет и закрепленными с использованием природных объектов или объектов искусственного происхождения, позволяющих определить местоположение границ участка.

Дополнительные разъяснения даны Департаментом недвижимости Минэкономразвития. Документами, определяющими местоположение границ земельного участка при его образовании и их существование 15 и более лет, могут быть:

· Ситуационные планы, содержащиеся в техпаспортах объектов недвижимости (расположенных на земельном участке), которые подготовлены органами государственного технического учета и технической инвентаризации (БТИ).

· Материалы лесоустройства, планово-картографические материалы, имеющиеся в районных органах архитектуры, строительства и жилищного хозяйства, органах местной власти.

· Документы по территориальному планированию муниципальных образований.

· Проекты организации и застройки территории дачных, садовых и огородных некоммерческих товариществ.

Важно: документы должны соответствовать требованиям законодательства, действовавшего в месте издания документа и в момент издания.

7. Как согласовать границы участка с соседями?

Мало уточнить местоположение границ участка – необходимо согласовать его с правообладателями смежных, то есть соседских участков. Кадастровый инженер должен направить им соответствующие извещения на почтовый или электронный адрес. Если найти их не получается, кадастровый инженер публикует извещение в местной прессе. Адресат будет считаться уведомленным, даже если он не прочитает это объявление.

Правообладатели смежных участков должны подтвердить свое согласие, подписав акт согласования. В случае непреодолимых разногласий нужно подать кадастровому инженеру письменное возражение. Оно должно быть зафиксировано в акте согласования, а также приложено к межевому плану.

При наличии обоснованных возражений орган регистрации прав приостановит учетно-регистрационные действия, а решать разногласия соседям придется уже в суде. Кадастровый инженер, проводивший межевание, также может быть привлечен к делу в качестве третьего лица.

Урегулирование земельного спора на стадии согласования границ избавит от необходимости обращаться в суд. Судебные разбирательства по вопросам установления границ участков – одни из самых сложных и длительных.

8. Можно ли проводить согласование границ земельных участков в период сложной эпидемиологической обстановки?

Действующим законодательством не предусмотрено каких-либо особенностей процедуры согласования границ. Кадастровый инженер по своему выбору может проводить согласование как индивидуально с каждым соседом, так и проведя собрание с их участием. При этом если провести согласование в индивидуальном порядке по каким-то причинам невозможно, кадастровый инженер может в извещении о проведении собрания назначить определенное время для каждого заинтересованного лица.

Во время процедуры согласования в период сложной эпидемиологической обстановки необходимо соблюдать социальную дистанцию и пользоваться средствами индивидуальной защиты.

Документы для внесения изменений в сведения госреестра недвижимости можно подать через МФЦ, с помощью электронных сервисов на сайте Росреестра, направить почтой в адрес регионального управления органа регистрации прав или воспользоваться выездным обслуживанием Кадастровой палаты.
Дата изменения: 01.09.2020 15:19:09
Количество показов: 5276

Органы прокуратуры разъясняют отдельные вопросы в отношении ранее учтенного земельного участка

Земельные участки считаются ранее учтенными в случаях, если их учет проведен до 01.03.2008 либо учет не был проведен, однако права на них зарегистрированы (и не прекращены) и им присвоены условные номера.

Внести сведения в Единый государственный реестр недвижимости (ЕГРН) о таком участке может потребоваться, например, для получения выписки из реестра и подтверждения существования земельного участка с определенными характеристиками (например, покупателю земельного участка).

Сведения о ранее учтенном земельном участке вносятся в ЕГРН на основании:

1) заявления правообладателя земельного участка о внесении сведений в ЕГРН о ранее учтенном земельном участке. К заявлению могут быть приложены документы, подтверждающие права на земельный участок.

В этом случае рекомендуется сначала проверить, действительно ли сведения в ЕГРН отсутствуют, поскольку орган регистрации прав мог внести их самостоятельно. Проверить такие сведения возможно на сайте Росреестра при помощи публичной кадастровой карты или сервиса «Справочная информация по объектам недвижимости в режиме онлайн».

Сведения о ранее учтенном земельном участке вносятся в ЕГРН бесплатно.

Законодательством предусмотрен закрытый перечень оснований для отказа во внесении в ЕГРН сведений о ранее учтенном земельном участке, в том числе если такие сведения уже содержатся в ЕГРН или представленный документ не соответствует тем требованиям законодательства, которые действовали в момент его издания;

2) запроса правообладателя земельного участка о предоставлении сведений из ЕГРН о земельном участке.

В этом случае правообладатель может запросить выписку об объекте недвижимости либо выписку об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости.

Такой запрос может подать любое лицо и, если сведения в ЕГРН о ранее учтенном земельном участке отсутствуют, они будут внесены в ЕГРН самостоятельно регистрирующим органом.

3) межведомственного запроса.

Снятие же ранее учтенного земельного участка с кадастрового учета по инициативе его правообладателя невозможно. Орган регистрации прав делает это самостоятельно. Такой участок снимается с кадастрового учета только в том случае, если в ЕГРН нет сведений о его правообладателе.

Так, ранее учтенный земельный участок снимается с кадастрового учета, если:

1) правообладателю исходного земельного участка направлено уведомление о необходимости зарегистрировать право, однако в течение шести месяцев со дня его направления этого не сделано. В этом случае записи об участке в ЕГРН будет присвоен статус «архивная»;

2) не выявлены правообладатели исходного земельного участка либо объектов недвижимости (помещений в них), расположенных на ранее учтенном земельном участке либо его части. В этом случае орган регистрации прав должен направить в соответствующий орган государственной власти (орган местного самоуправления) запрос о наличии правоустанавливающих документов на ранее учтенный земельный участок и оснований для разграничения права собственности на землю. Земельный участок снимается с кадастрового учета в случае поступления ответа об их отсутствии либо непоступления ответа в течение трех месяцев со дня направления запроса.

На территории г. Новосибирской области органом регистрации прав является Управление Росреестра по Новосибирской области, в которое можно обращаться по рассматриваемым вопросам.

Материал предоставлен прокуратурой города Новосибирска

Изменено 14.01.2021 10:58:51 Просмотров:

Выписки из ЕГРН – виды выписок, способы получения с 2017 года

С 2017 года Федеральная служба государственной регистрации, кадастра и картографии (Росреестр) изменила формы предоставления информации об объектах недвижимости.

Произошло это по требованиям федерального закона «О государственной регистрации недвижимости» (№ 218-ФЗ), выполнение положений которого сопровождалось объединением двух государственных структур, занимавшихся ранее учётом и регистрацией объектов в раздельном порядке:

  1. Государственного Кадастра Недвижимости (ГКН)
  2. Единого государственного реестра прав (ЕГРП)

В результате их слияния появилась новая государственная информационная служба – Единый государственный реестр недвижимости (ЕГРН), сконцентрировавший в единую базу:

  • данные о недвижимости
  • сведения о правах собственности на недвижимость

ЕГРН стал единственным достоверным источником систематизированной информации об объектах недвижимости на территории РФ. Часть сведений из ЕГРН была открыта для публичного доступа.

Объективная информация об объектах недвижимости, как и их кадастровый учёт, возникновение и переход права на объекты недвижимости отныне подтверждаются только соответствующими выписками из ЕГРН:

  1. Выписка из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости
  2. Выписка из ЕГРН о переходе прав на объект недвижимости
  3. Выписка о правах отдельного лица на имевшиеся (имеющиеся) у него объекты недвижимости
  4. Выписка о дате получения органом регистрации прав заявления о государственном кадастровом учете и (или) государственной регистрации прав и прилагаемых к нему документов

Состав выписок из ЕГРН, их содержание и формат установлены Приказом Минэкономразвития России (№ 378 от 20.06.2016 г. (Приложениями №№ 1 – 4).

Дополнительные сведения из ЕГРН предоставляются в виде следующих материалов:

  • кадастровый план территории
  • сведения о характеристиках объектов недвижимости:
    • площадь
    • назначение
    • кадастровый номер
    • кадастровая стоимость
  • уведомление об отсутствии сведений о лицах, получивших сведения об объекте недвижимости
  • справка о лицах, получивших сведения об объекте недвижимости
  • уведомление об отсутствии в ЕГРН запрашиваемых сведений
  • решение об отказе в предоставлении запрашиваемых сведений из ЕГРН
  • сведения об ограничениях (обременениях) прав на недвижимое имущество
  • сведения о сделках с объектами недвижимост,
  • иные сведения, установленные законодательством

 

Судьба кадастрового паспорта на земельный участок и на любой объект недвижимости

 

Федеральный закон №218-ФЗ упразднил такой документ, как кадастровый паспорт объекта недвижимости, выдававшийся ранее после его кадастрового учёта и предназначавшийся для государственной регистрации права на этот объект.

Так как процедуры кадастрового учёта и госрегистрации права собственности объединены, то необходимость в кадастровом паспорте в виде отдельного документа исчезла (статья 28 ФЗ «О государственной регистрации недвижимости»).

Кадастровый паспорт сменил новый документ – Выписка из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости. подтверждающая госучёт объекта и его госрегистрацию.

Её форма и содержание установлены Приложением №1 к Приказу Минэкономразвития России № 378 от 20.06.2016 г..

Выписка из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости содержит общедоступные сведения:

  • графические и текстовые данные
  • информацию об основных характеристиках объекта
  • данные о собственнике
  • сведения об ограничениях и арестах

Выписка выдаётся для различных задач:

  • для подтверждения государственного кадастрового учета (при постановке объекта на учёт или при снятии с учёта)
  • для госрегистрации права на объект недвижимости
  • для внесения в ЕГРН сведений о ранее учтённом объекте недвижимости

База ЕГРН не содержит сведения о не приватизированных объектах недвижимости, поэтому в Выписке на такую недвижимость будет указано, что «Запрашиваемые сведения отсутствуют».

Получить Выписку из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости можно в режиме on-line на ресурсе Росреестра или в МФЦ, подав запрос на предоставление Выписки из ЕГРН об основных характеристиках и зарегистрированных правах на объект недвижимости.

 

Выписка из ЕГРН о правах отдельного лица на имевшиеся (имеющиеся) у него объекты недвижимости

 

Сведения, которые содержатся в выписке о правах отдельного лица на объект недвижимости, являются информацией ограниченного доступа.

Они доступны только правообладателям или их представителям, а также государственным органам и прочим лицам, которые имеют право на получение информации из ЕГРН ограниченного доступа.

Форма и содержание этой Выписки установлены Приложением №3 к Приказу Минэкономразвития России № 378 от 20.06.2016 г.. (смотреть по тексту ниже Приложения №1).

Заказать Выписки из ЕГРН можно отправкой письма с уведомлением о получении при непосредственном обращении в офисы росреестра или Кадастровой палаты, через МФЦ, а в электронном виде — на официальном ресурсе Росреестра, воспользовавшись, к примеру этими ссылками:

При заказе выписки необходимо точно указать, какая именно выписка из ЕГРН необходима. От этого обстоятельства зависит корректность предоставляемой информации.

 

Выписка из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости заменила Справку о кадастровой стоимости

 

Справка о кадастровой стоимости земельного участка и любого другого объекта недвижимости с 1 января 2017 года, как и кадастровый паспорт, переместилась на иную позицию – «в прошлое».

Выписку из ЕГРН о кадастровой стоимости объекта недвижимости можно заказать отдельно. Сделать это можно на официальном сайте Росреестра. Предоставляется она бесплатно по запросам любых лиц.

Такая выписка потребуется для решения вопроса об изменении кадастрвой стоимости объекта, установленной государством.

 

Для чего необходимы Выписки и сведения из ЕГРН?

 

Выписки и сведения из ЕГРН могут потребоваться в различных ситуациях:

  • при приобретении, аренде, наследовании имущества
  • чтобы выяснить, кто является собственником объекта недвижимости
  • для уточнения технических характеристик объекта недвижимости
  • для согласования перепланировки помещений
  • для объединения или разделения земель
  • при обращении в суд для подтверждения факта регистрации собственности ответчика на имущество и для подачи ходатайства об обеспечительных мерах
  • при выселении гражданина из квартиры в принудительном порядке
  • при приватизации квартиры для подтверждения того, что право на приватизацию не было использовано ранее
  • для постановки в очередь в качестве нуждающихся в улучшении жилищных условий
  • для подтверждения того, что право на недвижимое имущество отсутствует
  • многие иные ситуации

 

Польза от введения ЕГРН

 

  • единый реестр (ЕГРН) максимально исключает мошеннические схемы
  • доступность комплексной информации ЕГРН позволяет провести проверку права на объект, его границ по предъявлению паспорта
  • выписка из ЕГРП и ЕГРН доступны в «одном окне» – нет необходимости обращения в несколько инстанций
  • выписка из ЕГРН, помимо общих сведений о недвижимости и ее владельце, содержит информацию о документах, на основании которых возникло право собственности, а значит, позволяет установить правомерность совершения операции отчуждения недвижимости
  • для тех, кто намерен зарегистрировать свое приобретение, возникает возможность не обращаться в несколько инстанций, каждая из которых может потребовать новых справок и документов — вся информация находится в едином реестре, и запрашивать её придется самим организациям
  • ранее выданные документы (уже имеющихся на руках свидетельств о праве на недвижимость) сохраняют актуальность:
    • но для сделок потребуется выписка из ЕГРН

 

Нужно знать

 

  • С условиями оформления в собственность захваченной земли можно ознакомиться здесь
  • Как используются и застраиваются участки в охранных зонах объектов культурного наследия, можно узнать здесь
  • Узнать о новом Классификаторе ВРИ (2019) можно здесь
  • Ознакомиться с тем, чем грозит ненадлежащее использование земельных участков, можно ознакомиться здесь
  • Представление о градостроительном регламенте и его значении для застройки участков можнополучить здесь
  • ФЗ «О ведении гражданами садоводства и огородничества», с особенностями которого можно ознакомиться здесь.
  • С 1 января 2018 года должны быть зафиксированы точные границы участков, поскольку купить, продать, заложить или подарить землю без точного описания границ будет попросту невозможно. Так регламентировано поправками к Земельному кодексу. А тотальная ревизия границ по инициативе муниципалитетов началась с 1 июня 2015 г.
  • Уточнить статус своей земли и границы можно на публичной кадастровой карте. Как получить необходимые сведения по имеющейся информации – по кадастровому номеру или адресу участка, помогут советы, представленные здесь
  • Как провести раздел участка – подсказки здесь
  • С расчётом налогов на недвижимость в 2017 году можно ознакомиться здесь
  • Как рассчитать НДФЛ при продаже недвижимости, можно узнать здесь
  • С порядком изменения ВРИ земельных участков, действующим с 2017 года можно ознакомиться здесь
  • Как определить вид использования участка для ИЖС, ЛПХ, КФХ, дачного строительства по Классификатору ВРИ, можно ознакомиться здесь
  • С 1 марта 2015 года вступил в силу новый Федеральный закон «О внесении изменений в Земельный кодекс РФ и отдельные законодательные акты РФ» (N 171-ФЗ от 23.06.2014 г.), в соответствии с которым, частности, упрощена процедура выкупа земельных участков у муниципалитетов. Ознакомиться с основными положениями закона можно здесь

Проверка участка с помощью выписки ЕГРН

Начиная с 2017 года, для того чтобы получить достоверные данные про конкретный земельный участок и его собственника достаточно сделать запрос на оформление выписки из ЕГРН. Этот документ сегодня полностью заменил выдаваемые ранее Росреестром справки и кадастровый паспорт.

Выписка из ЕГРН содержит полную информацию про земельный участок и может выдаваться после предоставления заинтересованным лицом соответствующего запроса.

Заявку на выписку можно оформить лично, обратившись в отделение Росреестра или в МФЦ. Также документ можно получить в электронном виде, отправив соответствующий запрос через наш сервис. Выписка из ЕГРН в электронном виде оформляется значительно быстрее и имеет такое же юридическое значение, как и бумажный вариант документа.

Причины получения справки на земельный участок

Выписка из ЕГРН на землю может понадобиться по разным причинам. Как правило, она оформляется для осуществления следующих операций с земельным участком:

  • купля-продажа;
  • аренда;
  • найм;
  • оформление залога;
  • приватизация;
  • разрешение спорных ситуаций в суде.

Данный документ необходим для проверки информации о земле и гарантии правомерности совершаемой сделки. Его могут запросить нотариус, будущий владелец или кредитная организация.

Форма заказа выписки из ЕГРН

Виды справок из ЕГРН

В зависимости от данных, содержащихся в документе выписка из ЕГРН бывает двух видов:

  1. Стандартная справка с содержанием общедоступной информации.
  2. Расширенная выписка с указанием координат.

В первом случае документ содержит информацию о земельном участке и о наличии на него обременений.

К общей информации об объекте относятся: адрес, площадь, кадастровая стоимость, государственный учетный и кадастровый номера, категория земельного участка, разрешенное предназначение земли, кадастровые номера расположенных на участке объектов.

Помимо вышеперечисленных данных выписка из ЕГРН содержит сведения о владельце земельного участка: ФИО владельца или название и ИНН фирмы, основание для регистрации прав и дата.

При наличии ограничений на объект (арест или ипотека) в документы указывается номер регистрации данного ограничения, срок его действия и основание для введения обременений на земельный участок. При наличии информации об изъятии объекта в пользу государства, государственной регистрации без разрешения третьей стороны её тоже указывают в справке.

В документе содержится информация о местоположении участка, его план и межевание.

Расширенная выписка содержит отметки координат и поворотных точек объекта.

Способы получения справки

Выписка из ЕГРН может быть оформлена в бумажном и в электронном варианте. Бумажный вид документа оформляется дольше и требует личного обращения заинтересованного лица. Оформление документа осуществляется после оплаты госпошлины, размер которой зависит от региона.

Чтобы получить справку в электронном виде достаточно заполнить и отправить соответствующий запрос через наш сервис. Электронная выписка из ЕГРН оформляется гораздо быстрее и отправляется на электронную почту заявителя. Такой вид справки подтверждается электронной подписью регистратора и имеет полный юридический статус.

Срок действия справки не зависит от способа ее предоставления, так как документ содержит только актуальную информацию на момент его выдачи. Законодательством не установлено конкретного срока действия для справки ЕГРН на земельный участок, но существует общее правило для всех организаций – справка действует в течение 30 дней.

Неочищенный экстракт и фракции листьев Eugenia uniflora Linn показали противовоспалительную, антиоксидантную и антибактериальную активность

BMC Complement Altern Med. 2018; 18: 84.

, 1 , 1 , 2 , 2 , 2 , 2 , 3 , 4 , 5 , 5 , , , 5 и 1

Tamires Rocha Falcão

1 Кафедра биофизики и фармакологии, УФРН, Av.Senador Salgado Filho, S / N, Campus Universitário, Lagoa Nova, Natal, RN 59072-970 Бразилия

Aurigena Antunes de Araújo

1 Департамент биофизики и фармакологии, UFRN, Av. Senador Salgado Filho, S / N, Campus Universitário, Lagoa Nova, Natal, RN 59072-970 Бразилия

Луис Альберто Лира Соарес

2 Департамент фармацевтических наук, UFPE, Ресифи, PE Brazil

Rhayanne Thaís de Moraes

2 Департамент фармацевтических наук, UFPE, Ресифи, PE Бразилия

Isabelle Cristinne Ferraz Bezerra

2 Департамент фармацевтических наук, UFPE, Ресифи, PE Бразилия

Магда Райанни, Ассунсао, Феррейра

3 2 of Pharmaceutical Sciences, UFPE, Ресифи, PE Бразилия

Manoel André de Souza Neto

3 Департамент фармацевтики, UFRN, Natal, RN Brazil

Maria Celeste Nunes Melo

4 UFRN, Natal, RN Brazil

, RN Brazil

, RN Brazil

, RN Brazil

, RN Brazil

, RN Brazil

Raimundo Fernandes de Araújo, Jr

5 Отделение морфологии, UFRN, Natal, RN Brazil

Andreza Conceição Véras de Aguiar Guerra

5 Отдел морфологии, UFRN, Натал, RN Brazil

Juliana Silva de Medeiros

1 Отдел биофизики и фармакологии, UFRN, Av.Senador Salgado Filho, S / N, Campus Universitário, Lagoa Nova, Natal, RN 59072-970 Бразилия

5 Департамент морфологии, UFRN, Natal, RN Brazil

Gerlane Coelho Bernardo Guerra

1 и фармакология, УФРН, Av. Senador Salgado Filho, S / N, Campus Universitário, Lagoa Nova, Natal, RN 59072-970 Бразилия

1 Департамент биофизики и фармакологии, UFRN, Av. Senador Salgado Filho, S / N, Campus Universitário, Lagoa Nova, Natal, RN 59072-970, Бразилия

2 Департамент фармацевтических наук, UFPE, Ресифи, PE Бразилия

3 Департамент фармацевтики, UFRN, Natal, RN Brazil

4 UFRN, Natal, RN Brazil

5 Департамент морфологии, UFRN, Natal, RN Brazil

Автор, ответственный за переписку.

Поступило 24 июля 2017 г .; Принято 23 февраля 2018 г.

Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями Международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии, что вы должным образом укажете автора (авторов) и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Отказ от лицензии Creative Commons Public Domain Dedication (http: // creativecommons.org / publicdomain / zero / 1.0 /) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное. Эта статья цитировалась в других статьях PMC.

Abstract

Предпосылки

Это исследование показало фитохимический состав и оценило противовоспалительную и анальгезирующую активность неочищенного экстракта (CE) и фракций из E. uniflora листьев Linn.

Методы

Полифенолы, присутствующие в неочищенном экстракте (CE), во фракциях, обработанных водной (AqF) и этилацетатной (EAF), из E.uniflora Листья Linn были показаны с помощью хроматографического анализа с целью проведения фитохимической характеристики. Антибактериальную активность оценивали на основании минимальных ингибирующих концентраций (МИК), определенных с использованием метода разведения в агаре. Дозы 50, 100 и 200 мг / кг CE и фракций применялись для проведения моделей in vivo (самцы мышей Swiss, возраст 8–10 недель). Экспериментальную модель перитонита индуцировали каррагенаном после определения активности миелопероксидазы (MPO), общего глутатиона и малонового диальдегида (MDA), IL-1β и TNF-α с помощью спектроскопического анализа U V / VIS.Антиноцицептивную активность оценивали на основе модели абдоминальных корчей и теста с горячей пластиной. Результаты были статистически оценены с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Бонферрони. Уровень статистической значимости составил p <0,05.

Результаты

Высокоэффективная жидкостная хроматография с детектором на фотодиодной матрице (HPLC-DAD) обнаружила различные концентрации галловой кислоты, эллаговой кислоты и мирицитрина в CE и фракциях, полученных из E.uniflora Linn листья (0,05–0,87% мас., 0,20–0,32% и 1,71–6,56% мас., соответственно). В целом, CE имел более низкие значения MIC, чем фракции, включая самые низкие значения MIC против штамма MRSA. CE и AqF также значительно снижали миграцию лейкоцитов и активность MPO ( p <0,05). Кроме того, AqF значительно снижал уровни IL-1β и TNF-α ( p <0,05). Кроме того, ХЭ и фракции проявляли антиоксидантный эффект ( p <0.05) и периферической анальгетической активности ( p <0,05).

Выводы

CE и фракции из листьев E. uniflora Linn проявляли антибактериальную, противовоспалительную, антиоксидантную и анальгетическую активность в проведенных анализах.

Ключевые слова: Eugenia uniflora Linn, противовоспалительное, антиноцицептивное, окислительный стресс, антибактериальный

Предпосылки

Eugenia uniflora Linn (Myrtaceae) — это вид, который известен как питанга и обычно Суринамская вишня) или питангейра (бразильская вишня).Кустарник встречается на Среднем Западе, Северо-Востоке, Юго-Востоке и Юге Бразилии [1, 2]. В бразильской народной медицине листья E. uniflora Linn используются в настоях, отварах и спиртовых экстрактах для лечения диареи, боли в животе, колик, кишечных инфекций, паразитов, лихорадки, гриппа, кашля, бронхита, беспокойства, высокого кровяного давления. и диабет [3, 4]. В других этноботанических исследованиях, в которых не указывалась используемая растительная часть, сообщалось об использовании этого вида для лечения лихорадки, гриппа, воспаления горла, воспаления зубов, головной боли, высокого артериального давления и высокого холестерина [5].

Согласно проведенным предварительным фитохимическим исследованиям, листьев E. uniflora Linn содержат алкалоиды, тритерпены, дубильные вещества, флавоноиды и антрахиноны [6]. В более подробных исследованиях гидролизуемые танины (эугифлорины D1 и D2, камптотин A, эноотеин B, гемин D, гиппоманин A), флавоноиды (афзелин, десмантин-1, мирицитрин, кверцитрин и гликозиды мирицетина и кверцетина (β) и терпеноиды) -ситостерин, бетулиновая кислота и центеллозид C) были идентифицированы и в некоторых случаях изолированы [7].

Хотя во многих исследованиях изучали E. uniflora , лишь несколько исследований изучали возможную корреляцию между фитохимическим составом этого двудольного растения и его биологической активностью. Исследование Schumacher et al. (2015) показали, что листьев E. uniflora Linn снижают индекс воспалительного инфильтрата в островках поджелудочной железы, поддерживая уровни инсулина в сыворотке крови и глутатиона в печени и снижая перекисное окисление липидов в сыворотке, а также снижая риск развития диабета у диабетиков без ожирения (NOD ) мыши [8].Богатая флавоноидами фракция (HE-Bu), полученная из листьев E. uniflora , снижает уровни TNF-α и IL-1β в сыворотке и заметно снижает экспрессию белков iNOS и COX-2 клетками подвздошной кишки в экспериментальной модели сепсиса in vivo [7 ]. Эфирное масло листа и изолированные терпеноиды из Eugenia uniflora Linn продемонстрировали анальгетический эффект in vivo с использованием теста на сокращение живота у мышей, индуцированного уксусной кислотой и тестом с горячей пластиной [2].

Целью настоящего исследования было провести фитохимическую характеристику E.uniflora Linn листья, одновременно оценивая цитотоксичность, антибактериальную, противовоспалительную и анальгезирующую активность неочищенного экстракта (CE) и полученных фракций из листьев E. uniflora Linn.

Методы

Травяной материал

Образец листьев E. uniflora Linn был собран в городе Ипожука (штат Пернамбуку, Бразилия). Вид был идентифицирован в гербарии доктором Ритой де Касиа Перейра, а образцы ваучера были депонированы в Агрономическом институте Пернамбуку (IPA) под номером 89989.Названия растений проверены http://www.theplantlist.org/.

Получение КЭ и обогащенных фракций

E. uniflora Листья Linn

E. uniflora Листья Linn ( 50 г) сушили, измельчали ​​и затем экстрагировали (10%, масс. / v ) смесью ацетон: вода (7: 3, v / об) путем турбо-экстракции в течение 20 мин при 5-минутные интервалы, каждый с 30-секундными циклами. Затем раствор концентрировали при пониженном давлении (RV10 Basic, IKA®).Полученный остаток замораживали (-80 ° C, 3 дня), а затем лиофилизировали (модель L101, Liotop®), получая CE (выход 10 г). Приблизительно 10 г CE восстанавливали в воде (100 мл). Полученную водную фракцию распределяли еще двенадцать раз с помощью 10 мл этилацетата. Эти водные (выход 4 г) и этилацетатные (выход 2 г) фракции (далее называемые AqF и EAF) концентрировали, замораживали и лиофилизировали.

Приготовление растворов для анализа с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

с детектированием на фотодиодной матрице (HPLC-DAD)

50 мг КЭ и фракций взвешивали и переносили в мерные колбы на 25 мл.После добавления 20 мл сверхчистой воды (Elga®) в каждую колбу колбы переносили в ультразвуковую баню (Ultracleaner, Unique®) для достижения полного растворения. Через 15 мин каждую фракцию КЭ и каждую разбавляли до 1 мг / мл сверхчистой водой. Галловая кислота (чистота 96%, Sigma®) [8], эллаговая кислота из коры дерева (чистота 95%, Sigma®) [8] и мирицитрин (чистота 99%, Sigma®) [7] были использованы в качестве эталонов. СЕ, фракции и стандарты фильтровали через поливинилидендифторид (PVDF) 0.Мембрана 45 мкм (Macherey-Nagel®) перед анализом ВЭЖХ. Анализы ВЭЖХ проводили в трех экземплярах.

Хроматографические условия

Система Thermo Scientific (Ultimate 3000 Thermo Fisher Scientific®), оснащенная DAD (Thermo Fisher Scientific®), бинарным насосом (HPG-3x00RS, Thermo Fisher Scientific®), дегазатором и автоматическим пробоотборником, оснащенным 20 Петлю мкл (ACC-3000, Thermo Fisher Scientific®) использовали для выполнения анализов ВЭЖХ. Программное обеспечение Chromeleon 6.8 (Dionex®) использовалось для сбора и обработки данных.

Хроматографическое разделение выполняли с помощью колонки C 18 (внутренний диаметр 250 мм × 4,6 мм, 5 мкм; Dionex®), которая была защищена защитной колонкой из того же материала (Phenomenex®). Градиентное элюирование достигалось изменением соотношения растворителя B (метанол с 0,05%, об., / об., Трифторуксусная кислота) к растворителю A (вода с 0,05%, об. / Об., Трифторуксусная кислота) при скорости потока 0,8 мл. / мин, в соответствии со следующей программой градиента: 10–25% B (10 мин), 25–40% B (5 мин), 40–70% B (10 мин), 75% B (5 мин) и 75 –10% B (1 мин).Разделение проводили в термостате колонок при температуре 23 ± 2 ° C. Длины волн 254 нм, 270 нм и 350 нм были использованы для обнаружения эллаговой кислоты, галловой кислоты и мирицитрина, соответственно, в соответствии с максимальным поглощением, измеренным с помощью DAD.

Исследование in vitro

Антибактериальная активность

Антибактериальная активность CE и фракций была протестирована против важных с медицинской точки зрения грамположительных и грамотрицательных бактерий, имеющихся в Лаборатории медицинской бактериологии, UFRN, Бразилия.Грамположительная группа включала: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus epidermidis INCQS 00016, Enterococcus faecalis ATCC 29212 и метициллин-резистентный штамм Staphylocuccus aureus, бразильский [эпидермальный] штамм [Mephelocuccus aureus ]. . Грамотрицательная группа включала: Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis INCQS 00258 и Pseudomonas aeruginosa ATCC. Все эти бактерии предварительно поддерживались при -20 ° C и были реактивированы в бульоне для инфузии сердца мозга (BHI, HiMedia®, Индия) при 37 ° C в течение 24 часов.Бактериальные суспензии были стандартизированы до мутности, эквивалентной 0,5 стандартной пробирке МакФарланда, перед проведением антибактериального тестирования.

Минимальные ингибирующие концентрации (МПК) определяли методом разбавления агаром в соответствии с документом M07-A9 Института клинических и лабораторных стандартов [10] с некоторыми изменениями. Сначала готовили исходные водные растворы в ДМСО (50%, v / v) CE и фракций (25 мг / мл), которые затем фильтровали через стерильный раствор 0.Шприцевые фильтры с размером пор 22 мкм (Kasvi®, Бразилия). Затем последовательные объемы этих исходных растворов переносили в стерильные 15 мл пробирки, содержащие агар Мюллера-Хинтона (MHA, HiMedia®, Индия), разжиженный при 50 ° C. Затем растворы гомогенизировали и переносили в стерильные чашки Петри (диаметром 6 мм). Концентрация этих образцов варьировалась от 0,039 мг / мл до 2,5 мг / мл, при этом конечная концентрация ДМСО при наивысшей концентрации образца составляла (5% об. / Об.). Затем стандартизованные бактериальные суспензии разбавляли 1:10 и 2 мкл каждой разбавленной суспензии переносили в среду, содержащую КЭ или фракции, и инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов.Кроме того, контроль роста (MHA + иннокулят), контроль растворителя (MHA, содержащий 5% ДМСО) и контроль стерильности (MHA) инкубировали при 37 ° C в течение 24 часов. Цефалотин, гентамицин и ванкомицин (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) использовали в качестве контрольных антибиотиков. МИК считалась самой низкой концентрацией экстракта или фракции, которая предотвращала видимый рост бактерий.

Исследования in vivo

Это исследование было проведено в строгом соответствии с рекомендациями Руководства по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья.Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных UFRN ( CEUA , номер разрешения: 001/2015).

Мыши

Самцов мышей Swiss в возрасте 8–10 недель (40 ± 2,0 г), полученных из Центра биологических наук UFRN Vivarium, содержали в стандартных условиях (например, 12-часовой цикл свет / темнота, 22 ± 0,1 ° C и 50 –55% влажности) при условии правильного кормления и воды ad libitum. Животные были акклиматизированы и подвергались 12-часовому голоданию и воде ad libitum перед экспериментами.Эвтаназию проводили подкожным введением тиопентала натрия в дозе 90 мг / кг (0,5%, Тиопентакс, Кристалия, Сан-Паулу, Бразилия).

Модель перитонита, индуцированного каррагинаном.

Мышей случайным образом распределяли на двенадцать групп ( n = 5 / группа). Чтобы оценить влияние CE и фракций на рекрутирование лейкоцитов в брюшную полость, мышей предварительно перорально обрабатывали носителем (0,9% физиологический раствор) / группой каррагинана, CE или фракциями (50, 100 и 200 мг / кг). ) или диклофенак (10 мг / кг).Через 30 минут внутрибрюшинно (внутрибрюшинно) вводили 0,25 мл 1% раствора каррагинана (Sigma-Aldrich, Сан-Паулу, Бразилия). Имитационная группа получала носитель (1 мл воды / 10 г, перорально) и 0,9% стерильный физиологический раствор внутрибрюшинно (0,1 мл / 10 г) [11]. Затем через 4 часа мышей умерщвляли передозировкой тиопентала натрия 90 мг / кг. Затем в каждую брюшную полость вводили по три мл физиологического раствора, собирали перитонеальную жидкость и разбавляли (1:20) раствором Турка. Общий подсчет лейкоцитов проводился для каждого образца с помощью счетной камеры Neubauer.Образцы хранили при -80 ° C для последующего анализа активности миелопероксидазы (MPO), а также уровней малонового диальдегида (MDA) и общего глутатиона.

Определение активности миелопероксидазы

Активность МПО измеряли согласно методике, описанной Krawisz et al. [12]. Аликвоту (100 мкл) каждого образца разбавляли в 2 мл гексадецилтриметиламмонийбромидного буфера (HTAB, Sigma Aldrich, Сан-Паулу, Бразилия) и гомогенизировали. Образцы обрабатывали ультразвуком в течение 5 минут, затем центрифугировали при 10000 об / мин в течение 15 минут при 4 ° C, а затем подвергали трехкратному замораживанию-оттаиванию.Биохимические измерения проводились в двух экземплярах. Затем к контрольным образцам и образцам супернатанта в 96-луночных планшетах добавляли 7 мкл буфера HTAB. Затем в каждую лунку добавляли 200 мкл окрашивающего реагента (о-дианизидин дигидрохлорид) и регистрировали значения поглощения при 450 нм с помощью анализа Spectrocopical U V / VIS (Biotek, Сан-Паулу, Бразилия). Активность фермента МПО рассчитывалась на основе интерполяции стандартной кривой, построенной для МПО нейтрофилов человека и пероксидазы хрена.Единица MPO (U) была определена для разложения 1 нмоль / мин перекиси водорода при 25 ° C. Следовательно, результаты, полученные в анализах, выражали в единицах / мкл образца.

Определение общего содержания глутатиона

В соответствии с методом, описанным в [13], 100 мкл каждого воспалительного лаважа разбавляли 5% раствором трихлоруксусной кислоты (TCA) / дистиллированной воды, а затем гомогенизировали и центрифугировали при 10000 об / мин в течение 15 мин при 4 ° C. Каждое стандартное разведение (20 мкл), раствор TCA (20 мкл, Vetec, Сан-Паулу, Бразилия) для холостого опыта и супернатант каждого образца (20 мкл) добавляли в 96-луночные планшеты в двух экземплярах.Кроме того, в каждую лунку добавляли 15 мкл PBS-EDTA, 20 мкл раствора дитиобиснитробензойной кислоты (DTNB) и 140 мкл NADPH. После стадии инкубации при 30 ° C в течение 5 минут в каждую лунку добавляли 15 мкл раствора фермента и GSH-редуктазы (Sigma Aldrish, Сан-Паулу, Бразилия). Значения поглощения при 412 нм регистрировали с помощью анализа Spectrocopical U V / VIS (Biotek) в течение 3 минут. Общее содержание глутатиона рассчитывали на основе интерполяции стандартной кривой, которая была построена с очищенным глутатионом (γ-L-глутамил-L-цистеинил-глицин, GSH, Sigma Aldrish, São Paulo Brazil, G4251).Результаты этих анализов выражаются в нмоль / мкл образца.

Определение содержания МДА

Для оценки перекисного окисления липидов продуцирование МДА измеряли согласно [14]. Сначала 50 мкл каждого образца разводили в 250 мкл 20 мМ буфера Tris HCl (Trizma гидрохлорид, Sigma Aldrich, Сан-Паулу, Бразилия) в дистиллированной воде (20 мМ, pH 7,4). Образцы перитонеальной жидкости гомогенизировали и центрифугировали при 10000 об / мин в течение 10 минут при 4 ° C. Затем 750 мкл хромогенного реагента (10.К каждому образцу добавляли 3 мМ 1-метил-2-фенилиндол в ацетонитриле 3: 1) и 225 мкл HCl (37%). После стадии инкубации на водяной бане в течение 40 минут при 45 ° C образцы центрифугировали при 10000 об / мин в течение 5 минут при 4 ° C. Значения поглощения при 586 нм регистрировали с помощью спектроскопического анализа U V / VIS (Biotek, Сан-Паулу, Бразилия), и результаты интерполировали по стандартной кривой, которая была построена с 1,1,3,3-тетраэтоксипропаном (соединение который гидролизуется с образованием MDA при инкубации с HCl при 45 ° C).Результаты этих анализов выражаются в нмоль / мкл образца.

Анализ IL-1β и TNF-α

Перитонеальная жидкость (C-каррагинан, D-диклофенак, неочищенный экстракт CE, водная фракция AqF и фракция, обработанная EAF-этилацетатом) хранили при -70 ° C после экстракция, гомогенизация и обработка, как описано в другом месте [15]. Уровни IL-1β (диапазон обнаружения: 62,5–4000 пг / мл; нижний предел обнаружения: 12,5 нг / мл рекомбинантного мышиного IL-1β) и TNF-α (диапазон обнаружения: 62,5–4000 пг / мл; нижний предел обнаружения: обнаружение: 50 нг / мл рекомбинантного мышиного TNF-α) определяли с использованием коммерческих наборов для ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA ), как описано ранее [16].

Сначала планшеты для микротитрования покрывали в течение ночи при 4 ° C антителами против мышиного TNF-α и IL-1β. После того, как планшеты были заблокированы, образцы и стандарты добавляли в различных разведениях в двух экземплярах и инкубировали при 4 ° C в течение 24 часов. Планшеты промывали 3 раза буфером, а затем в лунки добавляли антитела (биотинилированные овечьи поликлональные анти-TNF-α, анти-IL-1β, разведенные 1: 1000 1% буфером для анализа BSA). Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч, промывали и добавляли 50 мкл авидин-HRP (1: 5000).Цветной реагент о-фенилендиамин (50 мкл) добавляли через 15 мин и планшеты инкубировали в темноте при 37 ° C в течение 15–20 мин. Ферментативную реакцию останавливали с помощью H 2 SO 4 и измеряли оптическую плотность при 490 нм. Значения выражены в пг / мл.

Оценка антиноцицептивной активности

Тест с горячей пластиной

Тест с горячей пластиной использовался для измерения центральной анальгетической активности, и боль вызывалась теплом [17]. Мышей случайным образом распределяли на одиннадцать групп ( n = 5 / группа), и они получали: 10 мл / кг физиологического раствора (нормальная контрольная группа / без лечения), морфин (10 мг / кг, внутрибрюшинно) и CE, AqF. или EAF; с CE и группами фракций, получавших пероральные дозы 50 мг / кг, 100 мг / кг и 200 мг / кг их лечения.Затем каждую мышь помещали на горячую пластину (Insight, Сан-Паулу, Бразилия), поддерживающую температуру 55 ± 0,5 ° C. Регистрировали время, затрачиваемое животными на прыжок или лизание одной из задних лап. Задержки регистрировались с интервалами 30 мин, 60 мин, 90 мин и 120 мин после введения веществ.

Тест на спазмы в животе, вызванные уксусной кислотой

Боль вызывалась уксусной кислотой для измерения периферической анальгетической активности [18]. Мышей случайным образом распределяли на одиннадцать групп ( n = 5 на группу).Две группы получали пероральный физиологический раствор 10 мл / кг (нормальный контроль и контроль уксусной кислоты). Одна группа получала индометацин перорально (10 мг / кг). Остальные девять групп получали пероральные дозы CE (50, 100 или 200 мг / кг), AqF (50, 100 или 200 мг / кг) или EAF (50, 100 или 200 мг / кг). Ноцицепцию стимулировали i.p. инъекция уксусной кислоты (0,6% v / v), разведенной в сверхчистой воде, через 30 мин после обработки животных СЕ и фракциями, индометацином и контролем уксусной кислоты.Нормальный контроль получил i.p. введение физиологического раствора 10 мл / кг. После инъекции уксусной кислоты или физиологического раствора мышей помещали под перевернутые стеклянные воронки и регистрировали количество корчков, которые наблюдались в течение 20 минут.

Результаты экспериментов

Во время эксперимента регистрировали поведение и гибель животных.

Статистический анализ

Данные из контрольной группы считались исходными значениями. Все экспериментальные данные были записаны как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM).Результаты были статистически оценены с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим апостериорным тестом Бонферрони. Уровень статистической значимости составил p <0,05. Анализ результатов и построение графиков выполнялись с помощью GraphPadPrism версии 5.04.

Результаты

Хроматографические анализы CE и фракций

E. uniflora

Хроматографические анализы были выполнены с использованием ВЭЖХ. Галловая и эллаговая кислоты (мономеры гидролизуемых танинов) и флавоноид мирицитрин были обнаружены в СЕ и фракциях E.uniflora Льняные листья. Время удерживания (RT) галловой кислоты, мирицитрина и эллаговой кислоты в этих образцах составляло 8,7 мин (рис.), 23,3 мин (рис.) И 25,1 мин (рис.), Соответственно. Идентичность стандартов в образцах подтверждали корреляцией их RT. Таким образом, пики, соответствующие стандартам, были определены в образцах из листьев E. uniflora следующим образом: CE (пики: 1, 2 и 3; рис.), AqF (пик: 1; рис.) И ДСП (пики: 1, 2 и 3; рис.).

Хроматографические профили галловой кислоты (A), мирицитрина (B), эллаговой кислоты (C), CE (D), AqF (E) и EAF (F) E.uniflora Linn листья, как определено с помощью ВЭЖХ. CE: неочищенный экстракт, AqF: водная фракция, EAF: фракция, обработанная этилацетатом. Время удерживания (RT) галловой кислоты, мирицитрина и эллаговой кислоты этих веществ составляло 8,7 мин (пик 1), 23,3 мин (пик 2) и 25,1 мин (пик 3).

Содержание галловой кислоты, мирицитрина и эллаговой кислоты в CE и фракции также определяли в трех повторностях с использованием калибровочных кривых стандартов (y = 1,3038 × + 0,6907; R 2 = 0,9920; y = 1.4816 × — 2.200; 2 = 0,9916; у = 3.0007 × + 3.9969; R 2 = 0,9906 соответственно для галловой кислоты, мирицитрина и эллаговой кислоты). Эти значения приведены в таблице.

Таблица 1

Содержание химических маркеров, проанализированных в CE и фракциях листьев E. uniflora , как определено с помощью HPLC-DAD

Образцы Галловая кислота (%, w / w) Эллаговая кислота (%, мас. / Мас.) Мирицитрин (%, мас. / Мас.)
CE 0.459 (1,99) 0,200 (2,72) 1,713 (0,41)
AqF 0,328 (3,01) 0,035 (3,90) 0,061 (5,15)
EAF 0,323 (4,05) 6,560 (0,22)

Активность in vitro

Антибактериальная активность

В проведенных антибактериальных анализах КЭ и фракции E. uniflora Linn подавляли большинство тестируемых бактерий, за исключением MRSA, который не был восприимчив к CE на 2.5 мкг / мл, или Escherichia coli , который не был чувствителен ни к одному из тестируемых образцов (таблица). В целом, CE имел более низкие значения MIC, чем фракции, включая самые низкие значения MIC против штамма Staphylococcus epidermidis . Нормальный рост бактерий наблюдался во всех контрольных группах роста (MHA + иннокулят) и растворителях (MHA, содержащий 5% ДМСО). В контроле стерильности (MHA) роста не наблюдалось.

Таблица 2

МИК КЭ и фракции E. uniflora Linn против грамположительных и грамотрицательных бактерий

9039 0,6
Бактерии МИК образцов (мкг / мл) a
CE EAF AqF Цефалотин Гентамицин Ванкомицин
Грам-положительный .250 ± 0 2.500 ± 0 2.500 ± 0 0,5 ± 0 ND ND
Staphylococcus epidermidis INCQS 00016 0,313 ± 0 0,25 ± 0 ND ND
Enterococcus faecalis ATCC 29212 1.250 ± 0 2.500 ± 0 2.500 ± 0 8.0 ± 0 9039 9039 9039 9039 9039 MRSA NI 2.500 ± 0 2.500 ± 0 ND ND 2,0 ± 0
грамотрицательный Escherichia colherich 90CC NI NI NI ND 0,5 ± 0 ND
Salmonella enteretidis INCQS 00258 1,250 ± 0 2 500 ± 0500 ± 0 ND 0,125 ± 0 ND
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 1,250 ± 0 1,875 ± 0,88 2,500 ± 0 2,500 ± 0 2,500 ± 0 90D

Активность in vivo

Все животные имели отличное состояние здоровья, и они были включены в эксперименты. 100% рандомизированных животных экспериментальной модели включали в модель перитонита, индуцированного каррагенаном, тест на горячую пластину и тест на спазмы живота, вызванные уксусной кислотой.Ни одно животное не было исключено из исследования. Побочных эффектов не обнаружено.

Миграция лейкоцитов

В анализах миграции лейкоцитов обработка CE, AqF и EAF во всех дозах приводила к значительному ингибированию миграции лейкоцитов по сравнению с группой каррагинана ( p <0,001 или p <0,01, рис.) .

Эффекты CE и фракций E. uniflora Linn в различных дозах на миграцию лейкоцитов в модели перитонита, индуцированного каррагенаном, по сравнению с группой каррагинана.Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка ( n = 5). Для расчета статистической значимости использовался тест ANOVA. ** p <0,01, *** p <0,001 по сравнению с группой каррагинана (C). S (имитация), C (каррагинан), D (диклофенак), CE (неочищенный экстракт), AqF (водная фракция), EAF (фракция, обработанная этилацетатом)

Активность MPO

Инфильтрация лейкоцитов оценивалась с обнаружением MPO уровни в перитонеальной жидкости. Как показано на фиг., Уровень МПО в группе положительного контроля был более чем в двенадцать раз выше (65 Ед / мкл), чем в группе отрицательного контроля / физиологический раствор (5 Ед / мл) ( P <0.001). После лечения диклофенаком наблюдалось значительное снижение уровней МПО по сравнению с группой положительного контроля ( P <0,001). Значительное снижение уровней активности МПО во всех дозах наблюдалось после лечения CE, AqF и EAF как следствие количества нейтрофилов.

Влияние CE и фракций (50, 100 или 200 мг / кг) E. uniflora Linn на активность МПО в модели перитонита, индуцированного каррагенаном, по сравнению с группой каррагинана.Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 5). Тест ANOVA был использован для расчета статистической значимости *** p <0,001 по сравнению с группой положительного контроля. S (имитация), C (каррагинан), D (диклофенак), CE (неочищенный экстракт), AqF (водная фракция), EAF (фракция, обработанная этилацетатом)

Общее содержание глутатиона

Общие уровни глутатиона определялись в перитонеальной жидкости образцы, чтобы оценить влияние КЭ и фракций E.uniflora Linn на окислительно-восстановительный гомеостаз. В группе положительного контроля общий уровень глутатиона снизился примерно в 8 раз по сравнению с группой отрицательного контроля. Напротив, введение CE и фракций в дозах 50 мг / кг, 100 мг / кг и 200 мг / кг увеличивало общий уровень глутатиона на 84% по сравнению с группой положительного контроля ( P <0,001) ( Рис. ). Эти результаты предполагают, что CE и фракции E. uniflora Linn опосредуют антиоксидантную активность.

Эффекты CE и фракций (50, 100 или 200 мг / кг) E. uniflora Linn на уровни общего глутатиона (нмоль / мкл) в модели перитонита, индуцированного каррагинаном, по сравнению с группой каррагинана. Результаты выражены как среднее значение ± стандартная средняя ошибка ( n = 5). Тест ANOVA был использован для расчета статистической значимости *** p <0,001 по сравнению с группой положительного контроля. S (имитация), C (каррагинан), D (диклофенак), CE (неочищенный экстракт), AqF (водная фракция), EAF (фракция, обработанная этилацетатом)

Содержание MDA

MDA является одним из основных вторичных продуктов перекисное окисление липидов и является широко используемым биомаркером для оценки окислительного стресса.MDA — это диальдегид, который является побочным продуктом окисления полиненасыщенных жирных кислот путем бета-расщепления пероксидазы и, в основном, арахидоновой кислоты. Как показано на фиг., Уровни MDA были выше в группе положительного контроля по сравнению с обработанной группой и группой отрицательного контроля. Однако CE и фракции во всех дозах были способны значительно снижать уровни MDA ( p <0,001), тем самым указывая на то, что защитный эффект на перекисное окисление липидов опосредуется E. uniflora Linn листьями.

Влияние CE и фракций (50, 100 или 200 мг / кг) E. uniflora Linn на уровни MDA в модели перитонита, индуцированного каррагинаном, по сравнению с группой каррагинана. S (имитация), C (каррагинан), D (диклофенак), CE (неочищенный экстракт), AqF (водная фракция) и EAF (фракция, обработанная этилацетатом). Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 5). Для расчета статистической значимости использовался тест ANOVA, * p <0,05), *** p <0.001 по сравнению с группой положительного контроля. # указывает на значительную разницу между группами, получавшими экстракты.

Влияние CE и фракций

E. uniflora Linn на цитоцины IL-1β и TNF-α.

Группы, подвергнутые CE, и фракции E. uniflora. Linn показал снижение уровней провоспалительного цитокина IL-1β (диклофенак, CE и фракции E. uniflora CE для всех доз, p <0,001, за исключением EAF при 200 мг / кг, p <0.01) и TNF-α (диклофенак, p <0,01, и AgF, все дозы, p <0,05) по сравнению с контролем каррагинана (фиг.).

Уровни воспалительных цитокинов IL-1β и TNF-. C (каррагинан), D (диклофенак), CE (неочищенный экстракт, 50, 100 или 200 мг / кг), AqF (водная фракция, 50, 100 или 200 мг / кг), EAF (фракция, обработанная этилацетатом, (50 , 100 или 200 мг / кг). Тест ANOVA был использован для расчета статистической значимости, * p <0,05), ** p <0.01 по сравнению с контрольной группой каррагинана. # указывает на значительную разницу между группами, получавшими экстракты.

Оценка антиноцицептивной активности

В тесте горячей пластиной группа, получавшая морфин, проявляла центральное обезболивающее действие во всех временных интервалах; однако только доза группы, получавшей 200 мг / кг AqF, проявляла центральное обезболивающее действие с интервалом в 90 минут. Группа, получавшая AqF, не имеет дозозависимого профиля, и поэтому это не может быть связано с фармацевтической активностью AqF.Ни одна из других групп в другие промежутки времени не проявляла значимого центрального анальгетического действия (таблица).

Таблица 3

Оценка анальгетической активности E. uniflora CE и фракций в различных дозах

7,8 + 4,1 200 мг / кг
Назначенное лечение Начальный латентный период боли Латентный период боли в указанные моменты времени после введения
0 с 30 мин 60 мин 90 мин 120 мин
Нормальный контроль / без обработки 13 + 5.0 6,2 + 6,8 4,8 + 3,3 7,8 + 5,1 6,3 + 2,1
Морфин (10 мг / кг) 8 + 2,3 27 + 3,0 * 23 + 7,8 * 25 + 6,4 * 26 + 2,6 *
CE
50 мг / кг 7,6 + 3,2 12 + 9,3 8,6 + 6.2
100 мг / кг 8,4 + 2,3 8,4 + 6,0 18,6 + 7,4 6,2 + 6 8,4 + 4,6
200 мг / кг 10,6 + 3,0 8,4 + 5,0 15,6 + 11,1 10,8 + 10,7 12,6 + 6,3
AqF
9039 + 9039 + 9.6 + 8,1 15,4 + 12,1 14,2 + 9,2
100 мг / кг 5,4 + 2,4 16,2 + 5,6 17,2 + 8,5 9,8 + 5,5 18,4 + 8,2
7,6 + 2,7 17,2 + 6,8 12 + 9,7 22,2 + 4,4 * 12,6 + 4,6
EAF 9039 мг / кг 7.6 + 2,1 15,2 + 7,7 8,8 + 5,5 6 + 3 10,2 + 6,5
100 мг / кг 5,4 + 2,1 8 + 1,9 5,8 + 2,9 5 + 2,7 3 + 1,5
200 мг / кг 6,2 + 3,5 15,2 + 2,7 8,8 + 2,8 6,2 + 2,9 8,4 + 2,5

Абдоминальное введение уксусной кислоты анализ корчей, введение физиологического раствора в нормальном контроле, индометацина, CE, AqF и EAF E.uniflora Linn привело к значительному снижению количества спазмов в животе по сравнению с контролем с уксусной кислотой ( p <0,001, рис. 7). Уксусная кислота показала статистически значимые различия, которые также наблюдались для нормального контроля ( p <0,001, рис.).

Антиноцицептивное действие индометацина, СЕ и фракций (50, 100 или 200 мг / кг) E. uniflora Linn в различных дозах на количество абдоминальных искривлений, наблюдаемых после введения уксусной кислоты.Данные выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 5). Для расчета статистической значимости использовался тест *** p <0,001 по сравнению с нормальным контролем; ### p <0,001 по сравнению с уксусной кислотой. NG (нормальная контрольная группа), AA (уксусная кислота), I (индометацин), CE (неочищенный экстракт), AqF (водная фракция), EAF (фракция, обработанная этилацетатом)

Результаты экспериментов

Нет записей об изменении поведения или смерть были обнаружены во время экспериментов на животных моделях.

Обсуждение

Результаты, полученные в настоящем исследовании, создают научную основу для использования E. uniflora в народной / традиционной медицине. Как для тестов in vitro, так и in vivo, CE и фракции из листьев E. uniflora Linn проявляли действие на жизнеспособность клеток, антибактериальную, противовоспалительную и антиноцицептивную активность.

Мирицитрин — это рамнозное гликозидное производное мирицетина, встречающегося в природе флавонола, экстрагированного из плодов, коры или листьев растений.Кроме того, мирицитрин может быть дегликозилирован до агликон мирицетина [19].

Мирицитрин проявил несколько биологических функций, которые представляют потенциальную пользу для здоровья, включая антимутагенную [20], антиоксидантную [21, 22], противовоспалительную [22–24] и антиноцицептивную [25] активность в экспериментальных моделях. Также было обнаружено, что мирицитрин защищает от рака кожи, сильно ингибируя индуцированную опухолью трансформацию неопластических клеток посредством ограничения активности киназ MEK, JAK1, Akt и MKK4 [26].Кроме того, было показано, что мирицитрин ослабляет индуцированную опухолью активацию c-fos и протеина-активатора-1 [27], а также ингибирует пути JAK1 / STAT3 [28].

В исследовании Fiuza et al. (2008), гидроэтанольный экстракт из листьев E. uniflora Linn был подвергнут методу разбавления агаром, и было обнаружено, что он ингибирует рост штаммов Pseudomonas aeruginosa . Однако соответствующие значения МИК 2,18 [29], 4,37 [30], 8,75 [30] и 17,50 мг / мл [29] были примерно в 2–7 раз выше, чем концентрации, указанные в настоящем исследовании [31].В другом исследовании, в котором определялись значения MIC для гидроэтанольного экстракта E. uniflora Linn с использованием метода микроразбавления в бульоне, было обнаружено, что экстракт ингибирует рост P. aeruginosa , хотя и в более низкой концентрации (10 мкг / мл). Кроме того, последний экстракт не подавлял эталонный штамм S. aureus [32], что противоречит настоящим результатам. В других исследованиях сообщалось об ингибировании штаммов S. aureus , включая эталонный штамм ATCC 25923, с более низкими значениями МИК, чем указанные здесь.Сообщалось также об ингибировании штаммов E. coli , включая E. coli ATCC 25922, однако в настоящем исследовании этого не наблюдалось [33, 34]. Сходный МИК против штаммов S. aureus , включая АТСС 25923, был зарегистрирован только в одном другом исследовании, при этом МИК 2,187 мг / мл сообщалось для гидроэтанольного экстракта методом разбавления агаром [35]. Эти расхождения могут быть связаны с химической сложностью исследуемых образцов, особенно с учетом того, что состав вторичных метаболитов у растительных видов является динамичным в зависимости от множества переменных, связанных с периодом до сбора урожая (место сбора урожая, время, высота над уровнем моря, погода) и после сбора урожая. (способ консервирования растительного материала, способ экстракции, вид экстракционной жидкости) условия.

В проведенных анализах ВЭЖХ EAF имеет более высокое содержание эллаговой кислоты, галловой кислоты и мирицитрина. Эти результаты предполагают, что EAF в целом имеет более высокое содержание фенольных соединений, включая гидролизуемые галлотаннины, эллагитанины и флавоноиды. Ранее было продемонстрировано, что полифенолы, включая галловую кислоту, эллаговую кислоту, дубильные вещества и флавоноиды, проявляют антибактериальную активность против многих штаммов бактерий [36, 37]. Поэтому мы предположили, что EAF будет более активным из-за более высокого содержания в нем эллаговой кислоты, галловой кислоты и мирицитрина.Несмотря на предыдущий отчет о том, что EAF, содержащий флавоноиды и дубильные вещества, был более активен, чем экстракт [35], CE, исследованный в настоящем исследовании, имел более низкое значение MIC, чем другие подготовленные фракции. Таким образом, возможно, что антибактериальная активность, наблюдаемая для исследуемого здесь CE, обусловлена ​​синергическим эффектом множества веществ, которые могли отсутствовать после процедуры фракционирования.

Окислительный стресс — это событие, которое характерно для многих заболеваний человека, включая воспаление и рак.Окислительный стресс может быть результатом дисбаланса между уровнями активных форм кислорода (АФК) и антиоксидантов, которые отвечают за клеточную защиту (например, глутатиона, супероксиддисмутазы). В воспалительном процессе окислительный стресс опосредуется фагоцитами, содержащими МПО, и это приводит к избыточной продукции АФК, которая преодолевает окислительную защиту, такую ​​как присутствие GSH, трипептида, обычно участвующего в предотвращении окислительного повреждения тканей. Таким образом, способность GSH поддерживать восстановленную внутриклеточную среду делает его важным маркером антиоксидантной активности.

Благоприятное влияние CE и фракций E. uniflora Linn на воспалительный процесс было подтверждено на основании наблюдаемого снижения миграции лейкоцитов. Как важный маркер миграции нейтрофилов, активность МПО также снижалась после лечения. Защитный эффект CE в отношении окислительного стресса был продемонстрирован его способностью предотвращать снижение уровня общего глутатиона и MDA (маркера перекисного окисления липидов). Противовоспалительная способность флавоноида мирицитрина была ранее продемонстрирована на основании его ингибирования продукции простагландинов, индуцированной липополисахаридом (ЛПС) [28].Также было обнаружено, что мирицитрин ингибирует продукцию LPS-стимулированного оксида азота, провоспалительных цитокинов, продукцию простагландина E2 и уровни белка индуцибельной синтазы оксида азота и циклооксигеназы-2 в макрофагах RAW 264.7 [23].

В модели абдоминальных корчей все экстракты во всех дозах проявляли явную периферическую антиноцицептивную активность, демонстрируя, что уменьшение воспалительного процесса сопровождалось явным уменьшением боли на периферическом уровне.Ноцицептивный механизм, вызываемый уксусной кислотой, включает различные механизмы, такие как высвобождение метаболитов арахидоновой кислоты посредством циклооксигеназы и биосинтез простагландинов и гистаминов, среди прочего [38]. В последнее десятилетие было показано, что воспалительные стимулы не стимулируют напрямую высвобождение первичных гиперноцицептивных медиаторов, но их высвобождению предшествует каскад цитокинов. Существует каскадный выброс цитокинов, который представляет собой связь между повреждениями и высвобождением первичных гиперноцицептивных медиаторов [39].Эта концепция позволяет нам понять, почему ингибирование одного (IL-1β или TNF-α) или нескольких (глюкокортикоиды) цитокинов вызывает обезболивание [39]. Наше исследование смогло показать эту связь между CE и фракцией, снижение уровней IL-1β и TNF-α и снижение периферической антиноцицептивной активности.

С другой стороны, тест с горячей пластиной заключается в оценке реакции лекарственного средства на термогенный стимул [40]. В этом тесте тепловой стимул активирует ноцицепторы (немиелинизированные волокна типа C), которые передают информацию в определенные области центральной нервной системы, вызывая, таким образом, ноцицептивный ответ [41].Этот тест эффективен для определения анальгетической активности опиоидных агонистов [42]. Ответ CE и фракций в тесте с горячей пластиной предполагал, что он не продемонстрировал опиоидного действия.

Полифенольные компоненты, такие как дубильные вещества, обладают антиоксидантными и противовоспалительными свойствами. В предыдущем исследовании водного экстракта E. uniflora Linn были идентифицированы гидролизуемые танины (например, галловая кислота и эллаговая кислота), и экстракт применялся на модели острого диабета [8].У животных, которым вводили экстракт, наблюдался пониженный индекс воспалительного инфильтрата с уменьшением инфильтрации воспалительными клетками с 25% до 80%, наблюдаемых у необработанных животных по сравнению с обработанными, соответственно. Уровни воспалительных цитокинов, особенно TNF-α, были значительно снижены в группе, получавшей AqF, при всех дозах с высоким содержанием эллаговой кислоты и мирицитрина. В макрофагах мирицитрин снижает продукцию провоспалительных медиаторов, таких как NO, iNOS, TNF-α, IL-6 и IL-12, за счет подавления активации NF-κB и STAT1 [43].Предварительная обработка эллаговой кислотой снижала экспрессию провоспалительных цитокинов, таких как фактор некроза опухоли α (TNF-α), интерлейкин 6 (IL-6) и интерлейкин 1β (IL-1β). Эти результаты предполагают, что эллаговая кислота защищает от опосредованного Т-клетками гепатита посредством TLR и сигнальных путей митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) / NF-κB [44].

Этот противовоспалительный эффект можно частично объяснить снижением перекисного окисления липидов, что означает, что антиоксидантный эффект опосредуется внутриклеточным снижением потребления глутатиона.Обезболивающие эффекты, связанные с CE и фракциями E. uniflora Linn в настоящем исследовании, согласуются с антиноцицептивной активностью, наблюдаемой в исследовании эфирных масел, которые были выделены из листьев E. uniflora Linn и подавляли сужение животных 48 % при пероральной дозе 200 мг / кг. Было показано, что пентановая фракция листьев E. uniflora Linn опосредует значительный антиноцицептивный эффект, который включал подавление сужений животных на 70% при той же дозе [2].

Ранее сообщалось, что мирицитрин оказывает значительный анальгетический эффект в тесте на реакцию корчей, вызванную уксусной кислотой [45]. В настоящем исследовании CE и фракции вызывали значительно больший обезболивающий эффект. Это наблюдение может быть связано с содержанием мирицитрина, галловой кислоты и эллаговой кислоты, которые были обнаружены в CE и фракции листьев E. uniflora Linn.

Выводы

Относительно антибактериального действия E.uniflora Linn листья, вариабельность результатов, представленных в литературе, в сочетании с неожиданными результатами, полученными в настоящем исследовании, указывает на то, что необходимы дальнейшие исследования для определения активного антибактериального соединения, которое присутствует в листьях E. uniflora Linn. Эти исследования могут включать оценку антибактериальной активности экстрактов листьев, собранных из разных мест, одновременно с подробным фитохимическим анализом. Цель состоит в том, чтобы определить, какие вещества присутствуют или отсутствуют в активных экстрактах, а какие — в менее активных.СЕ и полуочищенные фракции листьев E. uniflora Linn проявляли противовоспалительную и анальгезирующую активность. Лечебные дозы также ингибировали миграцию клеток, как подтверждено в анализах MPO, и проявляли противовоспалительную активность со сниженными уровнями IL-1β (CE и все фракции), но AqF (все дозы) снижали уровни TNF-α. Кроме того, согласно определениям уровней общего глутатиона и МДА, очевидно, что E. uniflora Экстракт листьев Linn может опосредовать антиоксидантную активность.AqF может быть связан с более высоким содержанием мицитрина, галловой кислоты и эллаговой кислоты и вызывать значительно больший обезболивающий эффект по сравнению с CE и фракциями.

Благодарности

Мы благодарим Pro-Reitoria de Pesquisa и последипломную программу фармацевтических наук / UFRN / Brazil.

Финансирование

Эта работа была поддержана Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco / FACEPE (APQ-0493-4.03 / 14; BIC-0200-4.03 / 15; IBPG-0557-4.15 марта) и Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CNPq (308386 / 2015–9).

Наличие данных и материалов

Данные доступны у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Аббревиатуры

910 Использование животных DTNB 9AD-GEL-L-цистеинил-глицин3 фото обнаружение
ANOVA Односторонний дисперсионный анализ
AqF Водная фракция
БАПТА AM — 1,2-этанопис (2-N-2-Бифен-2-амино) , N ‘, N’-тетрауксусная кислота тетракис (ацетоксиметиловый эфир)
BHI Бульон для инфузий сердца мозга
CE Неочищенный экстракт
CEUA Дитиобиснитробензойная кислота
EAF Фракция этилацетата
GSH γ-L-Glutamyl-L-cysteinyl-glycine
HTAB Гексадецилтриметиламмонийбромидный буфер
i.п. Внутрибрюшинная
MDA малонового диальдегида
ГАМ Microbialpolyhydroxyalkanoates
МИК ингибирующие концентрации Минимальные
МРО миелопероксидазы
MRSA устойчивый к метициллину Staphylocuccus стафилококк
NIH Национальный институт здравоохранения
PVDF Поливинилиденфторид
RT Время удерживания
SEM Средняя ошибка TC
SEM Стандартная ошибка
UFRN Universidade Federal do Rio Grande do Norte
UV Ultra violete
VIS Visible

Вклад авторов

TRF, AAA, GCBG, LALS, RTMR, ICFB, MRAF, MASN, MCNM, RFAJ, ACVAG и JSM: внесли существенный вклад в концепцию и дизайн или сбор данных, или анализ и интерпретацию данных; TRF, AAA, GCBG, LALS, MRAF, MASN, MCNM, RFAJ: участвовали в составлении рукописи или ее критическом пересмотре на предмет важного интеллектуального содержания; TRF, AAA, GCBG, LALS, RTMR, ICFB, MRAF, MASN, MCNM, RFAJ, ACVAG и JSM: окончательно утверждена версия, которая будет опубликована.Каждый автор должен в достаточной степени участвовать в работе, чтобы нести общественную ответственность за соответствующие части содержания; и TRF, AAA, GCBG, LALS, RTMR, ICFB, MRAF, MASN, MCNM, RFAJ, ACVAG и JSM: согласились нести ответственность за все аспекты работы в обеспечении того, чтобы вопросы, связанные с точностью или целостностью любой части работа должным образом исследована и решена.

Примечания

Одобрение этики и согласие на участие

Это исследование было одобрено Комитетом по этике использования животных / CEUA / Федеральным университетом Риу-Гранди-ду-Норти / UFRN, протокол № 01/2015) Федерального университета Рио. Гранд-ду-Норти, Бразилия.Используемые протоколы ухода за животными и исследований были основаны на принципах и рекомендациях, принятых в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных.

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Примечание издателя

Springer Nature сохраняет нейтралитет в отношении юрисдикционных претензий на опубликованных картах и ​​принадлежностей организаций.

Информация для авторов

Тамирес Роша Фалькао, электронная почта: moc.liamtoh @ oaclafrserimat.

Ауригена Антунес де Араужо, электронная почта: [email protected]

Луис Альберто Лира Соарес, электронная почта: [email protected]

Райанн Тас де Мораес Рамос, электронная почта: [email protected]

Изабель Кристин Ферраз Безерра, электронная почта: [email protected]_eelleb.

Магда Райанни Ассунсао Феррейра, электронная почта: [email protected]_adgam.

Маноэль Андре де Соуза Нето, электронная почта: [email protected]

Мария Селеста Нуньес Мело, электронная почта: мос.liamg @ olemlec.

Раймундо Фернандес де Араужо младший, электронная почта: [email protected]

Андреза Консейсао Верас де Агиар Герра, электронная почта: [email protected]

Юлиана Сильва де Медейрос, электронная почта: [email protected]

Герлан Коэльо Бернардо Герра, электронная почта: [email protected]

Ссылки

1. Баптиста М.М., Рамос М.А., де Альбукерке UP, Коэльо-де-Соуза Г., Риттер MR. Традиционные ботанические знания рыбаков-кустарей на юге Бразилии.J Ethnobiol Ethnomed. 2013; 9: 54. DOI: 10.1186 / 1746-4269-9-54. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Аморим А.С., Лима С.К., Ховелл А.М., Миранда А.Л., Резенде С.М. Антиноцицептивная и гипотермическая оценка эфирного масла листьев и изолированных терпеноидов из Eugenia uniflora L. (Brazilian Pitanga) Phytomedicine. 2009. 16 (10): 923–928. DOI: 10.1016 / j.phymed.2009.03.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Медейруш М.Ф., да Фонсека В.С., Андреата Р.Х. Plantas medicinais e seus usos pelos sitiantes da Reserva Rio das Pedras, Mangaratiba, RJ, Brasil.Бюстгальтеры Acta Bot. 2004. 18: 391–399. DOI: 10.1590 / S0102-33062004000200019. [CrossRef] [Google Scholar] 5. de Santana BF, Voeks RA, Funch LS. Этномедицинское обследование бордового сообщества в тропических лесах Атлантики Бразилии. J Ethnopharmacol. 2016; 181: 37–49. DOI: 10.1016 / j.jep.2016.01.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Brasileiro BG, Pizziolo VR, Raslan DS, Jamal CM, Silveira D. Скрининг антимикробной и цитотоксической активности некоторых бразильских лекарственных растений, используемых в районе Говернадор Валадарес.Rev Bras Ciênc Farm. 2006; 42: 195–202. DOI: 10.1590 / S1516-93322006000200004. [CrossRef] [Google Scholar] 7. Раттманн Ю.Д., де Соуза Л.М., Малькевич-Пайва С.М., Дартора Н., Сассаки Г.Л., Горин П.А., Якомини М. Анализ флавоноидов из листьев Eugenia uniflora и его защитный эффект против сепсиса мышей. Evid Based Complement Alternat Med. 2012; 2012: 623940. DOI: 10.1155 / 2012/623940. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Schumacher NS, Colomeu TC, de Figueiredo D, Carvalho Vde C, Cazarin CB, Prado MA, Meletti LM, Zollner Rde L.Идентификация и антиоксидантная активность экстрактов листьев Eugenia uniflora. Характеристика противовоспалительных свойств водного экстракта на проявление диабета в экспериментальной модели антиоксидантов спонтанного диабета 1 типа (мыши NOD) (Базель) 2015; 4 (4): 662–680. DOI: 10.3390 / antiox4040662. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9. Тейшейра Л.А., Ресенде Калифорния, Ормонд Л.Р., Розенбаум Р., Фигейредо А.М., де Ленкаср Х., Томаш А. Географическое распространение эпидемического клона мультирезистентного Staphylococcus aureus в Бразилии.J Clin Microbiol. 1995. 33 (9): 2400–2404. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. CLSI CaLSI. Методы испытаний на чувствительность к противомикробным препаратам при разведении бактерий, которые растут в аэробных условиях; Утвержденный стандарт — девятое издание. M07A9. 2012. с. 32. [Google Scholar] 11. Рибейро РА, Флорес Калифорния, Кунья ФК, Феррейра Ш. IL-8 вызывает миграцию нейтрофилов in vivo по клеточно-зависимому механизму. Иммунология. 1991. 73 (4): 472–477. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Krawisz JE, Sharon P, Stenson WF.Количественный анализ острого кишечного воспаления на основе активности миелопероксидазы — оценка воспаления на моделях крыс и хомяков. Гастроэнтерология. 1984. 87 (6): 1344–1350. [PubMed] [Google Scholar] 13. Андерсон ME. Определение глутатиона и дисульфида глутатиона в биологических образцах. Методы Энзимол. 1985. 113: 548–555. DOI: 10.1016 / S0076-6879 (85) 13073-9. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Esterbauer H, Cheeseman KH. Определение продуктов перекисного окисления альдегидных липидов: малонового альдегида и 4-гидроксиноненаля.Методы Энзимол. 1990; 186: 407–421. DOI: 10.1016 / 0076-6879 (90) 86134-H. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Сафие-Гарабедян Б., Пул С., Олчорн А., Винтер Дж., Вульф С.Дж. Вклад интерлейкина-1 бета в вызванное воспалением повышение уровней фактора роста нервов и воспалительную гипералгезию. Br J Pharmacol. 1995. 115 (7): 1265–1275. DOI: 10.1111 / j.1476-5381.1995.tb15035.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 16. Кендалл С., Ионеску-Матиу И., Дресман Г.Р. Использование системы биотин / авидин для увеличения чувствительности твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) J Immunol Methods.1983; 56 (3): 329–339. DOI: 10.1016 / S0022-1759 (83) 80022-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Кураиши Ю., Харада Ю., Аратани С., Сато М., Такаги Х. Раздельное участие спинномозговой норадренергической и серотонинергической систем в морфиновом обезболивании: различия в механических и термических болеутоляющих тестах. Brain Res. 1983. 273 (2): 245–252. DOI: 10.1016 / 0006-8993 (83)-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Костер Р., Андерсон М., Дебир Э. Дж. Уксусная кислота для скрининга анальгетиков. Fed Proc. 1959; 18 (1): 412.[Google Scholar] 19. Du LY, Zhao M, Xu J, Qian DW, Jiang S, Shang EX, Guo JM, Liu P, Su SL, Duan JA и др. Идентификация метаболитов мирицитрина, продуцируемых кишечными бактериями человека in vitro, с использованием ультраэффективной жидкостной хроматографии / квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии. Мнение эксперта Drug Metab Toxicol. 2014; 10 (7): 921–931. DOI: 10.1517 / 17425255.2014.4. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 20. Эденхардер Р., Грюнхаге Д. Способность флавоноидов поглощать свободные радикалы как механизм защиты от мутагенности, вызванной трет-бутилгидропероксидом или гидропероксидом кумола в Salmonella typhimurium TA102.Mutat Res. 2003. 540 (1): 1–18. DOI: 10.1016 / S1383-5718 (03) 00114-1. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Chen W, Feng L, Shen Y, Su H, Li Y, Zhuang J, Zhang L, Zheng X. Мирицитрин подавляет опосредованную акриламидом цитотоксичность в клетках Caco-2 человека, предотвращая окислительный стресс. Biomed Res Int. 2013; 2013: 724183. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22. Домитрович Р., Рашед К., Цвиянович О., Владимир-Кнежевич С., Шкода М., Висник А. Мирицитрин проявляет антиоксидантную, противовоспалительную и антифибротическую активность у мышей, отравленных тетрахлорметаном.Chem Biol Interact. 2015; 230: 21–29. DOI: 10.1016 / j.cbi.2015.01.030. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Kim HH, Kim DH, Kim MH, Oh MH, Kim SR, Park KJ, Lee MW. Компоненты флавоноидов в листьях Myrica rubra sieb. et zucc. с противовоспалительным действием. Arch Pharm Res. 2013. 36 (12): 1533–1540. DOI: 10.1007 / s12272-013-0147-х. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Shimosaki S, Tsurunaga Y, Itamura H, Nakamura M. Противоаллергический эффект флавоноида мирицитрина из экстрактов листьев Myrica rubra in vitro и in vivo.Nat Prod Res. 2011. 25 (4): 374–380. DOI: 10.1080 / 14786411003774320. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. Meotti FC, Luiz AP, Pizzolatti MG, Kassuya CA, Calixto JB, Santos AR. Анализ антиноцицептивного эффекта флавоноида мирицитрина: доказательства роли путей L-аргинин-оксид азота и протеинкиназы C. J Pharmacol Exp Ther. 2006. 316 (2): 789–796. DOI: 10.1124 / jpet.105.0
. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 26. Семвал Д.К., Семвал Р.Б., Комбринк С., Вилджоен А. Мирицетин: диетическая молекула с разнообразной биологической активностью.Питательные вещества. 2016; 8 (2): 90. DOI: 10.3390 / nu8020090. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. Lee KW, Kang NJ, Rogozin EA, Kim HG, Cho YY, Bode AM, Lee HJ, Surh YJ, Bowden GT, Dong Z. Мирицетин — новый природный ингибитор трансформации опухолевых клеток и MEK1. Канцерогенез. 2007. 28 (9): 1918–1927. DOI: 10,1093 / carcin / bgm110. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28. Ичимацу Д., Номура М., Накамура С., Моритани С., Йокогава К., Кобаяши С., Нисиока Т., Миямото К. Взаимосвязь между структурой и активностью флавоноидов для ингибирования индуцированной эпидермальным фактором роста трансформации клеток JB6 Cl 41.Mol Carcinog. 2007. 46 (6): 436–445. DOI: 10.1002 / mc.20292. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Хефти А. Относительный гнотобиоз: возможность изучения заболеваний пародонта у крыс. SSO Schweiz Monatsschr Zahnheilkd. 1979. 89 (7): 689–698. [PubMed] [Google Scholar] 30. Мори М., Ито Н. Животные, используемые в качестве моделей в стоматологии: крысы ODU в качестве модели для изучения заболеваний пародонта. Джиккен Добуцу. 1978. 27 (2): 200–202. [PubMed] [Google Scholar] 31. S-MS FTS, Paula JR, CarmoFilho JR, Pimenta FC. Антимикробная активность неочищенного этанольного экстракта и фракций из листьев Eugenia uniflora против Pseudomonas aeruginosa.Lat Am J Pharm. 2009; 28 (6): 8. [Google Scholar] 32. Bouzada MLM, Fabri RL, Nogueira M, Konno TUP, Duarte GG, Scio E. Антибактериальный, цитотоксический и фитохимический скрининг некоторых традиционных лекарственных растений в Бразилии. Pharm Biol. 2009. 47 (1): 44–52. DOI: 10.1080 / 13880200802411771. [CrossRef] [Google Scholar] 33. Фадейит М.О., Акпан Ю.Е. Антибактериальная активность экстрактов листьев Eugenia uniflora Linn. (Синоним Stenocalyx michelli Linn.) Myrtaceae. Phytother Res. 1989. 3 (4): 154–155. DOI: 10.1002 / ptr.2650030409. [CrossRef] [Google Scholar] 34. Холец Ф. Б., Пессини Г. Л., Санчес Н. Р., Кортез Д. А., Накамура К. В., Филхо Б. П.. Скрининг некоторых растений, используемых в бразильской народной медицине для лечения инфекционных заболеваний. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2002. 97 (7): 1027–1031. DOI: 10.1590 / S0074-02762002000700017. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Fiúza TS, Sabóia-Morais SM, Paula JR, Tresvenzol LMF, Pimenta FC. Оценка антимикробной активности неочищенного этанольного экстракта листьев Eugenia uniflora L. Rev Ciênc Farm Básica Apl.2008; 29 (3): 6. [Google Scholar] 36. Borges A, Ferreira C, Saavedra MJ, Simoes M. Антибактериальная активность и механизм действия феруловой и галловой кислот против патогенных бактерий. Microb Drug Resist. 2013. 19 (4): 256–265. DOI: 10.1089 / mdr.2012.0244. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Энгельс С, Шибер А, Ганцле МГ. Спектры ингибирования и режимы антимикробного действия галлотанинов из ядер манго (Mangifera indica L.) Appl Environ Microbiol. 2011. 77 (7): 2215–2223. DOI: 10.1128 / AEM.02521-10.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39. Cunha TM, Verri WA, Jr, Silva JS, Poole S, Cunha FQ, Ferreira SH. Каскад цитокинов опосредует механическую воспалительную гиперноцицепцию у мышей. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2005; 102 (5): 1755–1760. DOI: 10.1073 / pnas.04002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Лангерман Л., Заковски М.И., Пискун Б., Грант Г.Дж. Горячая пластина по сравнению с движением хвостом: оценка острой толерантности к непрерывному вливанию морфина на модели крыс.J Pharmacol Toxicol Methods. 1995. 34 (1): 23–27. DOI: 10.1016 / 1056-8719 (94) 00077-H. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Яницки П., Либич Дж. Обнаружение антагонистической активности наркотических анальгетиков в тесте на горячей пластине мышей. Pharmacol Biochem Behav. 1979. 10 (4): 623–626. DOI: 10.1016 / 0091-3057 (79)

-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Чо БО, Инь ХХ, Пак Ш, Бьюн Э.Б., Ха ХЙ, Чан Си. Противовоспалительная активность мирицетина из Diospyros lotus посредством подавления активации NF-kappaB и STAT1 и индукции Nrf2-опосредованного HO-1 в стимулированном липополисахаридом RAW264.7 макрофагов. Biosci Biotechnol Biochem. 2016; 80 (8): 1520–1530. DOI: 10.1080 / 051.2016.1171697. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Ли Дж. Х, Вон Дж. Х., Чхве Дж. М., Ча ХХ, Джанг Й. Дж., Пак С., Ким Х. Г., Ким Х. К., Ким Д. К.. Защитный эффект эллаговой кислоты на конканавалин A-индуцированный гепатит через toll-подобный рецептор и сигнальные пути митоген-активируемой протеинкиназы / ядерного фактора kappaB. J. Agric Food Chem. 2014. 62 (41): 10110–10117. DOI: 10.1021 / jf503188c. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Тонг Y, Чжоу XM, Ван SJ, Ян Y, Цао YL.Обезболивающая активность мирицетина, выделенного из Myrica rubra Sieb. et Zucc. листья. Arch Pharm Res. 2009. 32 (4): 527–533. DOI: 10.1007 / s12272-009-1408-6. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

Escape from Tarkov Woods Руководство по карте: все выдержки

Планируете экскурсию в лес? Беспокоитесь о плотной путанице деревьев и врагов? Знание того, что вы собираетесь делать, является ключом к получению максимальной отдачи от бега. Знание мест появления, добычи, местоположения и расстановки босса может сделать каждое прохождение намного более прибыльным.

Woods, вероятно, одна из наименее щадящих карт с ограниченным лутом, доступным для тех, кто не хочет сражаться за него, невероятно длинными линиями обзора и множеством листвы, чтобы скрыть врагов.

Выжить в любом рейде в этом хардкорном FPS может оказаться непростой задачей, если вы не готовы, поэтому ознакомьтесь с нашими руководствами по боеприпасам Escape from Tarkov, как их добыть на таможне и нашими общими советами о том, как сбежать из Таркова. Тем не менее, это кажется более заметным в лесу, где смерть может прийти через карту в один выстрел, который вы никогда не слышали.Собираетесь ли вы за Штурманом, другими игроками или просто выполняете несколько задач, это руководство предоставит вам все инструменты, необходимые для того, чтобы пережить вашу сегодняшнюю поездку в лес, и выйдет с некоторыми редкими видами оружия, доспехами и предметами для обмена. через выдержки Вудса.

Появляется ЧВК в Вудсе

Позиции вставки на Лесу следуют обычному шаблону Escape From Tarkov. Группа точек на восточной стороне, возле блокпостов, и еще одна группа на западе, возле окраин. Игроки, прибывающие на эти точки возрождения, должны будут перейти на противоположную сторону.Это означает, что вы путешествуете параллельно с теми, кто появился рядом, и сталкиваетесь лицом к лицу с теми, кто этого не сделал.

Появляется в Вест-Вудсе

Появляются на западной стороне карты, начинаются в точке извлечения западной границы и чередуются вдоль западной стены, с некоторыми рядом с дорожным блоком ООН возле северной стены. Эти точки возрождения находятся рядом с некоторыми из самых открытых частей карты, где каменистые траншеи расчищают деревья, оставляя длинные линии обзора и множество игроков, которые могут броситься вперед и совершить несколько ранних убийств на расстоянии.По возможности старайтесь держаться под деревьями и сохраняйте маскировку, чтобы сделать первый выстрел.

Восточный лес нерестится

Эти точки возрождения сосредоточены вокруг точки извлечения Окраины и простираются от Лодки до ZB-014. Если ваше возрождение близко к дому Scav и окраинам, имейте в виду, что игроки, вероятно, будут вращаться вокруг вашей позиции, однако густая листва может означать, что сражения будут происходить с близкого расстояния. Постарайтесь двигаться быстро, убедившись, что ваш путь свободен, или найдите место, где можно переночевать, и подождите, пока игроки пройдут мимо вас.Большинство врагов направляются к складу леса к востоку от этих мест возрождения, поэтому вы, скорее всего, встретите контакт с запада. Помните о Доме Диких, поскольку в нем обычно много ИИ Дикарей, с которым нужно бороться, но в первые минуты рейда, скорее всего, появятся немногие.

Точки извлечения карты Вудса

Есть много способов извлечь из леса, но некоторые требуют дополнительного планирования, чтобы убедиться, что они доступны. От ключей, дружелюбных дикарей и рублей у вас есть несколько способов обезопасить свою добычу.Менее пройденные пути могут обеспечить вам более спокойный выход, но они не всегда доступны, и чем больше у вас информации, тем более гибким вы можете быть в своем подходе. Не забудьте дважды нажать O и убедиться, что вы движетесь в правильном направлении.

Выдержка из блокпоста RUAF на Вудс

Находятся в самом северо-западном углу Вудса, есть большие металлические ворота. Этот экстракт доступен только в том случае, если на ржавой бочке горит зеленая ракета. К нему можно подойти с воды или по дороге через северную стену.

Вытяжка Factory Gate по лесу

На полпути вдоль северной стены с западной стороны, между блокпостом RUAF и блокпостом ООН, есть ворота, ведущие к фабрике. Этот отрывок может быть сложным в использовании, потому что он требует, чтобы вы взяли с собой дружественного игрока Scav, а его трудно найти.

Выдержка из блокпоста ООН в лесу

Напротив блокпоста RUAF, в верхней части самой западной стены, есть еще один большой блокпост.Эта вытяжка окружена большими стенами, что делает ее безопасным местом для выхода. Он всегда доступен тем, кто появился на восточной стороне.

Выдержка при спуске со скалы в лесу

В середине южной части карты есть небольшая трещина в большой горе. На поддоне деревянная обрешетка. Если вы взяли дорогой ледоруб Red Rebel, у вас есть паракорд и нет жилета, то этот отрывок вам доступен. Этот отрывок требует некоторого планирования и финансовых вложений, но позволит вам быстро сбежать с ближайшего лесного склада.

Вытяжка South V-Ex на Вудс

К востоку от выхода Cliff Descent Extraction есть дорога, ведущая от склада пиломатериалов к южной внешней стене. Здесь есть красные ворота, в которых припаркован внедорожник. Если внедорожник есть, то можно потратить три тысячи рублей на человека и получить от рейда до четырех ЧВК. Водителю требуется минута, чтобы уехать, и как только он будет использован, никто больше не сможет уйти этим путем.

Экстракт окраин в лесу

На восточной стороне карты есть главная дорога, ведущая на север.Вверху этой дороги есть большая территория, обозначенная как выемка на окраине, сосредоточенная вокруг ворот, рядом с которой стоит ветхая машина. Эта большая зона позволяет вам продолжать движение на протяжении всего обратного отсчета экстракции и имеет много листвы, чтобы вы были спрятаны.

ZB-014 вытяжка по Вудсу

На восточной стене, к югу от Дома Scav, есть бункер, встроенный в землю. Если добыча доступна, то снаружи будет видна зеленая засветка. Обратите внимание на скалы поблизости, так как они являются популярным местом для кемпинга.Как только вы войдете внутрь, вам понадобится ключ ZB-014, чтобы открыть внутреннюю дверь и сбежать.

ZB-016 вытяжка по Вудсу

К юго-западу, между разбившимся самолетом и Старой станцией, есть еще один бункер, встроенный в землю. Для этого не требуется ключ, но он доступен только при наличии зеленой вспышки.

Лут и Штурман, лесной босс

Woods — смертоносная карта с очень небольшим количеством добычи, чтобы компенсировать риск, с несколькими разбросанными ящиками и Scav в качестве единственных источников добычи за пределами Lumberyard.Если вы рискнете попасть на Лесной склад в надежде на крупный счет, то вы будете стрелять по Штурману, и игроки тоже будут охотиться за ним. Он — босс Scav Вудса и вооружен СВДС. У него больше очков жизни, чем у большинства Дикарей, и он смертельно точен. За ним следуют двое последователей по фамилии Светлоозерский. Они вооружены дальнобойным оружием с высоким уроном и большим количеством гранат. Штурман и его последователи не носят шлемов, но могут иметь бронежилет высокого уровня, поэтому рекомендуется прицеливаться в голову.Снаряжение, полученное от этих врагов, обычно является ценным, и у Штурмана может быть даже редкий ледоруб Red Rebel Ice Pick, который стоит миллионы на блошином рынке.

Уникальный предмет добычи Штурмана — его ключ, которым можно открыть ящик на лесном складе. Этот ящик расположен напротив центральной поленницы, на вершине шины. Внутри всегда есть редкие или супер редкие предметы, в том числе оружие.

{«schema»: {«page»: {«content»: {«headline»: «Путеводитель по карте Escape from Tarkov Woods: все выдержки», «type»: «guide», «category»: «escape-from- tarkov «},» user «: {» loginstatus «: false},» game «: {» publisher «:» Reverb «,» genre «:» MMO «,» title «:» Escape From Tarkov «,» genres » : [«MMO», «FPS»]}}}}

Как пропалывать сад

Возможно, одна из самых утомительных и утомительных задач, которую должен выполнить садовник, — это прополка.Прополка огорода необходима для получения максимально возможного урожая, но иногда может казаться, что сорняки растут быстрее, чем вы можете их вырвать. Знание того, как правильно пропалывать огород, необходимо для того, чтобы снизить частоту выполнения этой утомительной работы.

Как правильно пропалывать сад

Большое количество садоводов неправильно пропалывают свой огород. Это печальная правда, потому что, когда они неправильно пропалывают, они только делают больше работы для себя. Эффективную прополку огорода можно считать приобретенным навыком.

Ошибка номер один, которую делают многие садовники при прополке сада, заключается в том, что они неправильно вырывают сорняк. Многие садоводы подходят к прополке, используя технику захвата и захвата, при которой стебли сорняков ломаются, а корни остаются в земле. Большинство обычных сорняков могут быстро вырасти из своих корней. Итак, когда вы чувствуете, что нежелательные растения растут так быстро, как вы можете их отсеять, это, собственно, и происходит.

Правильный способ выдергивать сорняк — это щипать и тянуть.Прищипните сорняк у основания растения и осторожно, но твердо вытащите сорняк из земли. По крайней мере, некоторые (и, надеюсь, все) корни уйдут вместе с сорняком. Сначала вы можете увидеть, как многие сорняки ломаются о стебли, как в случае с методом захвата и захвата, но по мере того, как вы будете делать это чаще, вы почувствуете, насколько легкое движение удалит корни от земли, не сломав их. стебель.

Как часто нужно пропалывать сад?

Вы должны пропалывать свой сад примерно раз в неделю.Когда дело доходит до борьбы с сорняками в саду, важно выбрать время по нескольким причинам.

Во-первых, молодые сорняки с еще не сформировавшимися корнями намного легче вырывать из земли, чем полностью зрелые сорняки. Еженедельная прополка поможет вам легко избавиться от всех этих сорняков.

Во-вторых, частая прополка поможет избавиться от сложных сорняков. Как бы вы ни старались, у некоторых сорняков не удастся получить все корни. Например, у одуванчиков и растений чертополоха есть стержневые корни, которые могут опускаться на несколько футов (1 метр.). Постоянно выдергивая верхние несколько дюймов (8 см) корня, вы лишаете их способности получать солнечный свет, что в конечном итоге истощит их запасы энергии, и они, по сути, умрут от недостатка солнечного света.

В-третьих, вы не хотите, чтобы сорняки в вашем саду достигли зрелости. Когда сорняки переходят в семена, вы получаете еще сотни сорняков (и больше прополки!). Еженедельная прополка не даст сорнякам в вашем саду дать семена.

Лучшее время для прополки сада

Лучшее время для прополки сада — это в идеале после ливня или после полива из садового шланга.Земля будет влажной, и корни сорняков будут легче выходить из земли.

Прополка сада утром, до высыхания росы, также является хорошим временем для прополки. Хотя почва не будет такой мягкой, как после дождя или полива, она все равно будет мягче, чем во второй половине дня.

Влияние неочищенного экстракта Eugenia uniflora на морфогенез и секрецию гидролитических ферментов Candida albicans из полости рта реципиентов трансплантата почки | BMC Дополнительная медицина и терапия

  • 1.

    Чавес GM, Сантос ФП, Коломбо, штат Алабама. Сохранение мультифокальной колонизации одним генотипом ABC Candida albicans может предсказать переход от комменсализма к инфекции. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2012; 107: 198–204.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 2.

    Галл Ф, Колелла Джи, Ди Онофрио В, Россиелло Р., Анжелилло И.Ф., Лигуори Г. Candida spp. при раке полости рта и предраковых поражениях полости рта.New Microbiol. 2013; 36: 283–8.

    PubMed Google Scholar

  • 3.

    Музыка БЦ, Эпифанио РН. Обновленная информация о грибковых инфекциях полости рта. Dent Clin North Am. 2013; 57: 561–81.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 4.

    Hebbar PB, Pai A, Sujatha D. Микологические и гистологические ассоциации Candida в поражениях слизистой оболочки полости рта. J Oral Sci. 2013; 55: 157–60.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 5.

    Рунке М. Инфекция кожи и слизистых оболочек. В: Кальдероне Р.А., редактор. Кандидоз и кандидоз. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2002. с. 14–27.

    Google Scholar

  • 6.

    Чавес Г.М., Диниз М.Г., да Силва-Роша В.П., де Соуза Л.Б., Гондим Л.А., Феррейра М.А. и др. Видовое распространение и факторы вирулентности Candida spp. изолирован из ротовой полости реципиентов почечного трансплантата в Бразилии.Микопатология. 2013; 175: 255–63.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7.

    Маурья В., Шривастава А., Мишра Дж., Гайнд Р., Марак Р.С., Трипати А.К. и др. Орофарингеальный кандидоз и колонизация Candida у ВИЧ-положительных пациентов в северной Индии. J Infect Dev Ctries. 2013; 7: 608–13.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 8.

    Анвар К.П., Малик А., Субхан К.Х.Профиль кандидоза у ВИЧ-инфицированных. Иран J Microbiol. 2012; 4: 204–9.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 9.

    de la Rosa-García E, Mondragón-Padilla A, Irigoyen-Camacho ME, Bustamante-Ramírez MA. Поражения полости рта в группе пациентов с трансплантацией почки. Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 2005; 10: 196–204.

    PubMed Google Scholar

  • 10.

    Tyrzyk S, Sadlak-Nowicka J, Kedzia A, Bochniak M, Szumska-Tyrzyk B, Rutkowski P. Клинические и микологические исследования слизистой оболочки полости рта у пациентов, получавших циклоспорин A после трансплантации почки. Przegl Lek. 2004. 61: 467–72.

    PubMed Google Scholar

  • 11.

    Гюлеч А.Т., Демирбилек М., Сечкин Д., Джан Ф., Сарай Й., Сарифакиоглу Э. и др. Поверхностные грибковые инфекции у 102 реципиентов почечного трансплантата: исследование случай-контроль.J Am Acad Dermatol. 2003. 49: 187–92.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 12.

    Аль-Мохайя М.А., Дарвазех А., Аль-Худейр В. Грибковая колонизация полости рта и кандидоз полости рта у пациентов с трансплантатом почек: связь с использованием Мисвака. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 2002; 93: 455–60.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 13.

    King GN, Healy CM, Glover MT, Kwan JT, Williams DM, Leigh IM, et al.Факторы распространенности и риска, связанные с лейкоплакией, волосатой лейкоплакией, эритематозным кандидозом и гиперплазией десен у реципиентов почечного трансплантата. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 1994; 78: 718–26.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 14.

    Gow NA. Программа развития комменсализма Candida . Нат Жене. 2001; 45: 967–8.

    Артикул Google Scholar

  • 15.

    Менезес Т.О., Жилле Л.К., Менезес С.А., Фейтоса Р.Н., Исхак М.О., Исхак Р. и др. Факторы вирулентности изолятов Candida albicans из полости рта ВИЧ-1-положительных пациентов. Curr HIV Res. 2013; 11: 304–8.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 16.

    Чавес Г.М., да Силва В.П. Супероксиддисмутазы и глутаредоксины играют особую роль в ответе Candida albicans на окислительный стресс, вызванный химическими соединениями менадион и диамид.Mem Inst Oswaldo Cruz. 2012; 107: 998–1005.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 17.

    Vediyappan G, Dumontet V, Pelissier F, D’Enfert C. Гимнемические кислоты подавляют рост гиф и вирулентность в Candida albicans . PLoS One. 2013; 8: e74189.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 18.

    Адамс DJ. Хитиназы и глюканазы клеточной стенки грибов.Микробиология. 2004; 150: 2029–35.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 19.

    Gow NA, van de Veerdonk FL, Brown AJ, Netea MG. Candida albicans морфогенез и защита хозяина: отличить вторжение от колонизации. Nat Rev Microbiol. 2011; 10: 112–22.

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 20.

    Мерсон-Дэвис, Лос-Анджелес, Odds FC.Индекс морфологии для характеристики формы клеток Candida albicans . J Gen Microbiol. 1989; 135: 3143–52.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 21.

    Коричневый AJP. Экспрессия ростовых форм-специфических факторов во время морфогенеза у Candida albicans . В: Кальдероне Р.А., редактор. Кандидоз и кандидоз. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2002. с. 87–93.

    Google Scholar

  • 22.

    Чавес GM, Бейтс S, Маккаллум DM, Odds FC. Candida albicans GRX2, кодирующий предполагаемый глутаредоксин, необходим для вирулентности на мышиной модели. Genet Mol Res. 2007; 6: 1051–63.

    CAS PubMed Google Scholar

  • 23.

    Odds FC, Van Nuffel L, Gow NA. Выживаемость при экспериментальной инфекции Candida albicans зависит от условий выращивания инокулята, а также от животного-хозяина. Микробиология. 2000; 146: 1881–9.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 24.

    Mattei AS, Alves SH, Severo CB, Guazzelli S, Oliveira M, Severo LC. Определение продукции зародышевой трубки, фосфолипазы и протеиназы изолятами кровотока Candida albicans . Rev Soc Bras Med Trop. 2013; 46: 340–2.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 25.

    Ghannoum MA. Возможная роль фосфолипаз в вирулентности и грибковом патогенезе.Clin Microbiol Rev.2000; 13: 122–43.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 26.

    Ран Y, Ивабучи К., Ямазаки М., Цубои Р., Огава Х. Секретируемая аспарагиновая протеиназа из Candida albicans действует как хемоаттрактант для периферических нейтрофилов. J Dermatol Sci. 2013; 923: 00216–8.

    Google Scholar

  • 27.

    Димопулос Г., Антонопулу А., Армаганидис А., Винсент Дж. Л..Как подобрать противогрибковое средство тяжелобольным. J Crit Care. 2013; 28: 717–27.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 28.

    Мора-Дуарте Дж., Беттс Р., Ротштейн С., Коломбо А.Л., Томпсон-Мойя Л., Смиетана Дж. И др. Сравнение каспофунгина и амфотерицина B при инвазивном кандидозе. N Engl J Med. 2002; 19: 2020–9.

    Артикул Google Scholar

  • 29.

    Паке MJ, Fournier I, Barwicz J, Tancrède P, Auger M. Эффекты амфотерицина B на чистые и содержащие эргостерин или холестерин бислои дипальмитоилфосфатидилхолина с точки зрения 2H ЯМР. Chem Phys Lipids. 2002; 119: 1–11.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 30.

    Hamill RJ. Амфотерицин B, лекарственные формы: сравнительный обзор эффективности и токсичности. Наркотики. 2013; 73: 919–34.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 31.

    Wille MP, Guimarães T, Furtado GH, Colombo AL. Исторические тенденции в эпидемиологии кандидемии: анализ 11-летнего периода в больнице третичного уровня в Бразилии. Mem Inst Oswaldo Cruz. 2013; 3: 108.

    Google Scholar

  • 32.

    Переа С., Лопес-Рибот Ю.Л., Киркпатрик В.Р., Макати Р.К., Сантильян Р.А., Мартинес М. и др. Распространенность молекулярных механизмов устойчивости к азольным противогрибковым средствам у штаммов Candida albicans, демонстрирующих высокий уровень устойчивости к флуконазолу, выделенных от пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека.Антимикробные агенты Chemother. 2001; 45: 2676–84.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 33.

    Эрнандес С., Лопес-Рибо Дж. Л., Найвар Л. К., Маккарти Д. И., Боканегра Р., Грейбилл Дж. Р.. Устойчивость к каспофунгину у Candida albicans : корреляция клинического результата с лабораторным тестированием чувствительности трех изогенных изолятов, серийно полученных от пациента с прогрессирующим эзофагитом Candida .Антимикробные агенты Chemother. 2004. 48: 1382–3.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 34.

    Цанг П.В., Бандара Х.М., Фонг В.П. Пурпурин подавляет Candida albicans образование биопленок и развитие гиф. PLoS One. 2012; 7: e50866.

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 35.

    Исида К., Мелло JCP, Cortez DAG.Влияние дубильных веществ из Stryphnodendron adstringens на факторы роста и вирулентности Candida albicans . J Antimi Chemo. 2006; 58: 942–9.

    CAS Статья Google Scholar

  • 36.

    Amorim AC, Lima CK, Hovell AM, Miranda AL, Rezende CM. Антиноцицептивная и гипотермическая оценка эфирного масла листьев и изолированных терпеноидов из Eugenia uniflora L. (Brazilian Pitanga). Фитомедицина.2009; 16: 923–8.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 37.

    de Freitas Araújo MG, Pacífico M, Vilegas W, Dos Santos LC, Icely PA, Miró MS, et al. Оценка Syngonanthus nitens (Bong.) Ruhl. экстракт в качестве противогрибкового средства и при лечении кандидозного вульвовагинита. Med Mycol. 2013; 51: 673–82.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 38.

    Jothy SL, Zakariah Z, Chen Y, Sasidharan S. Исследования in vitro, in situ и in vivo антикандидозной активности экстракта семян Cassia fistula . Молекулы. 2012; 17: 6997–7009.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 39.

    Лю К., Луйтен В., Пелленс К., Ван И, Ван В., Тевиссен К. и др. Противогрибковая активность растений из традиционной китайской и народной медицины. J Ethnopharmacol. 2012; 143: 772–8.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 40.

    Brandão MG, Zanetti NN, Oliveira P, Grael CF, Santos AC, Monte-Mór RL. Бразильские лекарственные растения, описанные европейскими естествоиспытателями XIX века и в Официальной фармакопее. J Ethnopharmacol. 2008; 120: 141–8.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 41.

    Родригес К.А., Аморим Л.В., де Оливейра Дж. М., Диас С. Н., Мораес Д. Ф., Андраде Е. Х. и др. Эфирное масло Eugenia uniflora L. как потенциальное средство против лейшмании: влияние на Leishmania amazonensis и возможные механизмы действия.Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 279726.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 42.

    Santos KK, Matias EF, Tintino SR, Souza CE, Braga MF, Guedes GM, et al. Повышение противогрибковой активности противомикробных препаратов Eugenia uniflora L . J Med Food. 2013; 16: 669–71.

    Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 43.

    Ferreira MRA, Santiago RR, Langassner SZ, Mello JCP, Svidzinsk TIE, Soares LAL. Противогрибковая активность лекарственных растений северо-востока Бразилии. J Med Plant Res. 2013; 7: 3008–13.

    Артикул Google Scholar

  • 44.

    Лю Х., Колер Дж., Финк GRN. Подавление образования гиф в Candida albicans путем мутации гомолога STE12. Наука. 1994; 266: 1723–6.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 45.

    Цена MF, Wilkinson ID, Gentry LO. Пластинчатый метод определения активности фосфолипазы в Candida albicans . Sabouraudia. 1982; 20: 7–14.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 46.

    Дуглас К.М. Грибковый синтез бета (1,3) -D-глюкана. Med Mycol. 2001; 1: 55–66.

    Артикул Google Scholar

  • 47.

    Бернардес I, Фелипе Родригеш депутат, Бачелли Г.К., Мунин Э., Алвес Л.П., Коста М.С. Экстракт алоэ вера уменьшает как рост, так и образование зародышевых трубок Candida albicans . Микозы. 2012; 55: 257–61.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 48.

    Латха Л.Я., Дарах И., Джайн К., Сасидхаран С. Влияние экстракта метанола Vernonia cinerea без содержания метанола на рост и морфогенез Candida albicans . Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2011; 15: 543–9.

    PubMed Google Scholar

  • 49.

    Эрнст Дж. Ф. Факторы транскрипции в Candida albicans — экологический контроль морфогенеза. Микробиология. 2000; 146: 1763–74.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 50.

    Hube B, Naglik J. Candida albicans протеиназ: разгадывая загадку семейства генов. Микробиология. 2001; 147: 1997–2005.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 51.

    Мохан В., Баллал М. Активность протеиназы и фосфолипазы как факторы вирулентности у видов Candida , выделенных из крови. Rev Iberoam Micol. 2008; 25: 208–10.

    Артикул Google Scholar

  • 52.

    Patel M, Gulube Z, Dutton M. Эффект Dodonaea viscosa var. angustifolia на Candida albicans продукция протеиназы и фосфолипазы и адгезия к эпителиальным клеткам полости рта.J Ethnopharmacol. 2009. 124: 562–5.

    Артикул PubMed Google Scholar

  • ReWoRK — Переработка вольфрама из остатков рудного обогащения

    Переработка вольфрама из остатков рудного обогащения

    Традиционное извлечение вольфрама связано со значительным воздействием на окружающую среду. Среди прочего, большие количества остатков материала, которые накапливаются на крупномасштабных и часто загрязненных свалках материалов, образуются с использованием современных методов производства.Они часто содержат высокие концентрации вольфрама, который, однако, обычно остается неиспользованным. Немецко-бразильский проект ReWoRK изучает технологическую переработку отвального материала для вторичного использования и хотел бы внести свой вклад в сохранение природных ресурсов, а также снижение воздействия горнодобывающей промышленности на окружающую среду.

    Извлечение вольфрама из отвалов

    В течение долгого времени вольфрамовые руды, такие как шеелит, перерабатывались исключительно технологическими процессами с использованием значительного количества неиспользованного материала.Это привело к накоплению и хранению огромного количества мелкозернистых остатков технологического материала, так называемых хвостов. Они часто содержат достаточную концентрацию вольфрама, чтобы иметь экономическое и стратегическое значение. ReWoRK работает над технологическими инновациями для разработки ресурсосберегающих методов восстановления вольфрама.

    Профессор Фабио Хосе Пинейро Соуза (справа) из UFRN вместе с руководителем проекта Свеном Шульце, дипломированным инженером, на свалке в Мина Брежуи. © Свен Шульце, CUTEC

    В современных системах часто используются процессы, которые позволяют значительно повысить выход материала.Однако эти системы предъявляют особые требования к месту установки, например, часто требуют большого количества воды, что не позволяет экономично эксплуатировать их в засушливых и засушливых регионах. Обработка исходных материалов сложного состава, например, с содержанием молибдена, также не обязательно возможна с помощью этих методов. Из-за отсутствия адаптированных технологий обработки старые процессы обработки и, следовательно, более низкий выход материала все еще используются на некоторых объектах.

    Проект ReWoRK направлен на устранение этого пробела в исследованиях и предоставление подходящих технологий для извлечения ранее неиспользованного содержания вольфрама.С этой целью партнерская сеть охватывает всю цепочку создания стоимости от разведки сырья (BGR) через рудники (MTS) и исследовательские объекты (CUTEC, UFRN, EEMA) до производства и переработки продукции (HST). В проекте участвуют бразильские и немецкие партнеры.

    Разработка процессов

    Целью проекта является, прежде всего, восполнить пробел в технологических исследованиях обработки отвального материала. На первом этапе будут исследованы свалки в Европе и Бразилии и взяты обширные пробы.Дальнейшими шагами являются разработка процесса в лаборатории, производство концентратов вольфрамовой руды с положительным прогнозом рентабельности, а также строительство функциональной демонстрационной установки.

    Внедрение в нескольких местах

    Результаты проекта будут реализованы в Бразилии (Currais Novos), а также в других возможных местах. Для этого непосредственно на площадках рудника будут установлены технологии переработки концентрата вольфрамовой руды.В Бразилии по результатам проекта также запланирована модернизация используемых до сих пор технологий. В Германии, с другой стороны, при необходимости планируются корректировки для обработки полученных концентратов. В долгосрочной перспективе разработанные технологии переработки могут также способствовать повышению эффективности будущих вольфрамовых рудников на других объектах.

    Отбор проб хвостов (мелкой фракции) для предварительных исследований инж. Л. Гомес Гарсия (EEMA) (справа) и профессор Соуза (UFRN), Мина Брежуи 2018.© Свен Шуле, CUTEC.

    Повышение ресурсоэффективности

    Используя вторичные материалы и увеличивая выход при первичной добыче, можно повысить эффективность использования ресурсов, тем самым сохраняя природные ресурсы. Из-за разрушения свалок, если дополнительные побочные продукты извлекаются во время переработки, высвобожденные участки могут быть возвращены для другого использования или восстановлены. Если в отвале будут находиться другие и, возможно, критические тяжелые металлы, их можно также удалить из материала, что предотвратит загрязнение окружающей среды в будущем.При использовании хвостов для добычи вольфрама следует ожидать дальнейшего значительного снижения воздействия на окружающую среду, поскольку материал извлекается и, следовательно, легко доступен, что делает ненужной сложную добычу. Но снижение воздействия на окружающую среду также следует ожидать за счет повышения эффективности первичной добычи.

    Со стратегической точки зрения надежность снабжения Германии может быть повышена за счет расширения доступных технологий и исходных материалов для производства вольфрама.

    Cherry B Complex Energy & Immunity Support

    Свекла

    Свекла — это основная часть растения свеклы. Это один из нескольких культурных сортов Beta vulgaris , выращиваемых для получения съедобных стержневых корней и листьев (называемых свекольной зеленью). Темно-красный цвет свеклы является результатом присутствия определенного типа пигмента беталаина (бетацианинов). Свекла также содержит бетаин и неорганические нитраты.

    Беталаиновые пигменты


    Глубокий красный цвет свеклы обусловлен присутствием пигментов беталаина.Есть две категории бетацианов, одна из которых отвечает за эти красноватые или фиолетовые цвета — бетацианины. Бетанин — это пример бетацианинов, присутствующих в красной свекле.

    Бетаин (триметилглицин (TMG))


    Бетаин — это встречающееся в природе вещество и аминокислота, содержащаяся в растениях и особенно в свекле. Бетаин создается холином в сочетании с аминокислотой глицином.

    Пищевая селитра


    Нитрат — это неорганическое соединение, состоящее из азота и кислорода, которое естественным образом содержится в почве и воде.Нитраты в нашем рационе поступают как из пищи, так и из питьевой воды, но самый высокий уровень диетических нитратов содержится в овощах.

    Вишня Монморанси

    Вишня монморанси — разновидность красной, кислой вишни — Prunus cerasus . Они выращиваются в Канаде, Франции и США и являются частью светло-красного сорта вишни Amarelle , а не темно-красного сорта Morello .

    Витамин B6

    Витамин B6 способствует нормальному функционированию иммунной системы, регуляции гормональной активности, нормальному синтезу цистеина, нормальному энергетическому метаболизму, нормальному метаболизму гомоцистеина, нормальному метаболизму белков и гликогена и снижению усталости и утомляемости. Нажмите здесь и здесь, чтобы получить научные заключения EFSA.

    Куркума и куркумин

    Куркума — корневищное травянистое многолетнее растение ( Curcuma longa ) из семейства имбирных Zingiberaceae.Родом из южной Азии.

    Если корневища (корни) не используются в свежем виде, их кипятят в течение 30-45 минут, а затем сушат в горячих печах, после чего их измельчают в темно-оранжевый / желтый порошок, который обычно используется в Бангладеш в качестве натурального красителя и вкусной специи. , Индийской, иранской и пакистанской кухни, а также для окрашивания.

    Порошок корня куркумы давно используется практикующими аюрведами, в основном из-за его основного компонента — куркумина.В последнее время он становится все более популярным в западном мире для использования как в пищевых продуктах, так и в пищевых добавках после большого количества сообщений на телевидении, в журналах и на радио.

    Черный перец

    Черный перец ( Piper nigrum ) — это цветущая виноградная лоза из семейства Piperaceae , выращиваемая для получения плодов, которые обычно сушат и используют в качестве приправы и приправы. В сушеном виде плод известен как перец горошком. В свежем и полностью созревшем виде он составляет примерно 5 миллиметров (0.20 дюймов) в диаметре, темно-красного цвета и, как и все костянки, содержит одно семя.

    Перец и полученный из него молотый перец можно описать просто как перец или, точнее, как черный перец (приготовленные и сушеные незрелые плоды), зеленый перец (сушеные незрелые плоды) и белый перец (семена спелых плодов). Пиперин — это алкалоид, отвечающий за остроту черного перца.

    границ | Бактерии ризоплана и виды растений совместно определяют опосредованный фосфором эффект микробного наследия

    Введение

    Фосфор (P) необходим для роста и развития растений (Raghothama, 1999; Vance et al., 2003), и часто является ограничивающим питательным веществом в сельскохозяйственных почвах по всему миру (Sattari et al., 2012). Однако большая часть фосфора, вносимого в агроэкосистемы в виде минеральных удобрений, навоза и отходов, сохраняется в почве в виде неорганического и органического фосфора, который редко доступен для растений из-за высокой сорбционной способности большинства почв. низкая эффективность поглощения и использования фосфора большинством сельскохозяйственных культур (Condron et al., 2013). Следовательно, значительная часть внесенного фосфора накапливается в почве в виде остаточного фосфора.Этого запаса унаследованного фосфора в сельскохозяйственных почвах может хватить для поддержания урожайности сельскохозяйственных культур в мире в течение примерно 100 лет без снижения урожайности, если он будет доступен (Zhu et al., 2018). Много усилий направлено на повышение доступности этого унаследованного P для сельскохозяйственных культур (Menezes-Blackburn et al., 2018). Почвенные микроорганизмы, в частности микробиота корней и ризосферы, привлекают большое внимание, поскольку эти микробиомы играют ключевую роль в определении здоровья и продуктивности растений (Berendsen et al., 2012).

    Многие почвенные бактерии и грибы обладают значительным потенциалом повышения биодоступности и использования остаточных источников фосфора. Исследования были посвящены влиянию удобрения P на разнообразие и состав почвенных микробных сообществ, а также пониманию механизмов, с помощью которых микробы добывают или поглощают почвенный P (Richardson and Simpson, 2011). Фосфорное удобрение значительно увеличило разнообразие и изобилие генов, участвующих в цикле P (Su et al., 2015).Микробы, участвующие в цикле P, выделяют фосфатазы (Tabatabai, 1994), чтобы мобилизовать ортофосфат. Некоторые микробы содержат гены, индуцируемые фосфатным голоданием (psi), и действуют как часть регулона фосфатного голодания. Эти микробы обладают способностью синтезировать фосфомоноэстеразы и фосфодиэстеразы (Вершинина, Знаменская, 2002). Oxalobacteraceae (в основном Massilia и Herbaspirillum ), Klebsiella и некоторые виды Burkholderia и Bacillus были обогащены почвой с фосфатно-модифицированной почвой по сравнению с почвой, трижды обработанной суперфосфатом.

    Происходит переход от основной массы почвы через ризосферу к ризоплану, при этом ризоплан действует как регулирующие ворота для проникновения микробов в хозяина (Van der Heijden and Schlaeppi, 2015). Сообщалось о четкой иерархической фильтрации микробиоты соей и люцерной в различных ризокомпартментах, например, клубеньковых и корневых эндофитах, ризосфере и корневой зоне (Xiao et al., 2017). Напротив, бактериальные сообщества в клубеньках и корнях Lotus japonicus имели параллельный, но не последовательный характер (Zgadzaj et al., 2016). В настоящее время у нас нет прогностической основы для понимания биотических и абиотических факторов, определяющих наблюдаемые различия в микробиоме ризосферы. Как фильтрация окружающей среды, так и характеристики растений могут совместно определять дифференциацию корневой микробиоты. Недавнее исследование показало, что структура сообщества корневого микробиома координируется благодаря взаимодействиям между голоданием растений P и иммунными реакциями растений (Castrillo et al., 2017). Следовательно, понимание того, насколько и как различия в микробиомах корней и ризосферы реагируют на градиенты P-стресса, имеет решающее значение для расшифровки природы растительно-микробных взаимодействий в ответ на поступление P.

    Микробиомы корней эволюционируют вместе с растениями. Микробиота корней постоянно влияет на рост и здоровье растений (Richardson and Simpson, 2011; Dombrowski et al., 2017; Hartman et al., 2017). Как в агро-, так и в естественных экосистемах предыдущее растение часто оставляет наследство для последующего роста (Van der Putten et al., 2013). Отрицательная обратная связь между растениями и почвой (PSF) часто наблюдается в непрерывной монокультуре, вызванной накоплением определенных патогенов. Отрицательная обратная связь может быть устранена или преобразована в положительную PSF при чередовании растений с другими культурами (Ocimati et al., 2017). Одновременно в условиях дефицита питательных веществ растения могут предпочтительно выбирать корневую микробиоту, чтобы способствовать усвоению питательных веществ хозяином, что также приводит к положительному PSF (Revillini et al., 2016). При достаточном снабжении питательными веществами Р-солюбилизирующие бактерии уменьшались в ризосфере (Mander et al., 2012). Зависимые от культуры исследования взаимодействия между поставкой фосфора и микробами показали, что минерализация фосфатов была выше в почве с низким содержанием фосфора, чем в почве с высоким содержанием фосфора (Mander et al., 2012). Эти результаты предполагают, что долгосрочные поправки на питательные вещества могут отбирать микробы, которые по-разному влияют на приспособленность микробов и растения-хозяина.Нам необходимо понять, изменились ли микробные сообщества, связанные с культурами, в результате удобрения P, и не ослабляются ли потенциальные полезные взаимодействия между растениями и связанными с ними микробами со временем из-за диверсификации микробной ниши.

    В этом исследовании нас интересовало, влияло ли и в какой степени P-опосредованное удобрение микробное наследие на последующее кон- или гетероспецифичное поглощение P растениями. Кукуруза выращивается в монокультуре в течение 10 лет, и мы выбрали кукурузу и клевер в качестве растений-хозяев, поскольку образующие клубеньки бобовые имеют тенденцию вести себя иначе, чем виды злаков из-за их симбиотических взаимоотношений с различными бактериями и высокой потребности в фосфоре для фиксации азота со стороны растений. Атмосфера.Планы посевов обычно основаны на взаимодополняемости функциональных признаков наземных растений при игнорировании взаимодействий между растениями и микробами. Интеграция микробной динамики в системы земледелия в конечном итоге поможет прямо или косвенно манипулировать микробными сообществами для повышения эффективности использования фосфора и поддержания урожайности сельскохозяйственных культур.

    Мы выдвинули гипотезу, что: (1) по сравнению с почвенным наследием P, различные виды растений оказывают более сильное влияние на выбор микробных сообществ в ризоплане и ризосфере; (2) микробиота ризосферы потенциально больше связана с мобилизацией фосфора при низком уровне фосфора или более связана с углеродным метаболизмом при более высоком содержании фосфора; и (3) микробные сети в ризоплане характеризуются более функционально взаимосвязанными операционными таксономическими единицами (OTU), чем таковые в ризосфере и основной массе почвы.Сетевой анализ использовался для изучения организации и динамики микробных ниш (Duran-Pinedo et al., 2011; Faust and Raes, 2012).

    Материалы и методы

    Место отбора проб и подготовка почвы

    В этом исследовании использовалась почва, полученная в результате длительного испытания удобрения P на экспериментальной станции Шанчжуан Китайского сельскохозяйственного университета в Пекине (39 ° 59′N, 116 ° 17′E). Климат теплый и полувлажный со средней годовой температурой 13,2 ° C и количеством осадков от 213 до 840 мм.Тип почвы — известняковая аллювиальная почва с типичным для региона илистым суглинком. Испытание было начато в 2007 году и состояло из градиента внесения фосфорных удобрений с ежегодным внесением 0, 11, 22, 33, 44, 66 и 131 кг P га –1 в виде суперфосфата кальция. Семена яровой кукурузы (сорт Zheng dan 958; выращивается как монокультура) ежегодно высевали в мае.

    Пробы почвы (инокулят) были отобраны с делянок. Здесь мы использовали I 0 (ноль P), I 33 (33 кг P га –1 ) и I 131 (131 кг P га –1 ).Всего было собрано 12 почвенных посевов (3 уровня удобрения × 4 повтора). Почвенный субстрат, используемый для эксперимента, собирали с верхних 20 см того же эксперимента, но с участков без кукурузы. Почву сушили на воздухе, просеивали (2 мм) и стерилизовали гамма-излучением (> 25 кГрей, Пекинский исследовательский центр по применению радиации). Физико-химические свойства почвы: содержание органического углерода 11,5 г кг –1 , общий N 0,72 г кг –1 , доступный N 8,5 мг кг –1 (NO 3 и NH 4 + ), Ольсен-П 3.5 мг кг –1 , NH 4 OAc-K 32,3 мг кг –1 и pH 8,2 (1: 5, от почвы к воде). Минеральные питательные вещества были тщательно смешаны с почвой в следующих концентрациях (–1 мг сухой почвы): 100 N в виде NH 4 NO 3 , 5 и 30 P (P 5 и P 30 ) как KH 2 PO 4 и 100 K как K 2 SO 4 . Добавленные питательные вещества тщательно перемешали с почвой.

    Экспериментальный проект

    Эксперимент с горшком проводился в теплице Китайского сельскохозяйственного университета.Был использован четырехфакторный эксперимент с кукурузой и клевером, тремя почвенными инокулятами (I 0 , I 33 и I 131 ), цельной почвой или стерилизованной, и двумя уровнями P (P 5 и Р 30 ). Каждую обработку проводили в четырех повторах, что дало 96 горшков. Блок-схема основных экспериментальных установок показана на рисунке 1.

    Рисунок 1. Блок-схема эксперимента.

    Сбор урожая и отбор проб

    Кукуруза была собрана через 65 дней.Клевер собирали дважды: через 105 дней на P 5 и через 85 дней на P 30 . В обработке P 5 рост клевера был очень медленным, и только через 105 дней они были в том же онтогенезе, что и в P 30 .

    Убирали отдельно побеги и корни кукурузы и клевера. Образцы побегов нагревали при 105 ° C в течение 30 минут, а затем сушили в печи (72 часа, 75 ° C), взвешивали и измельчали ​​для анализа питательных веществ. Концентрацию фосфора в растении определяли молибдо-ванадофосфатным методом после того, как образцы переваривали концентрированным H 2 SO 4 и H 2 O 2 .

    Грунты, слабо прикрепленные к корням растений, удаляли легким встряхиванием, что считалось сыпучим грунтом. Почвы, тесно связанные с корнями растений, отделяли с помощью интенсивного вихря (Mobio, 13111-v-220, США) с 50 мл стерильного физиологического раствора с фосфатным буфером (PBS). Корни интенсивно перемешивали стерильными щипцами, чтобы удалить всю почву с поверхности корня. Мы центрифугировали (Sigma-Aldrich, sigma3k15, Германия) этот раствор и считали осадок ризосферной почвой.После удаления всех почв корни помещали в пробирку с 15 мл PBS. Корни в пробирке обрабатывали ультразвуком в течение 30 с при частоте 50–60 Гц (выходная частота 42 кГц, мощность 90 Вт, ультразвуковая очистка, Branson Ultrasonics, США). Корни были удалены и отброшены, и мы центрифугировали раствор. Эта часть отложений считалась почвой ризоплана. Эффективность этой процедуры для удаления микробов с ризопланы на целых корнях, не обработанных ультразвуком, и корнях, обработанных трижды ультразвуком, была показана с помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM; дополнительный рисунок S1).

    Экстракция ДНК, амплификация гена 16S рРНК и секвенирование MiSeq

    Мы экстрагировали общую ДНК из трех отобранных ризокомпартментов (ризоплана, ризосфера и насыпные почвы) с помощью набора для быстрого спина ДНК ® (MP Biomedicals, Кливленд, Огайо, США) в соответствии с инструкциями производителя. Мы не исследовали эндосферу, так как ризоплан является сильным фильтром для микробных сообществ. Количество и качество образцов ДНК определяли с использованием спектрофотометра УФ-видимого света NanoDrop ND-1000 (NanoDrop Technologies, Уилмингтон, Делавэр, США).После экстракции ДНК образцы хранили при -20 ° C для высокопроизводительного анализа секвенирования.

    ДНК почвы амплифицировали и закодировали с помощью набора праймеров 338F и 806R. Праймеры 338F (5′-ACTCCTACGGGAGGC AGCAG-3 ‘) и 806R (5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’) нацелены на гипервариабельные области V4 – V5 бактериального гена рибосомной РНК 16S. Каждая уникальная последовательность штрих-кода была добавлена ​​к прямому праймеру в каждом образце. ПЦР проводили с 10 нг матричной ДНК, 0,8 мкл каждого праймера, оба по 5 мкМ, 4 мкл 5 × буфера FastPfu, 2 мкл 2.5 мМ dNTP, 0,4 мкл полимеразы FastPfu (TransGen Biotech, Пекин, Китай), доведенный до конечного объема 20 мкл с помощью ddH 2 O, и температурные условия были 95 ° C в течение 3 минут, 27 циклов по 95 ° C в течение 30 секунд, 55 ° C в течение 30 секунд и 72 ° C в течение 45 секунд расширения, затем 72 ° C в течение 10 минут. Затем продукты ПЦР очищали и смешивали в эквимолярных соотношениях для получения количественной библиотеки образцов ДНК, которую в дальнейшем использовали для секвенирования с адаптера. Наконец, секвенирование было проведено с использованием платформы Illumina MiSeq, и последовательности были отправлены в базу данных NCBI под номером доступа SUB3124089.Необработанные последовательности были демультиплексированы и отфильтрованы по качеству с использованием набора инструментов Quantitative Insights Into Microbial Ecology (QIIME) (версия 1.19). Праймеры удаляли, а последовательности с показателем качества <20 или любые усеченные считывания короче 50 п.н. удаляли. Затем OTU были сгруппированы на уровне сходства последовательностей 97% с использованием программы Usearch, которая обеспечивает кластеризацию, проверку химер и качественную фильтрацию в QIIME. Наконец, наиболее распространенная последовательность для каждой OTU была выбрана в качестве репрезентативной OTU, и таксономические аннотации были присвоены репрезентативной последовательности каждой OTU в базе данных 16S рРНК SILVA (SSU117 / 119) для бактерий (Yilmaz et al., 2014).

    Функциональное прогнозирование сообществ почвенных бактерий

    Чтобы лучше понять потенциальный функциональный вклад наблюдаемых сдвигов в микробном составе в ризоплане (ризоплан действует как критические ворота для контроля проникновения микробов в ткань хозяина), мы назначили функциональные профили для двух обработок P (P 30 и P 5 ) с использованием программного пакета PICRUSt (Langille et al., 2013). Этот метод оценивает количество геномных копий каждого семейства генов (KO) в OTU из образца окружающей среды на основе положения этих OTU в эталонной филогении полных микробных геномов.Назначения функциональных профилей были сделаны на основе частичных последовательностей гена 16S рРНК, и последовательности были картированы в эталонную филогению Greengenes 13_8 с использованием QIIME (Morrow et al., 2015). После функционального назначения полученные профили распространенности семейств генов в образцах были обобщены в KEGG Pathways с помощью PICRUSt. Таблица, содержащая распространенность функциональных генов для каждого образца в таблице численности KO и уровне подсистемы 3 ортологов KEGG, была загружена для анализа.

    Сетевой анализ

    OTU с относительно высокой численностью (> 300 последовательностей на OUT, всего 1781 OTU) были оставлены для сетевого анализа.SparCCs (разреженные корреляции для композиционных данных) были сконструированы для вывода бактериальных сетей взаимодействия OTU – OTU, как описано Faust et al. (2012), Hu et al. (2019) и Perez-Jaramillo et al. (2019). Как правило, значимость SparCC оценивалась с помощью теста перестановки с 999 перестановками случайных выборок в матрицах присутствия / отсутствия. SparCCs выше 0,5 или ниже -0,5 и статистическая значимость ( P <0,01) были извлечены и импортированы в сетевой анализ (Faust et al., 2012; Hu et al., 2019). Топология сетей рассчитывалась с помощью платформы Gephi. Визуализация сети совместного возникновения также была достигнута с помощью платформы Gephi (Bastian et al., 2009).

    Статистический анализ

    Существенные различия в концентрации фосфора и содержании кукурузы и клевера между различными инокулятами с разными уровнями фосфора и стерилизационной обработкой были проанализированы с использованием трехфакторного дисперсионного анализа с последующим анализом множественного сравнения Дункана с использованием SPSS 20.0 (SPSS, Inc., Чикаго, Иллинойс, США).

    OTU с низким содержанием удалялись, если у них не было в общей сложности не менее пяти считываний для всех образцов. Оценки α-разнообразия были основаны на матрицах обилия OTU и включали число OTU и разнообразие Шеннона-Винера, рассчитанное с помощью функционального разнообразия в пакете R Vegan (Hammer et al., 2001). Бактериальное β-разнообразие исследовали с помощью анализа сходства (ANOSIM) и пермутационного многомерного дисперсионного анализа (PERMANOVA) с использованием пакета R vegan (версия 3.3.1) с 999 перестановками (Андерсон, 2001). Анализ главных координат (PCoA) использовался для сравнения β-разнообразия между образцами на основе расстояния Брея-Кертиса. Это было выполнено в программном пакете R (версия 3.3.1) с использованием библиотеки «ape» (Paradis et al., 2004). ПЕРМАНОВА дисперсии β-разнообразия была проведена на основе расстояния Брея – Кертиса. Тернарные графики были нарисованы в R с использованием пакета vcd (Meyer et al., 2015). Был проведен ограниченный анализ главных координат (CAP), чтобы проверить величину дисперсии, объясняемую уровнем P и инокулятом в каждом ризокомпартменте двух видов растений, с функцией capscale пакета R (Oksanen et al., 2013). Чтобы оценить реакцию прогнозируемых профилей микробных функций на поступление субстрата P, мы реорганизовали данные, чтобы суммировать численность каждой прогнозируемой функции при обработке P 5 и P 30 отдельно. Программный пакет анализа метагеномных профилей (STAMP) был использован (Parks and Beiko, 2010) для сравнения предсказанных функциональных профилей различных субстратов P, поставляемых для каждого вида растений. P -значения были рассчитаны с использованием двустороннего точного критерия Фишера, в то время как доверительные интервалы были рассчитаны с использованием метода Ньюкомба – Уилсона, а поправка была сделана с использованием коэффициента ложных открытий Бенджамини – Хохберга (Benjamini and Hochberg, 1995).

    Результаты

    Выстрел P Content

    Доступные концентрации фосфора как в кукурузе, так и в клевере были значительно выше при P 30 , чем при P 5 . Не наблюдалось значительных различий в доступном P между различными обработками инокулята, за исключением того, что доступный P в кукурузе при P 5 при инокулировании I 131 был значительно выше, чем при инокулировании I 0 и I 33 (дополнительная таблица S1). Не наблюдалось значительных различий в концентрации P в побегах кукурузы и клевера между разными инокулятами и между обоими уровнями P (за исключением I 131 ).В целом, живой инокулят значительно увеличивал содержание P в побегах как кукурузы, так и клевера, за исключением того, что значительный положительный эффект уменьшался при P 30 для кукурузы. На обоих уровнях P содержание фосфора в побегах кукурузы при обработке I 131 было значительно выше, чем при обработке I 0 и I 33 (дополнительная таблица S1).

    Бактериальное альфа-разнообразие и структура сообщества (бета-разнообразие)

    После контроля качества было получено в общей сложности 6 180 927 высококачественных последовательностей со средним числом считываний на образец 37 234 (диапазон: 25 345–44 934) при средней длине считывания 437 п.н.Высококачественные считывания были сгруппированы в 7 132 микробных OTU с использованием ≥97% идентичности последовательностей. Только 30 OTU с низкой численностью (всего <5 считываний) были отброшены, что дало 7102 OTU для окончательного анализа.

    Было отмечено сильное влияние компартмента на бактериальное α-разнообразие в ризосфере как кукурузы, так и клевера ( P <0,001). Числа OTU и индексы Шеннона-Винера выявили аналогичный градиент разнообразия от ризопланы к массивной почве (рис. 2A, B), с ризопланой <ризосфера ≈ насыпной почвой в кукурузе и значительным увеличением разнообразия в порядке ризоплана <ризосфера <основная масса почва в растении клевера (Рисунки 2A, B).

    Рис. 2. Коробчатая диаграмма альфа-разнообразия бактериального сообщества в различных ризокомпартментах (ризоплан, ризосфера, объемная почва) растений кукурузы и клевера. (А) номер ОТУ; (B) Индекс Шеннона – Вайнера.

    Анализ основных координат всех выборок, основанный на различиях Брея-Кертиса, показал, что первые две оси объясняют 45,4% дисперсии, причем первая ось (объясненная дисперсия 26,0%) разделяет образцы по отсекам, а вторая ось (19.4%) по видам растений. И у кукурузы, и у клевера наблюдалась четкая дифференциация между различными ризокомпартментами (рис. 3), и это было дополнительно подтверждено анализом PERMANOVA, основанным на метрике расстояния Брея – Кертиса (кукуруза: R 2 = 0,440, P <0,001; клевер: R 2 = 0,306, P <0,001) (дополнительная таблица S2). По сравнению с корневищем, уровень подачи субстрата P (кукуруза: R 2 = 0,021, P = 0.009; клевер: R 2 = 0,025, P = 0,007) и инокулят (кукуруза: R 2 = 0,031, P = 0,010; клевер: R 2 = 0,027, P = 0,077) оказали гораздо более слабое влияние на бактериальные сообщества (рисунок 3 и дополнительная таблица S2). Структура бактериального сообщества в различных ризокомпартментах, на которую влияет уровень P, показала, что снабжение P в пополнении микробиоты ризосферы было сильнее для клевера, чем для кукурузы (Рисунок 4 и дополнительная таблица S3).Далее был проведен ограниченный анализ главных координат (CAP) на расстоянии Брея – Кертиса для количественной оценки дисперсии, относящейся к каждой экспериментальной переменной. При кондиционировании в ризокомпартменте бактериальные сообщества значительно различались между P 5 и P 30 (дополнительная таблица S4), и разница была более отчетливой для клевера, чем для кукурузы. Более того, бактериальные сообщества, основанные на метрике расстояния Брея-Кертиса между обработкой исходным и стерилизованным инокулятом, значительно различались (кукуруза: R 2 = 0.212, P = 0,001; клевер: R 2 = 0,142, P = 0,003; Дополнительный рисунок S2 и дополнительная таблица S5).

    Рисунок 3. Бактериальные сообщества в различных ризокомпартментах (ризоплане, ризосфере и массе) растений клевера и кукурузы. Графики анализа главных координат (PCoAs) расстояния Брея – Кертиса на основе OTU между всеми образцами. Дисперсия, объясняемая каждой осью ПК, указана в скобках.

    Рисунок 4. Бактериальные сообщества в различных ризокомпартментах (ризоплане, ризосфере и массе) растений клевера и кукурузы в ответ на уровни фосфора в субстрате. (A) Клевер ризоплан; (B) ризосфера клевера; (C) клеверная масса; (D) ризоплан кукурузы; (E) ризосфера кукурузы; и (F) кукуруза навалом. Графики анализа главных координат (PCoAs) расстояния Брея – Кертиса на основе OTU между всеми образцами. Дисперсия, объясняемая каждой осью ПК, указана в скобках.P5 и P30 представляли собой субстрат P удобрений с 5 и 30 мг P и кг — 1 почвы.

    Таксономическая характеристика бактериальных сообществ в различных ризокомпартментах

    Ризокомпартменты следовали четкой иерархической фильтрации. Мы наблюдали узкоспециализированные бактериальные сообщества ризопланов, характеризующиеся меньшим количеством ОТЕ, встречающихся с высокой относительной численностью.

    Proteobacteria были значительно обогащены ризопланом обоих растений (кукуруза: 72.3%; клевер: 61,2%) и ризосфера (кукуруза: 56,1%; клевер: 48,9%). Bacteroidetes также были обогащены в ризосфере. Напротив, другие типы, включая Actinobacteria , Acidobacteria , Chloroflexi , Gemmatimonadetes , были истощены в ризосфере и ризоплане (дополнительный рисунок S3).

    Чтобы идентифицировать индикаторные OTU в ризоплане и ризосфере, мы использовали линейный модельный анализ для определения обогащенных бактериальных OTU (рис. 5A, B).У кукурузы 284 и 236 OTU были значительно обогащены ризопланом и ризосферой по сравнению с массивной почвой (рис. 5C), в то время как 84 OTU были почти исключительно приурочены к ризоплану, с их относительной численностью 46,5, 0,4 и 0,2% в почве. ризоплан, ризосфера и насыпной грунт (рис. 5E). По сравнению с насыпной почвой 135 и 103 OTU были значительно обогащены ризопланом и ризосферой клевера (рис. 5D). 59 OTU были почти исключительно приурочены к ризоплану, их относительная численность составляла 50.0, 0,6 и 0,3% в ризоплане, ризосфере и насыпной почве (рис. 5E).

    Рис. 5. Обогащение оперативной таксономической единицы в ризоплане корней кукурузы и клевера. На тройном графике изображены ризокомпартменты (ризоплан, ризосфера и насыпная почва). Относительная численность всех OTU (> 0,05%) по крайней мере в одном образце у кукурузы (A) или клевера (B) ( n = 72). Каждая точка соответствует OTU. Размер каждого круга представляет его относительную численность, а положение каждого круга — это вклад OTU в указанном отсеке в общую относительную численность.Оранжевыми и зелеными кружками обозначены ОТЕ, обогащенные ризопланой, ризосферой, тогда как серыми кружками обозначены ОТЕ, которые существенно не обогащены. Диаграмма Венна, сравнивающая дифференциально обогащенные OTU в ризосфере относительно основной почвы и ризоплане относительно ризосферы у растений кукурузы (C) и клевера (D) . Число в перекрывающейся части кругов обозначает последовательные ОТЕ от ризосферы до ризоплана. (E) Относительная численность последовательных обогащенных ОТЕ составляет ризоплан, ризосферу и массу почвы соответственно.

    Таксономический анализ показал, что обогащенные OTU в ризоплане в основном принадлежали Proteobacteria с относительной численностью 48,9 и 28,6% в ризоплане клевера и кукурузы (дополнительный рисунок S4A). Другие обогащенные OTU, принадлежащие Actinobacteria , Bacteroidetes , Chloroflexi и Verrucomicrobia , также были сильно обогащены кукурузой, но меньше — клевером (дополнительный рисунок S4A). На уровне класса преобладающими таксонами были α-, β- и γ- Proteobacteria , а относительная численность α- и γ- Proteobacteria была значительно выше у клевера, чем у кукурузы.Относительная численность Actinobacteria , Cytophagia и Verrucomicrobia была значительно ниже у кукурузы, чем у клевера. OTU, связанные с Sphingobacteria , Chloroflexi и Thermomicrobia , были уникальными для ризоплана кукурузы (дополнительный рисунок S4B). На уровне порядка Pseudomonadales , Corynebacteriales , Micrococcales , Rickettsiales и Sphingobacteriales были уникально обнаружены в ризоплане кукурузы (дополнительный рисунок S4C).

    Функциональное профилирование микробиоты ризоплана

    Чтобы получить более полное представление о возможном функционировании микробиомов ризопланы, были оценены функциональные гены уровня 3 иерархии последовательностей пути KEGG (включая четыре гена, относящиеся к углеродному метаболизму (рисунки 6A, B) и распространенность ортологии KEGG (KO), включая 14 генов). относящиеся к метаболизму фосфора (Рисунки 7А, В). Прогнозируемые функциональные профили в ответ на поступление фосфора кукурузы и клевера заметно различались.Пути, связанные с метаболизмом углерода и фиксацией углерода, значительно различались между P 30 и P 5 , но эффект был значительным только для кукурузы (Рисунки 6A, B). Гены, такие как АТФ-белок глицерин-3-фосфатной транспортной системы, неорганический переносчик фосфатов (Pit), утилизация полифосфатов (ppk) и экзополифосфатаза, были выше при P 5 , чем при P 30 . Напротив, количество функциональных генов, относящихся к метаболизму фосфора и цикличности, значительно различается у клевера (рис. 7В), но не у растений кукурузы (рис. 7А).Гены сенсорной гистидинкиназы фосфатного регулона (Pho R), щелочной фосфатазы (Pho A), АТФ-связывающего белка системы транспорта фосфонатов и белка, связывающего систему транспорта фосфата, были выше при P 30 , чем при P 5 (рис. 7A). . У кукурузы не наблюдалось значительной разницы между двумя уровнями P, за исключением того, что гистидинкиназа, сенсор фосфатного регулона (Pho R) была выше при P 30 , чем при P 5 (фигура 7B).

    Рисунок 6. Статистическое сравнение (критерий Стьюдента t ) между предсказанными функциями в бактериальных OTU ризопланы кукурузы (A) и клевера (B) , выращенного на P 5 по сравнению с P 30 . OTU, относящиеся к углеродному метаболизму, были основаны на базе данных уровня 3 KEGG с использованием поправки Бенджамини – Хохберга P ( P <0,05).

    Рисунок 7. Статистическое сравнение (критерий Стьюдента t ) между предсказанными функциями кукурузы (A) и клевера (B) , выращенного при P 5 vs.P 30 в бактериальных OTU ризопланы, релевантных для метаболизма P, на основе базы данных о численности KO с использованием коррекции значений Benjamini – Hochberg P ( P <0,05).

    Микробные сети в отсеках ризоплана

    Результаты сети совместного вхождения показали, что структура сообщества бактерий у обоих видов растений заметно различалась между ризопланом, ризосферой и массой почвы. Средние коэффициенты кластеризации для ризосплана и ризосферы растений кукурузы были ниже, чем для насыпной почвы.В то время как для растений клевера они были противоположными (дополнительная таблица S6). По сравнению с кукурузой, сеть клевера показала более длинную среднюю длину пути, более высокую модульность и среднюю связность в ризоплане на обоих уровнях поступления фосфора (дополнительная таблица S6). Кроме того, сетевые паттерны, например, средняя модульность, связность и сложность ризоплана, ризосферы и насыпного грунта, в целом были выше на P5 по сравнению с P30 (дополнительная таблица S6). Первые 10 бактерий принадлежали к разным таксонам в разных ризокомпартментах и ​​на уровнях P субстрата (дополнительная таблица S7).Потенциальный основной микробиом кукурузы в основном включал Xanthomonadaceae , Methylobacteriaceae , Roseiflexaceae и Gemmatimonadaceae и Chitinophagaceae , Coxiellaceae 13 , и foradaceae .

    Обсуждение

    В настоящем исследовании инокуляция полевых почв значительно повлияла на бактериальные сообщества (дополнительный рисунок S3 и дополнительная таблица S5). Восстановление бактерий из полевых почв с разной историей внесения удобрений P оказывает сильное влияние на бактериальные сообщества.Заметная разница в микробиоме ризосферы наблюдалась между клевером и кукурузой (рис. 3), что подтверждает предыдущие исследования микробных сообществ в ризосфере различных культур. Бобовые и трава по-разному выбирают микробные сообщества (Zhou et al., 2017). Долгосрочная (12 лет) посевная культура с четырьмя бобовыми видами значительно увеличила количество почвенных микробов, связанных с метаболизмом азота и углерода (Dinesh et al., 2006). Разница между клевером и кукурузой частично может быть связана с корневыми выделениями и потребностью в фосфоре для разных видов растений.В нашем исследовании мы не измеряли корневую экссудацию. Однако предыдущие исследования показали, что как количество, так и состав экссудата заметно различаются между бобовыми и кукурузой. Экссудаты корней кукурузы, такие как сахара, органические кислоты, ароматические соединения и ферменты, влияют на доступность питательных веществ, pH, а также на микробиом почвы (Peiffer et al., 2013). Активность фосфатазы ризосферы у бобовых выше, чем у травы (Li et al., 2004). Природа фиксации N 2 и высокая потребность в P во время фиксации N 2 также могут стимулировать диверсификацию микробиома ризосферы клевера.Мы обнаружили, что Proteobacteria представляют собой доминирующий тип, обогащенный ризопланом обоих видов растений (дополнительный рисунок S4). Это согласуется с предыдущими исследованиями бобовых (Li et al., 2014; Hartman et al., 2017; Yang et al., 2017) и кукурузы (Peiffer et al., 2013; Niu et al., 2017). Proteobacteria участвуют в деградации сложных органических соединений (Revillini et al., 2016; Wei and Jousset, 2017). Кроме того, Verrucomicrobia , Actinobacteria и Chloroflexi были намного более многочисленны в ризоплане клевера по сравнению с кукурузой (дополнительный рисунок S4). Verrucomicrobia как индикатор плодородия почвы обычно играет роль в разложении загрязнителей (Cardman et al., 2014). Актинобактерии играют разные роли в их ассоциации с растениями-хозяевами (Barka et al., 2016). Rhizobiales фиксируют атмосферный N 2 и важны для питания растений азотом. Далее было показано различие между клевером и кукурузой на уровне классов и порядков (дополнительный рисунок S4).

    Наши результаты показали, что ризокомпартмент был основным фактором, влияющим на структуру бактериального сообщества (рисунки 2, 3 и дополнительная таблица S2).Предыдущие исследования микробиома кукурузы показали заметные различия между бактериальными сообществами в ризосфере или ризоплане и основной почве (Silva et al., 2017). Уменьшение α-разнообразия с близостью корней соответствовало другим культурам, включая пшеницу (Fang et al., 2017), сою (Xiao et al., 2017), люцерну (Xiao et al., 2017) и кукурузу (Niu et al., 2017). др., 2017). Как для клевера, так и для кукурузы, определение OTU выявило четкое разделение между массой почвы, ризосферой и образцами ризопланы с меньшей ролью уровней фосфора и инокулята.Конкретные OTU последовательно обогащались от основной массы почвы до ризопланы (Рисунки 4A, B), и относительная численность последовательных OTU составляла почти 50% как для клевера, так и для кукурузы на ризоплане (Рисунки 4C – E). Сильная специфичность бактериальных сообществ в ризокомпартменте по сравнению с насыпной почвой последовательно проявляется на других видах растений (Reinhold-Hurek et al., 2015; Van der Heijden et al., 2016; Beckers et al., 2017). Rhizocompartment следовал четкой иерархической фильтрации микробиоты, и о такой фильтрации ранее сообщалось для двух видов бобовых (Xiao et al., 2017), Acacia и Phaseolus vulgaris (Miranda-Sánchez et al., 2016), рис (Edwards et al., 2015) и Arabidopsis thaliana (Lundberg et al., 2012). Фильтрация в различных ризокомпартментах происходила в основном из-за характеристик ниши (Xiao et al., 2017). Микробные сообщества ризосферы и корневой зоны в значительной степени зависели от типа почвы, а эндофиты клубеньков и корней в первую очередь определялись видами растений. Микробные сообщества как в основной массе почвы, так и в ризосфере сои показали, что бактериальное сообщество ризосферы было выбрано на основе функциональных ядер, связанных с метаболизмом азота, железа, фосфора и калия (Mendes et al., 2014). В настоящем исследовании мы провели углубленный анализ микробной сети (дополнительный рисунок S5 и дополнительные таблицы S6, S7). Ризосферные сети состояли из нескольких связанных, очень распространенных и связанных видов, хотя связь свойств растений с подземной сетью все еще отсутствует (De Vries and Wallenstein, 2017). В настоящем исследовании, по сравнению с кукурузой, сеть растений клевера имела более длинную среднюю длину пути, более высокую модульность и среднюю связанность в ризоплане (дополнительная таблица S6). Это указывает на то, что бактериальные сообщества клевера сильно связаны и организованы. в манере высокой степени сотрудничества и сложности.Wei et al. (2019) также показали, что сеть совместного появления здоровых растений имеет более длинную среднюю длину пути и более высокую модульность по сравнению с таковой у больных растений. Бобовым растениям требуется высокий уровень фосфора для поддержания фиксации N 2 , и вопрос о том, тесно ли это связано с бактериальной сборкой, заслуживает дальнейшего изучения. Кроме того, уровень поступления фосфора существенно повлиял на микробные взаимодействия и сетевые структуры, о чем свидетельствует повышенная средняя модульность, связность и сложность для всех компартментов на P5 по сравнению с P30 (дополнительная таблица S6).Точно так же доступность фосфора является основной переменной, регулирующей микробное сообщество ризосферы арахиса в кислых почвах (Chen et al., 2018). Добавки питательных веществ часто изменяют почвенную среду, изменяя pH или доступность углерода или фосфора, что, в свою очередь, изменяет экологические сети (Barberan et al., 2012).

    10 основных таксонов бактерий в ризоплане на основе определения степени были важны в сети. Основной микробиом в сети ризопланов обоих видов растений был уникальным.Ядро микробиома кукурузы в основном включало Xanthomonadaceae , Methylobacteriaceae , Roseiflexaceae и Gemmatimonadaceae и Chitinophagaceae, Coxiellaceae и Comamonadaceae и . Предыдущие исследования показали, что Xanthomonadaceae , Methylobacteriaceae и Gemmatimonadaceae продемонстрировали способность солюбилизировать P, что указывает на то, что кукуруза может рекрутировать солюбилизирующие фосфор бактерии, чтобы способствовать приобретению P в ризоплане (Mander et al., 2012; Chen et al., 2018). Род Lysobacter в ризоплане кукурузы принадлежал к Xanthomonadaceae , который является богатым источником для производства новых антибиотиков, таких как β-лактамы, содержащие замещенные боковые цепи, макроциклические лактамы (Hashizume et al., 2004). Присутствие Lysobacter в ризоплане кукурузы может быть связано с защитой от патогенов, поскольку инокулят был получен с полей кукурузы, выращиваемых в течение длительного периода времени с монокультурой. Chitinophagaceae может нарушить стабильный метаболизм сочетания C-P, способствуя циклированию C и P (Seweryn et al., 2015), что может быть полезно для поглощения фосфора растениями клевера.

    Доступность

    P (P 5 по сравнению с P 30 ) изменила бактериальные сообщества у обоих видов растений (рис. 4 и дополнительная таблица S3), что указывает на то, что поступление ресурсов также влияет на бактериальную совокупность в ризокомпартменте. Точно так же удобрение P было основным фактором для сообществ бактерий в промежуточных посевах твердой пшеницы и фасоли (Tang et al., 2016). Как форма, так и количество минеральных удобрений влияют на разнообразие, структуру и функционирование микробных сообществ почвы на поле (Van der Bom et al., 2018). В нашем исследовании важность поступления фосфора в пополнение микробиоты ризосферы была выше для клевера, чем для кукурузы (дополнительная таблица S3), так как рост клевера был значительно подавлен при обработке стерилизованным I 0 . Изменение микробиоты ризосферы имеет тенденцию приводить к потенциальной функциональной дифференциации с точки зрения приобретения фосфора, и эта гипотеза «крика о помощи» показана для растений при встрече с патогенами (Berendsen et al., 2012; Kwak et al., 2018; Yuan et al. al., 2018). Интересно, что наше функциональное предсказание обогащенных бактериальных таксонов в ризоплане клевера и кукурузы показало значительные различия с точки зрения функциональных генов, имеющих отношение к метаболизму P (рисунки 6A, B) и циклическому циклу C (рисунки 7A, B) у кукурузы и клевера, соответственно. Функциональные гены, связанные с циклом C, значительно различались между P 5 и P 30 у кукурузы (Рисунки 6A, B), в то время как различия в функциональных генах, связанных с метаболизмом P, наблюдались у клевера (Рисунки 7A, B).Атмосферная фиксация N 2 клевером, которая требует энергии и, следовательно, фосфора, вероятно, связана с этой разницей. N 2 -фиксирующие бобовые культуры проявляли высокую активность корневой фосфатазы, особенно при низкой доступности фосфора в почве (Png et al., 2017). Кукуруза является растением с C 4 , и при низком содержании углерода P в почве может ограничиваться пополнение почвенного микробиома. О важности метаболизма C в микробной сборке ризосферы сообщалось для сахарного тростника (Hamonts et al., 2018). Метагеномный анализ огурца и пшеницы выявил основной набор функциональных генов, включая функциональный профиль генов C и ассимиляцию нитратов (Ofek et al., 2014). Кроме того, бактериальные взаимодействия могут также влиять на сборку микробов в ризосфере кукурузы (Niu et al., 2017). Как микробы взаимодействуют, чтобы повлиять на усвоение фосфора растениями-хозяевами, требует дальнейшего изучения.

    Необходимость повышения эффективности использования P-удобрений может привести к использованию микроорганизмов для поддержки цикла P в агроэкосистемах.Отрицательное микробное наследие наблюдалось только у монокультурной кукурузы, но не у клевера. Иерархическая фильтрация бактериальных сообществ в среде обитания наблюдалась в ризоплане двух видов растений, и ризокомпартмент был основным фильтром, определяющим разнообразие и структуру бактериальных сообществ. Конкретные OTU последовательно обогащались от основной массы почвы до ризоплана, и эти доминирующие OTU в ризоплане в совокупности проявляли различные функции в отношении P-метаболизма клевера и C-метаболизма кукурузы.Наши результаты показали, что эффект микробного наследия при долгосрочном оплодотворении P перекрывается идентичностью хозяина и ризокомпартментом. Эти результаты подчеркивают важность диверсификации сельскохозяйственных культур для повышения эффективности фосфора. Тесная связь между микробиомом ризоплана и метаболизмом растения-хозяина указывает на то, что функции микробных сообществ должны быть интегрированы в управление P для повышения эффективности использования P и устойчивого производства продуктов питания.

    Заявление о доступности данных

    Наборы данных, созданные или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны в репозитории NCBI SRA под идентификатором BioProject: langming (инвентарный номер SRP139180).

    Авторские взносы

    Авторы исследования —

    JZ и ML. ML и SB внесли свой вклад в анализ данных биоинформатики. Все авторы внесли свой вклад в интерпретацию данных и подготовку рукописи, критически рассмотрели и отредактировали рукопись и одобрили ее для публикации.

    Финансирование

    Эта работа была поддержана Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2017YFD0200200 и 2017YFD0200202), Национальным фондом естественных наук Китая (31872182) и фондами фундаментальных исследований для центральных университетов (XDJK2019C065).

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Мы благодарны доктору Чао Вангу за отбор проб и профессору доктору Филу Мюррею за ценные комментарии во время подготовки рукописи. Мы также благодарны рецензентам за их очень полезные комментарии и предложения по более ранней версии рукописи.

    Дополнительные материалы

    Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2019.02856/full#supplementary-material

    Сноски

      Список литературы

      Андерсон, М. Дж. (2001). Новый метод непараметрического многомерного дисперсионного анализа. Aust. J. Ecol. 26, 32–46. DOI: 10.1111 / j.1442-9993.2001.tb00081.x

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Барка, Е.A., Vatsa, P., Sanchez, L., Gaveau-Vaillant, N., Jacquard, C., Klenk, H.P., et al. (2016). Таксономия, физиология и натуральные продукты актинобактерий. Microbiol. Мол. Биол. Rev. 80, 31–43. DOI: 10.1128 / MMBR.00019-15

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Барберан А., Бейтс С. Т., Казамайор Э. О. и Фирер Н. (2012). Использование сетевого анализа для изучения моделей совместной встречаемости в микробных сообществах почвы. ISME J. 6, 343–351.DOI: 10.1038 / ismej.2011.119

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Bastian, M., Heymann, S., and Jacomy, M. (2009). «Gephi: программное обеспечение с открытым исходным кодом для исследования и управления сетями», в материалах Proceedings of the International AAAI Conference on Weblogs and Social Media , (Сан-Хосе, Калифорния).

      Google Scholar

      Беккерс, Б., Михил, О. Д. Б., Вайенс, Н., Бурджан, В., и Вангронсвельд, Дж. (2017). Структурная изменчивость и дифференциация ниш в ризосферном и эндосферном бактериальном микробиоме полевых деревьев тополя. Microbiome 5, 25–43. DOI: 10.1186 / s40168-017-0241-2

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Бенджамини Ю. и Хохберг Ю. (1995). Контроль ложного обнаружения — практичный и мощный подход к множественному тестированию. J. R. Stat. Soc. Сер. B Стат. Метод. 57, 289–300. DOI: 10.1111 / j.2517-6161.1995.tb02031.x

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Берендсен, Р. Л., Питерс, К. М. Дж., И Баккер, П.А. Х. М. (2012). Микробиом ризосферы и здоровье растений. Trends Plant Sci. 17, 478–486. DOI: 10.1016 / j.tplants.2012.04.001

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Cardman, Z., Arnosti, C., Durbin, A., Ziervogel, K., Cox, C., Steen, A. D., et al. (2014). Verrucomicrobia — кандидаты в бактериопланктон, разлагающий полисахариды, в арктическом фьорде на Шпицбергене. Заявл. Environ. Microbiol. 80, 3749–3756. DOI: 10.1128 / AEM.00899-14

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Кастрильо, Г., Teixeira, R.J.P.J., Paredes, S.H., Law, T.F., De Lorenzo, L., Feltcher, M.E., et al. (2017). Микробиота корней способствует прямой интеграции фосфатного стресса и иммунитета. Природа 543, 513–518. DOI: 10.1038 / nature21417

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Чен, Ю., Сун, Р., Сун, Т., Лян, Ю., Цзян, Ю., и Сун, Б. (2018). Органические добавки изменяют коррелированную с фосфором структуру микробов в сети ризосферы арахиса во время долгосрочных режимов удобрения. Заявл. Soil Ecol. 124, 229–239. DOI: 10.1016 / j.apsoil.2017.11.023

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Кондрон, Л. М., Спирс, Б. М., Хейгарт, П. М., Тернер, Б. Л., и Ричардсон, А. Е. (2013). Роль унаследованного фосфора в повышении эффективности использования фосфора в мире. Environ. Dev. 8, 147–148. DOI: 10.1016 / j.envdev.2013.09.003

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Де Фрис, Ф. Т., и Валленштейн, М. Д. (2017). Подземные связи, лежащие в основе надземного производства продуктов питания: основа для оптимизации экологических связей в ризосфере. J. Ecol. 105, 913–920. DOI: 10.1111 / 1365-2745.12783

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Динеш Р., Чаудхури С. Г., Шиджа Т. Э. и Шива К. Н. (2006). Микробная активность и биомасса почвы стимулируются бобовыми покровными культурами. J. Plant Nutr. Почвоведение. 172, 288–296. DOI: 10.1002 / jpln.200700300

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Дюран-Пинедо, А.Э., Пастер, Б., Телес, Р., и Фриас-Лопес, Дж. (2011). Корреляционный сетевой анализ применяется к сложным биопленочным сообществам. PLoS One 6: e28438. DOI: 10.1371 / journal.pone.0028438

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Dombrowski, N., Schlaeppi, K., Agler, M. T., Hacquard, S., Kemen, E., Garrido-Oter, R., et al. (2017). Динамика корневой микробиоты многолетнего растения Arabis alpina зависит от времени пребывания в почве, но не зависит от времени цветения. ISME J. 11, 43–55. DOI: 10.1038 / ismej.2016.109

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Эдвардс, Дж., Джонсон, К., Сантос-Медельин, К., Лурье, Э., Подишетти, Н. К., Бхатнагар, С. и др. (2015). Структура, вариация и сборка корневых микробиомов риса. Proc. Natl. Акад. Sci. США 112, 911–920. DOI: 10.1073 / pnas.14145

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Fang, Y., Du, Y., Wang, J., Wu, A., Qiao, S., Xu, B., et al. (2017). Умеренный стресс засухи влияет на рост корней и урожайность старых, современных и недавно выпущенных сортов озимой пшеницы. Фронт. Plant Sci. 8: 672. DOI: 10.3389 / fpls.2017.00672

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Фауст К., Сатирапонгсасути Дж. Ф., Изард Дж., Сегата Н., Геверс Д., Раес Дж. И др. (2012). Отношения микробного сосуществования в микробиоме человека. PLoS Comput. Биол. 8: e1002606. DOI: 10.1371 / journal.pcbi.1002606

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Hammer, Ø, Харпер, Д. А.Т. и Райан П. Д. (2001). Прошлое: программный пакет палеонтологической статистики для обучения и анализа данных. Palaeontol. Электрон. 4, 65–78.

      Google Scholar

      Хамонц, К., Триведи, П., Гриньер, Дж., Холфорд, П., Дриго, Б., Андерсон, И. А. и др. (2018). Синдром желтого полога сахарного тростника связан со сдвигами в метагеноме почвы ризосферы, но не с общей микробной функцией почвы. Soil Biol. Biochem. 125, 275–285. DOI: 10.1016 / j.почваbio.2018.07.019

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Хартман, К., ван дер Хейден, М. Г., Руссели-Провент, В., Вальзер, Дж. К., и Шлаеппи, К. (2017). Расшифровка состава и функции корневого микробиома бобового растения. Микробиом 5, 2–13. DOI: 10.1186 / s40168-016-0220-z

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Hashizume, H., Hirosawa, S., Sawa, R., Muraoka, Y., Ikeda, D., Naganawa, H., et al. (2004).Трипропептины, новые противомикробные агенты, производимые Lysobacter sp. J. Antibiot 57, 52–58. DOI: 10.7164 / антибиотики.57.52

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ху, Ю., Вересоглоу, С. Д., Тедерсоо, Л., Сюй, Т., Ге, Т., Лю, Л. и др. (2019). Противопоставление широтного разнообразия и моделей совместного присутствия почвенных грибов и растений в лесных экосистемах. Soil Biol. Biochem. 131, 100–110. DOI: 10.1016 / j.soilbio.2019.01.001

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Квак, М. Дж., Конг, Х. Г., Чой, К., Квон, С. К., Сон, Дж. Й., Ли, Дж. И др. (2018). Структура микробиома ризосферы изменяется, чтобы обеспечить устойчивость томатов к увяданию. Нат. Biotechnol. 36, 1100–1109. DOI: 10.1038 / nbt1118-1117

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Лангиль, М. Г. И., Заневельд, Дж., Капорасо, Дж. Дж., Макдональд, Д., Найтс, Д., Рейес, Дж. А. и др. (2013). Прогнозирующее функциональное профилирование микробных сообществ с использованием последовательностей маркерного гена 16S рРНК. Нат. Biotechnol. 31, 814–821. DOI: 10.1038 / NBT.2676

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ли, X., Руи, Дж., Мао, Ю., Яннарелл, А., и Маки, Р. (2014). Динамика структуры бактериального сообщества в ризосфере сорта кукурузы. Soil Biol. Biochem. 68, 392–401. DOI: 10.1016 / j.soilbio.2013.10.017

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Лундберг, Д. С., Лебейс, С. Л., Паредес, С. Х., Юрстон, С., Геринг, Дж., И Малфатти, С. (2012). Определение основного микробиома корней Arabidopsis thaliana. Природа 488, 86–90. DOI: 10.1038 / nature11237

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Мандер, К., Вакелин, С., Янг, С., Кондрон, Л., и О’Каллаган, М. (2012). Распространенность и разнообразие фосфатсолюбилизирующих бактерий связаны со статусом фосфора в почвах пастбищ. Soil Biol. Biochem. 44, 93–101. DOI: 10.1016 / j.soilbio.2011.09.009

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Мендес, Л. В., Курамаэ, Э. Э., Наваррет, А. А., Ван Вин, Дж. А., и Цай, С. М. (2014). Таксономический и функциональный отбор микробного сообщества в ризосфере сои. ISME J. 8, 1577–1587. DOI: 10.1038 / ismej.2014.17

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Менезес-Блэкберн, Д., Джайлз, К., Дарч, Т., Джордж, Т. С., Блэквелл, М., Заик, М. и др. (2018). Возможности мобилизации стойкого фосфора из сельскохозяйственных почв: обзор. Растительная почва 427, 5–16. DOI: 10.1007 / s11104-017-3362-2

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Мейер Д., Цейлис А. и Хорник К. (2015). vcd: визуализация категориальных данных. Пакет R версии 1.0.

      Google Scholar

      Миранда-Санчес, Ф., Ривера, Дж., И Винуэса, П. (2016). Структура разнообразия сообществ Rhizobiaceae, населяющих почвы, поверхности корней и клубеньки, свидетельствует о сильном отборе ризобиальных партнеров бобовыми культурами. Environ. Microbiol. 18, 2375–2391. DOI: 10.1111 / 1462-2920.13061

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Морроу, К. М., Борн, Д. Г., Хамфри, К., Ботте, Э. С., Лаффи, П., Заневельд, Дж. И др. (2015). Естественный вулканический CO 2 просачиваний показывают будущие траектории для ассоциаций хозяев и микробов в кораллах и губках. ISME J. 9, 894–908. DOI: 10.1038 / ismej.2014.188

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ню, Б., Полсон, Дж. Н., Чжэн, X., и Колтер, Р. (2017). Упрощенное и репрезентативное бактериальное сообщество корней кукурузы. Proc. Natl. Акад. Sci. США 114, 2450–2459. DOI: 10.1073 / pnas.1616148114

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ocimati, W., Tusiime, G., Opio, F., Ugen, M.A., and Buruchara, R. (2017). Сорго (Sorghum bicolor) в качестве промежуточной культуры или севооборота фасоли способствует выживанию возбудителей корневой гнили фасоли и увековечиванию корневой гнили фасоли. Plant Pathol. 66, 1580–1586. DOI: 10.1111 / ppa.12699

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Офек М., Воронов-Гольдман М., Хадар Ю., Минц Д. (2014). Влияние сигнатуры хозяина на микробиомы, связанные с корнями растений, выявлено путем анализа местных и активных сообществ. Environ. Microbiol. 16, 2157–2167. DOI: 10.1111 / 1462-2920.12228

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Оксанен, Дж., Бланше, Ф.Г., Киндт, Р., Лежандр, П., Минчин, П. Р., и О’Хара, Р. Б. (2013). Vegan, Пакет анализа сообщества. Пакет R версии 2.2-0.

      Google Scholar

      Паради Э., Клод Дж. И Стриммер К. (2004). APE: анализ филогенетики и эволюции на языке R. Биоинформатика 20, 289–290.

      PubMed Аннотация | Google Scholar

      Паркс, Д. Х., Бейко, Р. Г. (2010). Выявление биологически значимых различий между метагеномными сообществами. Биоинформатика 26, 715–721. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btq041

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Пайффер, Дж. А., Спор, А., Корен, О., Джин, З., Триндж, С. Г., Дангл, Дж. Л. и др. (2013). Разнообразие и наследуемость микробиома ризосферы кукурузы в полевых условиях. Proc. Natl. Акад. Sci. США 110, 6548–6553. DOI: 10.1073 / pnas.1302837110

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Перес-Харамильо, Дж.Э., де Холландер, М., Рамирес, К. А., Мендес, Р., Рааймейкерс, Дж. М., и Каррион, В. Дж. (2019). Расшифровка сборки микробиома ризосферы дикой и современной фасоли ( Phaseolus vulgaris ) в естественных и сельскохозяйственных почвах Колумбии. Microbiome 7, 114–130. DOI: 10.1186 / s40168-019-0727-1

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Png, Г. К., Тернер, Б. Л., Альборнос, Ф. Э., Хейс, П. Э., Ламберс, Х., Лалиберте, Э. (2017).Повышенная активность корневой фосфатазы у азотфиксирующих ризобий, но не у актиноризных растений, при снижении доступности фосфора. J. Ecol. 105, 1246–1255. DOI: 10.1111 / 1365-2745.12758

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Райнхольд-Хурек, Б., Бюнгер, В., Бурбано, К. С., Сабале, М., и Хурек, Т. (2015). Корни, формирующие их микробиом: глобальные очаги микробной активности. Ann. Rev. Phytopathol. 53, 403–424. DOI: 10.1146 / annurev-phyto-082712-102342

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ревиллини, Д., Геринг, К.А., и Джонсон, Н.С. (2016). Роль адаптированных к местным условиям микориз и ризобактерий в системах обратной связи растение-почва. Функц. Ecol. 30, 1086–1098. DOI: 10.1111 / 1365-2435.12668

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Саттари, С. З., Бауман, А. Ф., Гиллер, К. Э., и Ван Иттерсум, М. К. (2012). Остаточный почвенный фосфор как недостающий элемент в головоломке глобального фосфорного кризиса. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 6348–6353. DOI: 10.1073 / пнас.1113675109

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Северин, П., Ван, Л. Б., Кьельдгаард, М., Руссо, К. Дж., Пассмор, Л. А., Хов-Йенсен, Б. и др. (2015). Структурные представления о машине бактериальной лиазы углерода фосфор. Природа 525, 68–72. DOI: 10.1038 / природа14683

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Силва, США, Медейрос, Дж. Д., Лейте, Л. Р., Мораис, Д. К., Куадрос-Орельяна, С., Oliveira, C.A., et al. (2017). Длительное внесение минеральных фосфатов влияет на микробные сообщества ризосферы кукурузы. Фронт. Microbiol. 8: 1266. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.01266

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Су, Дж., Дин, Л., Сюэ, К., Яо, Х., Квенсен, Дж., Бай, С. и др. (2015). Долгосрочное сбалансированное удобрение увеличивает функциональное разнообразие почвенных микробов в рисовой почве с ограниченным содержанием фосфора. Мол. Ecol. 24, 136–150.DOI: 10.1111 / mec.13010

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Табатабай М.А. (1994). «Почва, ферменты», Методы анализа почв, часть 2. Микробиологические и биохимические свойства. СССА Книжная серия № 5 , изд. Дж. М. Бигхэм, (Мэдисон, Висконсин: SSSA), 775–834.

      Google Scholar

      Тан, X., Пласелла, С. А., Дайде, Ф., Бернар, Л., Робин, А., Журне, Э. П. и др. (2016). Доступность фосфора и микробное сообщество в ризосфере посевов зерновых и бобовых культур по градиенту P-удобрений. Почва растений 407, 119–134. DOI: 10.1007 / s11104-016-2949-3

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Вэнс, К. П., Удэ-Стоун, К., и Аллан, Д. Л. (2003). Приобретение и использование фосфора: критические адаптации растений для обеспечения невозобновляемых ресурсов. New Phytol. 157, 423–427. DOI: 10.1046 / j.1469-8137.2003.00695.x

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ван дер Бом, Ф., Нуньес, И., Раймонд, Н. С., Хансен, В., Бонничсен, Л., Magid, J., et al. (2018). Форма, уровень и продолжительность длительного удобрения влияют на разнообразие, структуру и функционирование микробных сообществ почвы в поле. Soil Biol. Biochem. 122, 91–103. DOI: 10.1016 / j.soilbio.2018.04.003

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ван дер Хейден, М. Г. А., Де Брюин, С., Лакерхофф, Л., Ван Логтестейн, Р. С. П., и Шлаеппи, К. (2016). Широко распространенный симбиоз растений, грибов и бактерий способствует биоразнообразию растений, питанию растений и пополнению рассады. ISME J. 10, 389–399. DOI: 10.1038 / ismej.2015.120

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ван дер Хейден, М.Г.А., и Шлаэппи, К. (2015). Поверхность корня как рубеж для исследования микробиома растений. Proc. Natl. Акад. Sci. США 112, 2299–2300. DOI: 10.1073 / pnas.1500709112

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ван дер Путтен, В. Х., Барджетт, Р. Д., Бевер, Дж. Д., Беземер, Т. М., Каспер, Б.Б., Фуками Т. и др. (2013). Обратная связь между растениями и почвой: прошлое, настоящее и будущее. J. Ecol. 101, 265–276. DOI: 10.1111 / 1365-2745.12054

      CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Wei, Z., Gu, Y., Friman, V.P., Kowalchuk, G.A., Xu, Y., Shen, Q., et al. (2019). Первоначальный состав и функционирование микробиома почвы предопределяют здоровье растений в будущем. Sci. Adv. 5: eaaw0759. DOI: 10.1126 / sciadv.aaw0759

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Сяо, X., Chen, W., Zong, L., Yang, J., Jiao, S., Lin, Y., et al. (2017). Два культивируемых бобовых растения демонстрируют процесс обогащения микробиома в ризокомпартментах. Мол. Ecol. 26, 1641–1651. DOI: 10.1111 / mec.14027

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Ян, Ю., Ван, Н., Го, X., Чжан, Ю., и Е, Б. (2017). Сравнительный анализ структуры бактериального сообщества в ризосфере кукурузы методом высокопроизводительного пиросеквенирования. PLoS One 12: e0178425.DOI: 10.1371 / journal.pone.0178425

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Йилмаз П., Парфри Л. В., Ярза П., Геркен Дж., Прюсс Э., Кваст К. и др. (2014). Таксономические рамки SILVA и «проекта живого дерева всех видов (LTP)». Nucleic Acids Res. 42, 643–648. DOI: 10.1093 / nar / gkt120

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Юань, Дж., Чжао, Дж., Вэнь, Т., Чжао, М., Ли, Р., Гуссенс, П., и др.(2018). Экссудаты корней являются причиной распространения наземных патогенных инфекций, передаваемых через почву. Microbiome 6, 156–168. DOI: 10.1186 / s40168-018-0537-x

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Згадзай Р., Гарридо-Отер Р., Йенсен Д. Б., Копривова А., Шульце-Леферт П. и Радутою С. (2016). Симбиоз корневых клубеньков в лотосе Lotus japonicus способствует формированию отличительных ризосферных, корневых и клубеньковых бактериальных сообществ. Proc.Natl. Акад. Sci. США 113, 7996–8005. DOI: 10.1073 / pnas.1616564113

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Чжоу, Ю., Чжу, Х., Фу, С., и Яо, К. (2017). Различия в структуре микробного сообщества почвы, связанного с разными видами бобовых, больше, чем с разными видами трав. Фронт. Microbiol. 8: 1007. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.01007

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      Чжу, Дж., Ли, М., и Уилан, М. (2018). Активаторы фосфора способствуют доступности устаревшего фосфора в сельскохозяйственных почвах: обзор. Sci. Total Environ. 612, 522–537. DOI: 10.1016 / j.scitotenv.2017.08.095

      PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

      .

      Добавить комментарий

      Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *