Морилка для чего применяется: Для чего нужна морилка? | ООО «ВЕРШИНА»

Содержание

Для чего нужна и как применять морилку для дерева

Для чего нужна и как применять морилку для дерева

Морилка представляет собой тонирующую смесь, предназначенную для придания древесине определенного оттенка и обеспечивая ее защитными функциями. При ее нанесении текстура древесины видна, изменяется только расцветка. К примеру, недорогостоящую сосновую породу можно визуально превратить в более дорогой орех, вишню либо дуб. Помимо этого морилка является недорогим, глубоко проникающим в текстуру древесину средством, обеспечивающим защиту от различных губительных факторов внешней среды.

Содержание


Особенности морилки

  • Основным предназначением морилки является окраска древесины в желаемый цвет и маскировка одного сорта под иной.
  • Возможно применение для реставрации старого деревянного покрытия.
  • Состав защищает деревянные элементы от влаги, грибка и гниения.
  • В зависимости от состава можно применять морилку для внутренних и наружных работ.
  • Пропиточное средство повышает выразительность древесной структуры, значительно продлевая ее срок эксплуатации.

Основные факторы для выбора морилки

Выбор подходящего средства не только от вида составом, но и от других немаловажных характеристик, на которые необходимо обратить внимание:
  1. В случае внутренней обработки токсичность состава должна быть наименьшей. Наиболее безопасными являются водные, масляные и смеси на основе воска.
  2. Время высыхания спиртовых составов наименьшее, масляные же составы высыхают достаточно долго.
  3. Грунтующие показатели морилки, со специальными порозаполнителями, обеспечивают заполнение неровностей поверхности.
  4. Огнестойкими составами рекомендуется обрабатывать древесину в пожароопасных помещениях.
  5. Продолжительная эстетичность древесины зависит от глубины проникновения морилки.
  6. Помимо жидких составов существуют также средства в порошкообразном виде, которые нужно будет разводить самостоятельно.
  7. Морилка имеет невысокую цену, поэтому для выбора качественного состава нужно обращать не на стоимость, а продукты известных брендов.

Виды и применение

Наиболее популярными, отличающимися по своим характеристикам, применению и стоимости, являются следующие морилки:
  • Наиболее доступными для потребителей являются водные составы, характеризующие большой цветовой гаммой и легкостью применения. Однако древесина, обработанная данной морилкой, более подвержена влиянию влаги, и рекомендована только для внутреннего окрашивания.
  • Спиртовые составыотличаются быстрым временем высыхания и большим разнообразием оттенков. При нанесении такой морилки рекомендуется использовать распылители, поскольку обрабатывая кистью, могут образоваться темные пятна либо получиться неравномерное нанесение слоя.
  • Масляная морилка рекомендуется для наружного применения, поскольку имеет повышенную устойчивость к влаге. Для равномерного распределения состава по поверхности, добавляется уайт-спирит до нужной консистенции и используется кисть.
  • Акриловое средство не приподнимает древесные волокна и образуется защитная водоотталкивающая пленка. Акриловые составы менее подвергаются выцветанию и имеют большое разнообразие оттенков.
  • Восковой состав, благодаря экологической чистоте, применяется не только для жилого помещения, но и для парилки, бани либо сауны. Хорошо проникающие восковые морилки без труда наносятся и надежно предотвращают влагу.

Технология обработки

  1. Рекомендуется перед нанесением морилку немного нагреть, поскольку теплый состав проникает глубже и гораздо быстрее, в отличие от холодного. В качестве рабочего приспособления используют кисть, тампон либо распылитель. Не стоит допускать обильного пропитывания, поскольку это однозначно приведет к образованию подтеков и неоднородности покрытия.
  2. Наносить состав нужно в направлении волокон древесины, интенсивно и без перерывов. Излишки и разводы устраняются мягкой ветошью, а изделие выдерживается до окончательного высыхания.
  3. Таким же способом наносится еще 2-3 слоя, для получения нужной насыщенности оттенка (после каждого слоя древесина становится темнее). После высыхания финишного покрытия древесина лакируется несколькими слоями лака, шлифуя каждый промежуточный слой мелкозернистой наждачной бумагой.
  4. Для получения поверхности белого цвета применяют белые морилки для дерева, которыми окрашивают только поры. Твердым же древесным волокнам сохраняют свой натуральный цвет, или окрашивают в какой-либо иной цвет. Такой привлекательный эффект выделения пор древесины белым цветом достигается путем дальнейшего применения масел и твердого воска.

Морилка дерева. Для чего и как правильно применять?

Морилка — идеальный препарат для окрашивания древесины и для того чтобы подчеркнуть ее естественные кольца. На рынке представлено множество видов и цветов морилки для дерева, поэтому можно добиться самых разных декоративных эффектов.

Что такое морилка?
Морилка для дерева (или бейц) — это специальный материал, как правило, в виде жидкости. В процессе морения наносится на обработанную древесину для пропитки составом и предотвращения гниения.
В состав морилки входят, в основном, красители и вода, поэтому она имеет жидкую консистенцию и проникает глубоко в слои древесины. Морилка не маскирует естественную текстуру дерева, как краска, а только подчеркивает ее, создавая интересный декоративный эффект. К некоторым морилкам, особенно рекомендованным для наружного применения, добавляются средства, защищающие древесину от роста плесени. Перед нанесением той или иной морилки стоит проверить, выполняет ли она еще и защитные функции. Если нет — после окрашивания необходимо использовать соответствующее защитное средство, например лак, воск или масло для дерева.

 Где применяется морилка дерева?
Морение дерева проводится как на улице, так и в помещении. Обычно для достижения интересных декоративных эффектов проводят обработку мебели, оконных и дверных столярных изделий внутри и снаружи. Паркет, полы из массивной доски и деревянные лестницы также часто окрашиваются.
Морилку используются для украшения и защиты не только дерева, но и фанеры, шпона и ДСП. Интересным применением морилки является также обработка штукатурки, сырцового кирпича или бетона. Стоит знать, что для окрашивания элементов, которые будут стоять снаружи, предназначены специальные морилки, проявляющие повышенную устойчивость к солнечному свету, влаге и росту плесени. Однако при окрашивании снаружи всегда стоит после завершения работы покрыть ее слоем соответствующего лака, который точно защитит древесину от воздействия атмосферных и биологических факторов.
Виды морилки.

 По составу выделяют несколько видов:
• морилка на основе воды — в основном состоят из красителей и воды. Их чаще всего используют и признают экологическими.
• морилка на основе растворителей — это раствор пигментов и органических растворителей. Они быстро сохнут, могут окрашивать яркие цвета и проявляют повышенную устойчивость к солнечному свету.
• Нитро- морилка — состоит из пигментов, красителей и органических растворителей. Они характеризуются быстрым высыханием, равномерным покрытием древесины, хорошим акцентом на текстуру древесины и высокой устойчивостью к солнечному свету.

• Спиртовые морилки — это растворы пигментов и спирта. С их помощью можно получить сильный оттенок выбранного цвета. Из-за очень быстрого высыхания нанесение спиртовых красителей может быть проблематичным и требовать высокой точности, поэтому их рекомендуют использовать профессионалы.
• Масляные морилки — состоят из пигментов, натуральных древесных масел и растительных восков. Масляная морилка равномерно покрывает древесину и красиво подчеркивает ее фактуру. После её использования необходимо нанести масло или воск для дерева, чтобы защитить поверхность.

 Все виды морилки доступны во многих цветах, поэтому легко можно добиться желаемого декоративного эффекта. Цветовая палитра может быть похожа на натуральные оттенки европейской или экзотической древесины.


В скандинавских или деревенских композициях древесина окрашивается в белый цвет. Некоторые производители морилки также предлагают свою продукцию в насыщенных цветах, таких как красный, синий, зеленый или желтый, которые идеально подходят для оживления деревянных элементов садовой архитектуры или покрытия мебели в детской комнате.

 Как выполнить морение дерева?
Перед морением древесины поверхность следует тщательно подготовить, то есть отшлифовать и очистить от пыли. В случае обработки древесины сосны, а также других сильносмолистых пород древесины, поверхность следует покрыть грунтовкой. Однако использование грунтовки не обязательно при окрашивании древесины дуба, которая благодаря своей высокой твердости и отсутствию смолы равномерно впитывает морилку.
Морилку следует наносить на дерево кисточкой, но также можно губкой или тряпкой. Раствор наносится равномерно тонким слоем вдоль волокон древесины. После высыхания первого слоя, — что обычно занимает несколько часов,- можно нанести еще один, но стоит сначала аккуратно отшлифовать поверхность мелкой наждачной бумагой.

Способы применения » Морилки для дерева. Водная, спиртовая, неводная. Состав. Применение.


Как заставить новую древесину выглядеть так, будто ей лет двести? Ну, хорошо, можно проморить древесину, однако, тогда она лишь станет темнее, но не «состарится». Поэтому многие столяры тщетно пытаются состарить древесину, воссоздавая сколы и вмятины, которые обычно появляются в течение многих лет эксплуатации изделия. Однако, ужаснее всего, когда это делается небрежно с помощью стамесок или топоров.

Сегодня мы побеседу на тему о применении морилок для декоративной отделки древесины. Итак… Если древесина лиственных пород достаточно хорошо впитывает морилку, то этого нельзя сказать о древесине хвойных пород деревьев.
Морилка впитывается лучше, если волокна древесины влажные и рыхлые, пористые.
Покрывать морилкой свежую древесину гораздо быстрее, чем красить, но результат может сильно разочаровать, так как морилка ложится неровно на концах древесного волокна и вокруг сучков.
Морилка используется при тонировании различных пород древесины. В нее, как правило, добавляют полимеризаторы, значительно затрудняющие проникновение красящего вещества в древесину. Благодаря такой добавке получается лишь поверхностная окраска и пропитка изделия. Наибольшим спросом пользуются спиртовые морилки.

Морилки (цветные политуры) защищают дерево и подходят для использования как внутри дома, так и снаружи. Они бывают натуральных оттенков, которые имитируют различные типы древесины -от самой бледной сосны до самого темного красного дерева. Краски — чисто декоративное средство, и они подходят только для работы в доме, но и тогда их необходимо покрыть сверху лаком, политурой, шеллаком, воском.

Дерево с давних времён было самым привычным и удобным материалом в строительстве и изготовлении домашней мебели. Но поскольку дерево относительно не долговечный материал то перед использованием деревянных деталей древесину пропитывали различными составами. В начале это был простой раствор соли и древесной золы, позже с развитием химической промышленности стали применять морилку.
Жидкая морилка — это раствор красителя и небольшого количества диэтиленгликоля в изопропиловом спирте. После нанесения на поверхность древесины из раствора быстро испаряется изопропил, а оставшийся диэтиленгликоль с красителем надежно соединяются с древесиной.
Если поверхность древесины не будет совершенно чистой и обезжиренной, то морилка будет плохо ложиться, образуя неравномерную пятнистую отделку. Снимите предыдущее покрытие и зашлифуйте древесину, постепенно меняя виды шкурки на более мелкозернистые. Всегда работайте вдоль волокон, так как царапины поперек волокон будут подчеркиваться отделкой.

Полы из натурального дерева можно облагородить и защитить, обработав поверхность морилкой и покрыв лаком. Наилучший эффект достигается на новых полах, но можно использовать этот способ и для старого пола, если он находится в хорошем состоянии. Для осмотра пола следует снять старое покрытие, а перед нанесением нового покрытия пол надо отшлифовать.
Производством красок занимаются компании, известные во всем мире. Это и акриловая краска, и латексная, и декоративная, для стен краска и эмаль для пола. Палитра цветов предлагаемой продукции поражает своей изысканностью. Для масляных красок палитра цветов также многообразна. Но перед покраской в целях пожарной безопасности и увеличения долговечности, деревянные поверхности подлежат тщательной обработке.
Древесина в условиях переменного действия тепла, холода и влажности часто загнивает. Самое опасное загнивание вызывают домовые грибы, которые появляются только в сырых непроветриваемых местах. Поэтому древесину необходимо хранить, проветривая и предотвращая возможность ее намокания.

В дачных или домашних работах очень часто используется древесина. Однако в своем натуральном виде она не всегда выглядит достойно, под стать окружающим предметам и мебели. Под воздействием ультрафиолета она становится серой. Не будучи покрытой никаким защитным составом древесина очень гигроскопична и начинает \»играть\» не то что от попавшей на нее влаги, а даже от разницы летней и зимней влажности.
Когда заходит речь о ремонте дома, дачи или просто старой мебели, сразу сталкиваешься с проблемой выбора: какие лаки, клеи, эмали использовать? не превращать же, в самом деле, ремонт в полигон для экспериментов: дорого и неэффективно. Выбрать нужное из всего многообразия лакокрасочной продукции, представленной в наших магазинах, под силу лишь профессионалам. И здесь опытные специалисты советуют использовать гамму продукции фирмы «полисан» (polisan). Солнечная дверь, мягко сияющая на кухне, «светящиеся» стулья и шкафчики в тон… Нежно-розовая кровать и такая же дер

для чего она нужна? Виды и способы нанесения состава

Воск для дерева и специальное масло помогают создать защитный слой и избавиться от многих проблем, связанных с порчей древесины, также широко используется покрытие дерева морилкой. Правильная обработка дерева воском может быть произведена в домашних условиях. Мы постараемся доступно рассказать вам как делается покрытие дерева воском, маслом и морилкой.

В каких случаях нужно покрытие дерева морилкой

Морилка и защитные составы (пропиткой) для дерева применяются точно так же, как если бы Вы просто хотели его покрасить. Следует нанести покрытие на подготовленное дерево быстро, но для того, чтобы получить ровный слой на гладкой древесине, потребуется делать это очень аккуратно. Каждая плоскость должна покрываться Вами непрерывно, иначе, если морилка или пропитка на данном участке высохнет раньше, чем на соседнем – в этом месте получится заметный шов.

Наносите морилку по направлению волокон древесины. Старайтесь не брать на кисть слишком много состава и размазывайте случайные капли прежде, чем они засохнут.

Обязательно закончите обработку одной секции, прежде чем приступить к следующей. В местах соединений двух секций обращайте внимание, чтобы наносимые слои не перекрывались. Покрытие дерева морилкой достаточно сложный технологический процесс. Потренируйтесь сначала на незаметном участке древесины.

Обработка дерева воском — вощение

Воск для дерева успешно наносится на поверхности куском ткани, но некоторые типы этого материала предполагают нанесение кистью. Повторное нанесение и полировка создает глубину цвета и блеск. Воск для вощения дерева не обязательно наносить по направлению волокон, однако такой способ все же является самым эффективным при отделке деревянных поверхностей.

Возьмите некоторое количество воска из контейнера куском мягкой ткани и втирайте его в дерево до тех пор, пока на обрабатываемой поверхности не останется частиц отделочного материала. Дайте воску высохнуть, но не застыть. Отполируйте древесину чистой тканью для обеспечения гладкости. Покрытие дерева воском можно периодически повторять.

Пропитка дерева маслом

Пропитка дерева маслом необходима для придания ему защитных свойств. Для всех антисептических масел предполагается аналогичная техника применения. Тунговое масло хорошо подходит для столешниц и других поверхностей, которые находятся в зонах приготовления пищи, так как оно не является токсичным. Датское и тиковое масла принято использовать для обработки лиственных пород , особенно предметы уличной мебели; тиковое масло славится придаваемым глянцем. Если же Вы выберете традиционное льняное масло, мы рекомендуем использовать кипяченное или дважды кипяченное, поскольку они быстрее сохнут и не такие липкие, как сырое.

Наносите масло обильно, по направлению волокон, немного как бы втирая его при помощи мягкой кисти, чтобы обеспечить полный охват и проникновение в поверхность. Позвольте маслу немного впитаться и затем удалите излишки с помощью куска ткани. Оставьте обработанное дерево на полчаса (если другое не оговорено изготовителем масла), после чего отполируйте поверхность сухой тряпкой.

Обработка лаком или морилкой

Лак, как и морилка, должен непременно наноситься вдоль волокон древесины, хотя с этим материалом Вам не стоит слишком заботиться об аккуратности нанесения. Поскольку большинство лаков абсолютно прозрачны, во время нанесения легко не заметить необработанные области. Для обеспечения повсеместного покрытия поверхности следует организовать в месте работ хорошее освещение и проводить регулярные проверки обработанных участков. Переходить к следующей секции следует после окончания предыдущей. Плавно работайте кистью, чтобы слой лака был равномерен.

Оботрите первый слой лака, поскольку некоторые типы этого покрытия, особенно на водной основе, имеют свойство растекаться вдоль волокон древесины. Протрите поверхность влажной тряпкой, чтобы стереть пыль и дайте лаку высохнуть перед нанесением следующего слоя.

Тонкости применения краски по дереву

Если Вы собираетесь смешивать краски для получения требуемого оттенка, обратите внимание на то, чтобы все краски имели одинаковую основу – масло или воду. Окрашенная древесина требует нанесения защитного слоя поверх себя – например воскового или лакового. Наносить краску следует вдоль волокон древесины. Держите влажной ту область, с которой Вы сейчас работаете, и не допускайте перекрытия с теми областями, которые сушатся. Покройте окрашенную поверхность защитным слоем. Перед этим, уточните спецификацию производителя для определения совместимости отделочных материалов.

Обработка внешних поверхностей

Покраска внешних деревянных поверхностей требуется лишь время от времени и достаточно редко. Один единственный слой, обновляемый раз в один-два года, сохранит дерево и обеспечит приемлемый внешний вид. Один раз в год следует слегка ободрать и стереть слой старого лака и затем нанести новый слой краски. Внешние поверхности лиственных пород будут портиться слегка быстрее, если даже они обработаны тиковым или датским маслом. Хотя дерево остается защищенным, производители обычно рекомендуют перепропитывать его маслом каждый год.

Применение пропиток и морилок для дерева для красототы и долговечности

В первую очередь пропитка для дерева применяется для защиты древесины от воздействий внешних факторов: осадков, ультрафиолета, плесени, насекомых и пр. Специальные пропитывающие вещества, вводимые в древесину, улучшают ее характеристики и придают дереву новые свойства. Так, пропитка способствует:

  • Стабилизации размеров;
  • Повышению прочности;
  • Снижению растрескиваемости;
  • Повышенной стойкости к воздействию влаги и химикатов.

Виды пропитки

  1. Капиллярная, то есть жидкость пропитки проникает в капилляры древесины с помощью капиллярного давления;
  2. Диффузная пропитка основывается на диффузном перемещении пропитки по капиллярам древесины;
  3. Гидростатическая пропитка основана на перемещении жидкости по капиллярам дерева с помощью искусственно созданного давления.

Также выделяют два типа пропитки для дерева:

  1. Пленкообразующие пропитки, направленные на защиту древесины от плесени, воды и ультрафиолета. На поверхности дерева при применении пленкообразующей пропитки образуется достаточно эластичная пленка, которая способна сжиматься и расширяться вместе с древесиной, при этом не происходит нарушения целостности и структуры такой пропитки;
  2. Пропитки, не образующие защитных пленок, которые впитываются в поверхность древесины и защищают ее от насекомых и плесени.

В среднем срок службы пропиток составляет 6-10 лет, а при дополнительном покрытии дерева яхт-лаком этот срок увеличивается еще на 3-5 лет.

Морилки для дерева

Морилка способна впитываясь в древесину окрашивать ее достаточно глубоко, но зачастую такое покрытие не обеспечивает никакой защиты. Обычно современные морилки в своем составе имеют полупрозрачные красители, откладывающиеся в порах древесины. С нанесением последующего слоя таких морилок древесина становится более темной.

Разновидности морилок:

Масляные

В состав масляных морилок входят красители, растворимые в маслах. Такие морилки следует разводить уайт-спиритом. Масляная морилка легко наносится, не поднимает волокно, образует равномерный слой и относительно быстро сохнет. Нужный тон дерева можно получить путем смешивания нескольких цветов морилки.

Спиртовые

Спиртовые морилки являются растворами анилиновых красителей, разведенными в денатурате. Главным недостатком таких морилок является очень быстрое высыхание, приводящее к появлению в местах стыков слоев темных пятен.

Водные

Водные морилки можно приобрести как в готовом виде, так и в порошковой или кристаллической форме и затем самостоятельно развести в горячей воде. Такие морилки сохнут длительное время, поэтому однородного тона придется добиваться значительное время. Перед применением водной морилки следует смочить и зашкурить дерево, так как такая морилка поднимает волокно.

Акриловая морилка для дерева является последним поколением водных морилок с использованием акриловых смол. Эта эмульсия образует на поверхности дерева тоненькую цветную пленку. Акриловые морилки менее поднимают волокно и меньше подвержены выцветанию в сравнении с традиционными водными морилками.

Определившись с видом и цветом морилки, следует сделать цветовую пробу.

Для этого используйте гладко отшлифованную поверхность дерева (на плохо отшлифованной поверхности цвет будет казаться более темным, так как дерево впитает больше жидкости).

Для пробы нанесите слой морилки на небольшой участок и дайте ей высохнуть, затем нанесите еще один слой, но оставьте непокрытым часть 1-го слоя. При нанесении более двух слоев окраска дерева может стать пятнистой. Дав морилке полностью высохнуть, и покройте половину закрашенного участка выбранным отделочным материалом и проследите, как измениться цвет древесины.

Применение пропитки и морилки для деревянных поверхностей

Технология нанесения защитных составов (пропиток) и морилки аналогична простому процессу покраски. Покрытие следует наносить на подготовленную древесину достаточно быстро и аккуратно, чтобы получить ровный слой.

Каждую плоскость необходимо покрывать непрерывно, ведь более быстрое высыхание морилки или пропитки на одном участке, чем на соседней поверхности приведет к образованию заметного шва.

Морилку наносят по направлению волокон дерева. При этом не следует брать на кисточку большого количества состава. Старайтесь размазывать случайные капли до их засыхания.

В местах соединения нескольких секций следите, чтобы слои морилки (пропитки) не перекрывались. Так как покрытие морилкой деревянных поверхностей достаточно сложный процесс лучше сначала потренироваться на незаметном участке дерева.

Применение пропитки защитит ваш деревянный дом от любых негативных воздействий, а с помощью морилки вы сможете изменить тон древесины и подчеркнуть ее структуру.

http://derevizba.ru

Морилками или бейцами называют тонирующие составы, которые используют для отделки древесины, чтобы придать ей более выразительный оттенок. Впитываясь в структуру дерева, жидкость прокрашивает поверхностный слой, сохраняя естественную текстуру и рельеф поверхности.

Обработка морилкой позволяет просто и без лишних затрат предавать невыразительным породам дерева более благородный внешний вид. Возможность экспериментировать с оттенками раскрывает широкие возможности при отделке проектов.

Состав морилок никак не влияет на основные характеристики материала. На поверхности не образовывается пленка, устойчивость к гниению, твердость и прочность древесины остаются неизменными (при отсутствии в составе специальных компонентов). Техники нанесения бейцев освоить совершенно несложно.

Основой для морилок может служить вода, спирт, масло и другие вещества. Каждый тип отделочного состава имеет свои особенности, зная которые легко выбрать оптимальный тип отделки для конкретного проекта.

Водная морилка и ее специфика

Водная морилка доступна в виде жидкости, уже готовой к использованию, и в виде порошка, который самостоятельно разводится до желаемой концентрации. Бейцы на водной основе отличаются хорошей адгезией, естественно подчеркивают текстуру древесины и имею широкий диапазон оттенков: от светлых тонов до глубоких темно-красных цветов. Отсутствие токсичных запахов делает такие составы незаменимыми при выполнении внутренних работ.

При обработке древесины смолянистых пород водная морилка может пойти пятнами, из-за неравномерного впитывания в структуру материала. В этом случае поверхность изделия рекомендуют подвергнуть процедуре обессмоливания.

Еще одним недостатком при работе с водными бейцами является проблема поднятого ворса. Для устранения этого дефекта подготовленную поверхность смачивают водой и дают ей просохнуть. Затем изделие ошкуривают мелкозернистой бумагой и его вскрывают отделочным составом.

После обработки древесины водной морилкой на ее полное высыхание уходит 12-14 часов.

В каких случаях уместны спиртовые морилки?

Спиртовые морилки – это категория отделочных составов на основе анилиновых красителей, разведенных в спирте. Как и водные бейцы, такой продукт предлагается в порошковом и жидком виде. Отличительной особенностью отделки является ускоренное проникновение красящих пигментов в структуру древесины и быстрое высыхание.

Оптимальный метод нанесение спиртовой морилки – применение краскопульта. Использование кисти, валика и тампонов при работе с такими составами – неэффективно, из-за быстрого высыхания. Применение ручных методов часто заканчивается разводами, неравномерным тоном, пятнами и другими дефектами.

Такие составы оптимальны при отделке поверхностей больших площадей. Близкими по характеристикам к ним являются нитроморилки – бейцы на основе растворителей.

Высыхание морилки на спиртовой основе происходит за 20-30 минут.

Масляные морилки и их особенности

Отделочный состав представляет собой красители, растворенные в масле, как правило, льняном. Морилка легко и равномерно наносится на древесину, причем, как ручными методами, так и краскопультом. Она не образует поверхностных пленок, подчеркивает текстуру дерева и обеспечивает воздухообмен.

Отличительной особенностью красящих пигментов таких составов является их устойчивость перед УФ-излучением, за счет чего выкрашенные поверхности не выгорают на солнце, сохраняя насыщенность цвета годами. Для разведения масляных составов используют уайт-спирит

Сколько сохнет такая морилка, зависит от степени ее концентрации и ряда других факторов. В среднем на это уходит от 2-х до 4-х часов.

Восковые и акриловые составы

По всем основным характеристикам такие морилки схожи с масляными аналогами. Отличительной особенностью восковых и акриловых бейцев являются их влагозащитные свойства. Отделка хорошо защищает поверхность дерева от воды, но при этом уязвима к механическим повреждениям.

Восковые и акриловые составы легко наносятся ручными методами, держат одинаковый тон, не оставляют разводов. Они не поднимают ворс и хорошо подчеркивают натуральную текстуру дерева. Этот тип отделки активно применяется при реставрации мебели. Бейцы данного типа предлагаются в широкой цветовой палитре.

Сколько сохнет такая морилка, также зависит от комплекса факторов. В среднем процесс полного высыхания восковых и акриловых морилок занимает 4-5 часов.

Какие инструменты используют для нанесения морилки?

Морение дерева в домашних условиях можно производить кистью, поролоновым или тканевым тампоном, малярным валиком, а также краскопультом. Выбор техники определяется в первую очередь типом отделочного состава.

Оптимальное соотношение материалов и используемых инструментов:

  • спиртовые и нитроморилки – краскопульт;
  • водные морилки – тампоны, валик, кисти с синтетической щетиной;
  • масляные и акриловые морилки – широкие кисти с натуральной щетиной, безворсовые тампоны.

Как красить морилкой дерево: способы нанесения отделочного состава

Существует два общепринятых метода обработки дерева морилкой:

  1. Нанесение состава с избытком и последующее удаление излишков тампоном.

Техника актуальна в первую очередь для водных составов. Она позволяет выровнять цветовые переходы, устранить подтеки и достичь более светлых тонов. Морилка наносится круговыми (тампон) или продольными (валик, кисть) движениями, с последующим вытиранием вдоль волокон. После подсыхания первого слоя – наносится второй. Процедура повторяется до достижения желаемой насыщенности цвета.

  1. Нанесение состава с избытком без последующего вытирания излишков.

Эта техника более уместна при использовании восковых, масляных и акриловых морилок, когда стоит задача достичь глубоких оттенков древесины. Допускается частичное вытирание излишков, после того как основная часть состава впитается в структуру дерева. Это позволяет выровнять тон и избавиться от незначительных дефектов, которые могут возникнуть при нанесении состава.

  • для усиления адгезии морилку можно немного подогреть, это улучшит скорость и глубину проникновения состава в структуру древесины;
  • не рекомендуется сильно вымакивать кисть, тампон или валик в отделочном составе. Контролируемый забор морилки минимизирует риск образования подтеков и клякс.
  • торцы доски обрабатывают морилкой более интенсивно, чем основную поверхность, т.к. они активней впитывают состав.

Как подготовить поверхность к отделке?

Говоря о достоинствах морилки, не следует забывать, что она подчеркивает не только выразительность текстуры дерева, но и все дефекты, имеющиеся на его поверхности. Поэтому надлежащей подготовке изделия уделяют особое внимание.

  1. Деревянная поверхность ошкуривается средне- и мелкозернистой бумагой. Старое покрытие, при наличии такового, полностью снимается.
  2. Очищенная и выровненная шлифовкой поверхность обезжиривается губкой, смоченной в уайт-спирите.
  3. Хвойные породы подвергаются процедуре обессмоливания, для этого их обрабатывают специальным составом.
  4. При работе с водными бейцами на деревянной поверхности предварительно устраняют поднятый ворс (см. пункт 2).
  5. На подготовленной поверхности делают цветовую пробу. Пробный выкрас позволит понять, как состав взаимодействует с конкретной породой дерева и сколько его слоев потребуется нанести, чтобы достичь желаемого цвета.

Соблюдение этого алгоритма поможет достичь профессионального результата при морении древесины в домашних условиях.

Как решить проблему пятнистости?

Неравномерный тон отделки, когда в одних местах морилка проявляется сильнее, а в других слабее, – это распространенная проблема, которая связана с особенностями некоторых пород древа. Пятнистость может возникать при обработке смолянистой древесины, а также пород с неравномерной плотностью или фанеры. В первом случае, рекомендуют обессмоливать поверхность, во втором – предварительно обрабатывать дерево специальными кондиционерами, которые закроют поры и обеспечат равномерное поглощение морилки.

Покраска деревянных изделий морилкой и лаком

Для усиления износостойкости и привлекательности поверхности деревянных изделий, покрашенных морилкой, их дополнительно вскрывают лаком. На этом этапе многие сталкиваются с проблемой, когда при наложении лака морилка начинает идти размывами, что в итоге неисправимо портит всю проделанную работу.

На этапе финишной отделки важно помнить:

  • водные морилки должны сочетаться с НЕводными лаками;
  • спиртовые морилки – с НЕспиртовыми лакокрасочными составами.

Морилка — красящей состав, как правило, растворимый в воде, применяемый для окрашивания поверхностей изделий из дерева. Еще одно наименование морилок — бейц.

Состав морилок разработан таким образом, что при обработке поверхности, вещество не пропитывает структуру древесины, а просто придает ей другой цвет.

Морилка находит применение для скрытия натуральной окраски древесины. Также для придания поверхностям более нового вида.

Все морилки по основному материалу, применяемому для их изготовления, разделяются на 3 категории:

  1. Морилка для дерева на водной основе

    Основа морилки — вода. Продукт производится в нескольких разновидностях: готовое состояние к использованию, а также в виде порошка, который необходимо растворить в воде. Данная разновидность является наиболее распространенной и позволяет окрашивать поверхности в любые цветовые оттенки, большей степени оттенки дерева. Недостатком морилок на водной основе заключается в том, что при нанесении материал поднимает волокна дерева. Данный факт подчеркивает структуру дерева, но в тоже время вспученные волокна отлично впитывают в себя влагу. Чтобы не было такого явления необходимо перед нанесением морилки смочить водой дерево, выдержав некоторое время в воде. Далее изделие натирается абразивным материалом и последним шагом наносится морилка. Преимуществом морилок на водной основе является отсутствие у них каких-либо запахов, что не наносит вреда здоровью человека;

  2. Морилка для дерева на спиртовой основе

    Основной компонент морилки — спирт. В этом варианте морилка представляет из себя раствор красящего вещества анилина в денатурате. Описываемая разновидность производится также, как и морилка с основой из воды, в двух вариантах — готовый продукт к употреблению и в виде порошка. Минусом этой разновидности морилок является их быстрое высыхание, являющееся причиной появления пятен. Нанесение такого материала ручными способами предоставляет затруднения из-за неравномерности цветового окраса полученного покрытия. Наилучший результат будет наблюдать при применении краскопультов;

  3. Морилка для дерева на масляной основе

    Основа морилки — масло. Данная основа позволяет придать обрабатываемому объекту любой из имеющихся цветовых оттенков дерева. Это становится возможным благодаря смешиванию красителей, которые растворяются в маслах. Для приготовления морилок к употреблению их необходимо разбавлять уайт — спиритом. Эта разновидность не представляет затруднений при их нанесении. Обработанная поверхность быстро высыхает, покрытие наносится равномерно, не вспучивая волокна дерева.

Также имеются морилки на основе акрила и воска. Эти виды разработаны таким образом, что они не имеют недостатков, которые описаны у выше перечисленных разновидностей: не вспучивают волокна древесины, не оставляют пятен, а наносимое покрытие предохраняет дерево от влажности. При разливании воды на поверхности, обработанные акриловыми и восковыми морилками, наблюдается разлет капель воды.

Морилка для дерева акриловая

Морилки на акриловой основе не имеют специфических запахов, а также огнеупорны. При их нанесении необходимо не «перебрать» с толщиной наносимого покрытия

Морилка для дерева восковая

Восковые морилки придают поверхностям яркость, а наносятся на поверхность при помощи гибки или негрубой ткани втиранием, прикладывая небольшое усилие.

Но по мимо того, что эти разновидности защищают поверхности, они также сами нуждаются в защитной обработке. В качестве защитного покрытия для морилок применяют лаки по дереву. Только морилки на основе акрила и воска обладают различными цветовыми окрасами, идеально выделяя структуру деревянной поверхности. По этой причине обе разновидности носят название рустиковые.

Самостоятельно приготовленные морилки в большей мере преображают деревянные поверхности. Хорошо выглядит крепкий навар листвиничной коры, несущий красный оттенок.

Разнообразные цветовые окраски получаются при отваре мелко измельченной скорлупы грецкого ореха. Далее в раствор через мелкое сито добавляется пищевая сода. Дерево, покрытое подобным составом, имеет коричневый цвет. Для придания красноватого оттенка, после высыхания поверхности ее можно обработать раствором бихромата калия.

Серые тона дереву, обработанному раствором из ореховой скорлупы. Можно придать натиранием разбавленным раствором уксусной кислоты.

Ольховая кора, а точнее ее отвар, придают обрабатываемым объектам глубоко темные окрасы. Равномерный оттенок коричневого цвета получаются при соединении равномерных количеств дубовой коры, ивовой и скорлупы грецких орехов. Все составляющие заправляются водой и доводятся до кипения. Следующим этапом добавить 0,5 чайной ложки пищевой соды и варить еще в продолжительности 10 минут.

Кофе придает дереву необычный цвет. Разнообразные оттенки коричневого определяются количеством добавленного кофе. Кофе заваривают с добавлением соды и раствор наносят горячим.

Имеется также классификация морилок по мере предназначения: для обработки поверхностей внутри помещений, а также для наружной обработки. Морилки для наружных работ содержат специальное вещество, не позволяющее ей выцветать при воздействии лучей ультра — фиолета.

При выборе инструмента нанесения морилки необходимо уделить внимание ниже представленным факторам:

  1. От размера площади обрабатываемого объекта может применяться обыкновенная кисть, тампон из поролона, а также пневматические распылители. Особых показаний по применению предмета для нанесения не имеется. Но при использовании морилок на нитро основе, имеющих свойство быстро высыхать, применение кистей и тампонов сопровождается появлением пятен, в связи с чем лучше использовать распылители, не обращая внимание на площади обрабатываемых поверхностей. Остальные разновидности морилок наносятся при помощи любого инструмента, обращая внимание только на площадь поверхности;
  2. Для достижения насыщенного окраса поверхности обработку поверхности проводить в несколько слоев. Следующий слой в обязательном порядке должен наносится после полного высыхания предыдущего. Необходимо также полное высыхание перед нанесением финишного слоя морилки или лака.

Цвета морилок для дерева

Немногим известен тот факт, что одну поверхность можно обрабатывать морилками различных цветов. Данный метод применяется для подчеркивания структуры дерева, а также для придания эффекта старины. Цветовые окрасы «белый дуб» и «дуб Арктик» воспроизводятся при смешении двух разновидностях морилок.

В первую очередь применяют отбеливатель древесного покрытия (белого цвета морилка, основной компонент которой — вода), далее, после высыхания этого слоя все дефекты в древесине наполняются морилкой на основе масла, содержащей твердый воск. Воск, попадая в эти поры, забивает их и придает серый или черный оттенок, зависящий от выбранного цвета масла. Внимание привлекает тот факт, оставшаяся отбеленная часть обладает неизменным цветом, даже при обработке тонким защитным пленочным восковым или масляным покрытием.

При соединении разнообразных видов и цветовых окрасок морилок возможно получить необычные эффекты. Суть заключается в том, что в первую очередь наносится общий слой поверхности, а далее уже наносятся заключительные штрихи при нанесении морилок других цветов. Нельзя делать в обратном порядке, так как обработанная деревянная поверхность масло уже не может принимать в себя морилку. Также не стоит забывать о финишном этапе отделки — покрытие лаком.

Никому не представляет секрета то, что количество слоев морилки определяет итоговую окраску дерева. Выбрать подходящий оттенок цвета можно определиться только после проведения пробной окраски.

В первую очередь деревянный «огрызок» необходимо отшлифовать и зачистить. Далее наносится первый слой морилки. Необходимо дождаться его полного высыхания, после чего наносится второй слой, но не на всю длину доски, а на определенную ее часть. Третий слой также наносится уже на меньшую часть от второго слоя. После окончательного высыхания всех слоев морилки имеется возможность определить с нужным цветом обрабатываемого покрытия.

Необходимо обращать внимание на то, что лиственные породы древесины впитывают в себя различные составы морилок, а хвойные разновидности, из-за наличия немалого количества смол, обладают наименьшей впитываемостью.

материалы по теме
Уникальная улучшенная краска для дерева Olympic MAXIMUM® Weather-Ready

Уникальная улучшенная краска для дерева Olympic MAXIMUM ® Weather-Ready изготовлена по специальной технологии, обеспечивающей идеальную покраску деревянных поверхностей даже при сильной влажности, которую можно наносить на поверхность практически при любых погодных условиях, и в жару, и в холод, и даже, если древесина мокрая. И всё это теперь стало возможно за более короткий промежуток времени. Благодаря уникальной краске Olympic MAXIMUM ® Weather-Ready, покраска деревянной поверхности больше не будет зависеть от погодных условий и потребителям не придётся ждать хорошей погоды для осуществления покрасочных работ. Эта краска открывает перед вами больше возможностей, и вы можете заниматься покраской деревянного настила тогда, когда вам удобно, а не когда позволит погода.

Мода на натуральные материалы в строительстве, производстве изделий из мебели, отделке интерьеров уже стала традицией. И именно древесина продолжает оставаться в тренде благодаря своим экологическим и эстетическим свойствам. Но, в отличие от искусственных материалов, деревянные покрытия и конструкции могут портиться под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды, таких как влага, прямые солнечные лучи.

Пропитки для дерева в первую очередь используют для защиты древесины от разрушающего внешнего воздействия: солнца, плесени, атмосферных осадков, насекомых и т. п. Добавление пропиток значительно улучшает свойства и характеристики древесины. Она стабилизируется в размере, не настолько сильно подвергаясь деформациям от воздействия температуры, становится более прочной, существенно снижается склонность материала к растрескиванию, а также повышается стойкость к химикатам и влаге.

Виды пропиток

  • Капиллярная пропитка хорошо проникает во все капилляры древесины под воздействием естественного давления.
  • Диффузная пропитка впитывается в дерево благодаря капиллярному диффузному перемещению внутри древесины.
  • Гидростатическая пропитка впитывается в древесину по ее капиллярам за счет искусственного давления.

По типу пропитки бывают пленкообразующие и без образования защитной пленки. Пленкозащитные пропитки служат для предохранения дерева от солнечных лучей, влаги и плесени. На поверхности после использования данного типа пропитки образуется эластичная пленка, способная расширяться и сжиматься вместе с древесиной. Целостность структуры при этом совершенно не нарушается. Пропитки без образования защитной пленки впитываются внутрь дерева и предназначены для его защиты от насекомых и плесени. Пропитки надежно служат в среднем от 6 до 10 лет. Если дерево еще дополнительно покрыть специальным яхт-лаком (например), то срок службы пропиток продлевается еще на несколько лет.

Морилки предназначены для глубокой обработки перед окрашиванием древесины. Часто подобного рода покрытие никакой защиты не обеспечивает. Современные морилки имеют в своем составе полупрозрачные красители, которые проникают и задерживаются глубоко в порах древесины. Последующее нанесение дополнительных слоев придает дереву более темный и насыщенный цвет.

Морилки бывают:

Масляные
Масляные морилки имеют в своем составе красители, растворенные в маслах. Их нужно разбавлять уайт-спиритом. Процесс нанесения масляных морилок несложный, они не поднимают волокно и образуют при этом равномерный слой. Чтобы получить необходимый оттенок дерева, берут морилки нескольких цветов и перемешивают.

Спиртовые

Такие морилки представляют собой растворенные в денатурате анилиновые красители. Недостатком спиртовых морилок является их быстрое высыхание. Это приводит к возникновению пятен в местах соприкосновения не полностью высохших слоев.

Водные

Имеются в продаже в готовом виде, а также в виде кристаллов или порошка. Их необходимо развести в горячей воде самостоятельно. Водные морилки отличаются от других видов длительным временем высыхания, поэтому добиваться однородного цвета древесины придется очень долго. Перед использованием водной морилки древесину следует хорошо обработать шкуркой, чтобы не поднималось волокно, и затем смочить.

Акриловые


Для дерева акриловые морилки являются самыми новыми водными морилками с добавлением акриловых смол. При использовании этой эмульсии на поверхности дерева образуется цветная тонкая пленка. Акриловые морилки не так сильно поднимают волокно древесины, и на солнце выцветают намного меньше по сравнению с водными аналогами.

Весь процесс нанесения защитного покрытия на поверхность дерева аналогичен обычной покраске. Поверхность перед этим должна быть хорошо подготовленной. Для обработки кистью берут небольшое количество средства и равномерно наносят на поверхность обязательно вдоль волокон. Делать это нужно достаточно быстро и аккуратно.

Важно следить за тем, чтобы жидкость наносилась непрерывно. В противном случае она будет высыхать на одном участке быстрее, чем на другом, а это приведет к появлению заметных швов и неравномерного цвета. Если дерево состоит из нескольких секций, то нужно внимательно следить за тем, чтобы жидкость не перекрывала друг друга. Перед обработкой деревянной поверхности рекомендуется немного потренироваться на каком-то незаметном участке древесины. Это позволит избежать определенных трудностей в работе.

Применение пропиток надежно защитит любой деревянный дом от вредного воздействия окружающей среды, а использование морилок придаст желаемый оттенок и подчеркнет структуру древесины.

Производители морилок

Сегодня существует много производителей пропиток и морилок для защиты древесины. Из них наиболее известные немецкие компании FLAMINGO, DUFA и CAPAROL . Последняя разработала даже целую линию защитных средств для деревянных поверхностей. Не менее известные в этой области компании из Турции BETEK, DYO и MARSHALL . Особенно выделяется компания BETEK , которая очень хорошо зарекомендовала себя на постсоветском пространстве. Совсем недавно на рынок защитных материалов вышли словенские компании HELIOS и BELINKA BELLES D. O. O .

Морилка для дерева, состаренная мебель, мебельный лак: отделка мебели. Полированная мебель.

Какие материалы и технологии используются при финишной отделке мебели? И что получается в результате их применения? Изучаем современные отделочные материалы для мебели.

На фото:

В одном предмете может быть использовано несколько вариантов отделки. Этот комод частично тонирован, окрашен лессировочной краской и покрыт лаком.

Основное отличие отделочных материалов от конструкционных и облицовочных — их эфемерность. Понятием «отделочные материалы» названа большая группа химических составов, пропиток, затирок. То есть отделка мебели — это результат, который мы получим применив тот или иной реагент, ту или иную технологию обработки поверхности.

Составы

  • Морилка для дерева. Применяется для окрашивания древесины или шпона одних пород в тон других: светлый клен или дуб тонируют под вишню, орех, махагони. Морилка для дерева может быть на водной основе или на растворителе. Одну проще наносить, она бережет экологию. Другая (морилка для дерева на основе растворителя) быстрее сохнет, впитывается и имеет более широкую цветовую гамму. Полупрозрачные краски (лессировки) применяют для той же цели: окрашивают дуб в любой цвет. Такая отделка мебели не закрывает фактуру и рисунок древесины.

На фото:

Полупрозрачные лессировочные краски и лаки не скрывают природную фактуру древесины.

Мебельная затирка Подобным образом можно наносить любое вязкое вещество на поверхность древесины. Например, воск или масло (защищает от влаги). Для создания декоративных белесых прожилок в поры древесины «загоняют» гипсовую массу.

На фото: модель 5007 P фабрики Chelini, дизайн Bonan Michele.

  • Мебельный лак Различают лаки «видимые», пленка которых отливает на поверхности готовой мебели и модные «экологические» лаки-невидимки. Мебельный лак-невидимка не закрывает текстуру и рисунок деревянной мебели. Кажется, будто поверхность вообще ничем не обрабатывали.
  • Мебельная эмаль Европейские производители называют такую отделку мебели «лакированием»: на поверхности образуется цветное непрозрачное покрытие. Качество основы роли не играет: с одинаковым декоративным эффектом можно лакировать древесину, МДФ или стекло. Цветные лаки обязательно имеют насыщенный цвет; различают матовые, полуматовые и глянцевые покрытия.

На фото:

Под слоем эмали почти невозможно определить «исходный» материал: лакируют и стекло, и МДФ, и натуральное дерево. После обработки они выглядят одинаково.

Технологии

  • Полировка мебели Полированная мебель — это мебель, обработанная до сияющего блеска, вручную или с помощью специальной машины. Вопреки распространенному заблуждению, особый состав (полироль) не всегда требуется.
  • Высокотемпературная обработка В печь отправляют самые разные материалы. При подобном «запекании» древесина меняет цвет, получаются неожиданные насыщенные оттенки. На предмет мебели из металла или стекла наносят красящий пигмент: он накрепко срастается с основой. Предметы, которые прошли через такое «окрашивание порошковым способом» отличает одинаковый тон.

На фото:

После «запекания» в печи светло-бежевый ясень приобретает насыщенный коричневый тон с сероватым отливом.

  • Химический процесс Металлический предмет погружают в гальваническую ванну или проводят напыление в электромагнитном поле (например, нитридом титана имитируют позолоту на столовых приборах, люстрах или ручках мебели).

Виды отделки

  • Отделка-функция Отделочный материал также может выполнять защитные функции. Например, антикоррозийные составы для металлической мебели на улице или антистатическая облицовка-напыление на ткань, отталкивающая пыль и влагу.

На фото:

Окрашивание порошковым способом, хромирование и покрытие лаком «металлик» — три наиболее распространенных варианта антикоррозийной отделки стали.

  • Нетрадиционная отделка Для каждой группы отделочных материалов существуют традиционные и нестандартные варианты отделки. Например, древесину покрывают лаком гораздо чаще, чем обжигают газовой горелкой. Равно как и резьба по дереву воспринимается как классический тип декора, тогда как вьетнамские прорезные орнаменты по лаку европейцу не кажутся традиционными.

Имитации в моде Если взять в руки шило и хорошенько поколотить им по поверхности буфета, будет очень похоже на жучка-древоточца. Или при помощи химикатов пустить патину по металлу: особенной популярностью пользуется позеленевшая бронза, состаренная латунь и ржавое железо. Силой трения можно накинуть десяток-другой лет кожаной обивке. Или поцарапав особыми щетками массивный топ стола, получить брашированную доску с выраженной фактурой. Естественно, производители делают все так аккуратно, что разоблачить «подделку» практически невозможно.

На фото: комод tra-closto-016 фабрики Caracole.

  • Отделка-обманка Имитация дорогого материала при помощи дешевого. Например, чтобы «превратить» дуб в седой, выбеленный или шпон венге, необходимо тонировать его красящими растворами или, наоборот, обесцветить хлорсодержащими компонентами. Сегодня мастера-виртуозы научились отшлифовывать верхний дефектный слой кожи и наносить принт под кожу слона на шкуру среднестатистической европейской коровы.
  • Искусственное состаривание. Мастера виртуозно превращают новое, только что сошедшее со станка изделие, в состаренную мебель. Например, лак-кракле создает сетку прожилок на деревянной поверхности. И состаренная мебель ничем не будет отличаться от старинной, «пожившей». Можно еще особым образом стереть краску на углах и стыках комода: более глубокие слои начнут проступать через поздние. Это даст право написать производителям в своем каталоге: отделка черный «антик».

На фото:

Нередко состаривание поверхности сочетают со старинными техниками, например, ручной росписью или резьбой по дереву.

Обзор литературы и тематическое исследование

4.1 Исторические методы гистологического окрашивания в медицинских и биологических исследованиях

История окрашивания показывает, что применение гистологических методов является относительно новой областью диагностики заболеваний (Rodrigues et al., 2009). Исторические методы окрашивания ранними патологами и хирургами были заимствованы у семнадцатилетнего ученого Левенгука, который сыграл важную роль в гистологии, используя такие вещества, как марена, индиго и шафран, для окрашивания тканей и использования элементарных микроскопов для их изучения (Titford, 2009). Эти категории ранних исследователей использовали микроанатомию, чтобы установить взаимосвязь между различиями в клетках, а также разграничить нормальную структуру клеток растений и животных (Bancroft & Layton, 2013).

Позже были разработаны новые методы для углубленного изучения клеточной структуры с использованием различных лабораторных химикатов для сохранения тканей в их естественной форме перед окрашиванием (Titford & Bowman, 2012). Джозеф фон Герлах считался пионером микроскопического окрашивания в 1858 году, когда он успешно использовал аммиачный кармин для окрашивания клеток мозжечка (Costa, Brito, Gomes, & Caliari, 2010).

Первые гистологи использовали легкодоступные химические вещества для подготовки тканей к микроскопическим исследованиям; этими лабораторными химическими веществами были дихромат калия, спирт и хлорид ртути для твердых клеточных тканей (Iyiola & Avwioro, 2011). Эти фиксаторы и красители были изобретательными, и через некоторое время были разработаны цветные красители, которые до сих пор применимы в современных лабораторных методах окрашивания (Black, 2012). Примеры этих оригинальных цветных красителей, которые все еще используются, включают трихром, который используется при биопсии печени и почек, а также нитрат серебра, который используется для других организмов (Musumeci, 2014).

Значительное развитие гистологических красителей было обусловлено усовершенствованным технологическим развитием микроскопов и созданием гистологических красителей (анилиновый краситель) в 1856 году в Германии, которые производят множество новых гистологических красителей (Шостак, 2013). В то же время расширились исследования и знания, касающиеся анатомии и тканей человеческого тела, и эти знания были использованы для дальнейших исследований новых гистологических методов изучения пораженных тканей (Titford, 2009).

На пороге девятнадцатого века многие медицинские центры нанимали врачей, патологов и хирургов для решения хирургических проблем (Titford & Bowman, 2012). Именно эта группа патологоанатомов разработала методы интраоперационного окрашивания срезов замороженных тканей, адаптировав специальный метод окрашивания в гистопатологии. Именно в это время была разработана методика парафинового инфильтрационного окрашивания (Шостак, 2013). Благодаря этому достижению в девятнадцатом веке были изучены доброкачественные и злокачественные опухоли, а бактерия была идентифицирована как возбудитель заболевания (Godwin, 2011).

Метод окрашивания по Граму был назван в честь датского изобретателя Ганса Христиана Грама, который изобрел его как подход к дифференциации видов бактерий в 1875 году (Anderson, 2011). Именно во время работы в городском морге со своими коллегами Грэм разработал технику окрашивания с целью различения типа бактериальной инфекции, а также способ сделать бактерии видимыми на выбранных и окрашенных тканях легких во время исследования (Black, 2012). ). Хотя этот метод оказался непригодным для некоторых бактериальных организмов, он все еще используется сегодня и составляет достойную конкуренцию современным молекулярным методам гистологии (Шостак, 2013).

4.2 Важные гистологические красители, использовавшиеся в прошлом и настоящем

Кармин

Это широко используемый в гистологии краситель, используемый ранними ботаниками, такими как Джон Хилл, в своих исследованиях в 1770-х годах (Jackson & Blythe, 2013). Окрашивание использовалось для изучения микроскопических структур тканей в форме раствора аммиака, и оно до сих пор используется в гистологических исследованиях. В частности, пятно широко использовал Рудольф Вирхов (1821–1902) в микроскопических исследованиях; Вирхова считают «отцом патологии» (Musumeci, 2014).

Гематин и гематоксилин

Это встречающиеся в природе вещества, которые использовались в истории гистопатологии (Titford, 2009). Пятно было разработано Вильгельмом фон Вальдейером в 1863 году и получено из бревна, найденного в Центральной Америке. Гематоксилин является слабым красителем и используется в сочетании с другими растворами в окисленной форме (Шостак, 2013).

В частности, краситель сочетается с протравой-окислителем для повышения его способности различать клеточные компоненты; эти растворы называются гематоксилином.Универсальность окрашивания способствовала развитию различных методов гематоксилина (Titford & Bowman, 2012). Исторически сложилось так, что гематоксилин превращался в ядерный краситель, который имел более короткое время окрашивания и был устойчив к кислым растворам; это сделало его пригодным для методов гистологического окрашивания, требующих нескольких этапов (Anderson, 2011).

Нитрат серебра

Нитрат серебра долгое время использовался в исторических методах окрашивания и до сих пор используется в современной патологии.Первоначально ранние исследователи использовали нитрат серебра, чтобы улучшить видимость структуры ткани при ее изучении; это было сделано путем нанесения твердого нитрата серебра на ткань и последующего ее изучения (Titford & Bowman, 2012). Красящее вещество было разработано для многих соединений, и при использовании нитрата серебра необходимы подтверждающие тесты (Шостак, 2013). Было также обнаружено, что окрашивание нитратом серебра уменьшается аргентаффинными клетками, обнаруженными в эпителиальных выстилках легких, кишечника, меланине и других (Musumeci, 2014).

Однако были разработаны методы «подгонки» этих тканей во избежание аргирофильных реакций при использовании нитрата серебра в процессе окрашивания (Titford, 2009). В частности, для оценки отсутствующих тканей и заболеваний в печени и прямой кишке были разработаны такие методы, как ретикулиновый метод Гомори и метод Грокотта-Гомори (Nadworny, Wang, Tredget, & Robert, 2010).

Другие недавно разработанные методики окрашивания

Процедуры окрашивания гематоксилином и эозином

Хотя окрашивание гематоксилином применялось исторически, в лабораторных условиях произошли большие изменения; сегодня почти все образцы тканей обрабатывают гематоксилином и эозином (Bancroft & Layton, 2013).Кроме того, были разработаны различные методы гематоксилина, но все они следуют одному и тому же подходу к окрашиванию образцов тканей в гематоксилине, спирте и водопроводной или щелочной воде для очистки аргентафиновых агентов. Было обнаружено, что большинство гистопатологических процессов можно изучать с помощью процедур с гематоксилином и эозином (Titford & Bowman, 2012). В то же время метод быстр в исполнении, дешев и может быть изменен. Однако гематоксилин и эозин неэффективны, поскольку не все свойства вещества могут быть получены, и необходимо использовать специальные красители (Musumeci, 2014).

Окраски по Романовскому-Гимзе

Они были разработаны в 1891 году Дмитрием Романовским и популярны благодаря своей многоцветности при идентификации паразитов крови. Процедура красителей Гимзы используется до сих пор. Окрашивание значительно улучшилось, и его различные методы позволяют применять его для биопсии, залитой в парафин, фиксированной формалином и биопсии костного мозга (Musumeci, 2014).

Окрашивание по Граму

Метод окрашивания по Граму был назван в честь датского изобретателя Ганса Христиана Грама, который изобрел его как подход к дифференциации видов бактерий в 1875 году (Musumeci, 2014).Грам разработал метод окрашивания с целью различения типа бактериальной инфекции, а также как способ сделать бактерии видимыми на выбранных и окрашенных тканях легких во время исследования (Шостак, 2013). Хотя этот метод оказался непригодным для некоторых бактериальных организмов, он все еще используется сегодня и составляет достойную конкуренцию современным молекулярным методам гистологии (Rudijanto, 2007). Однако метод Грама безошибочно ограничен в применении к вопросам микробиологии окружающей среды (Titford, 2009). Кроме того, методы Грама имели успех при выполнении биопсии инфицированных частей и быстро давали результаты, особенно когда существует значительная разница в прогнозе и лечении. Этот метод часто используется в современной гистологии, особенно в парафиновых фиксаторах для срезов тканей (Titford & Bowman, 2012). В недавнем случае в Кувейте метод окрашивания по Граму оказался особенно эффективным при диагностике гонореи, что дало 99,4% эффективных результатов (Iyiola & Avwioro, 2011). Этот метод все еще используется сегодня, особенно с парафиновыми срезами, и был модифицирован для использования с различными веществами.

Трихромные красители

Историческая оценка использования различных красителей в гистологии показывает, что большинство патологоанатомов привлекали красители, которые давали многоцветные результаты на образцах тканей. Таким образом, из-за этой потребности были разработаны трихромовые красители (Шостак, 2013). Были различные множественные окраски, такие как сине-эозиновая, «трикислотная окраска» Эрлиха (1888 г. ) и трихромная окраска Массона, которые были популярны в современной гистологии. Окрашивание трихромом показывает, насколько сложными стали методы окрашивания в поисках эффективного и последовательного окрашивания, которое могло бы показать тонкие дифференцированные ткани (Musumeci, 2014).

4.3 Обзоры примеров из практики

Пример из практики 1

Это исследование было проведено для сравнения различных методов окрашивания и оценки их эффективности. Конкретная цель состояла в том, чтобы оценить, используются ли недавно разработанные методы окрашивания, методы окрашивания HpSS серебром Helicobacter pylori и модифицированные методы Макмаллена для идентификации организма H. pylori. Методика заключалась в отборе срезов тканей желудка из биоптатов 63 больных с диагнозом диспепсия.Ткани срезов окрашивали четырьмя методами окрашивания. Во всех 63 случаях 30 срезов дали положительный результат на Helicobacter pylori, в то время как 30 дали отрицательный результат на все случаи инфекции pylori, а остальные были протестированы с использованием комбинации пяти гистологических тестов (Anderson, 2011). Результаты показали, что метод межнаблюдательного окрашивания был лучшим для антител с показателем 98%, за ним следует метод Гимзы с показателем 87%, затем метод окрашивания HpSS с показателем 85%. На уровне золотого стандарта было обнаружено, что метод окрашивания по Гимзе был лучшим, за ним следовал метод Макмаллена (Rotimi, Cairns, Gray, Moayyedi, & Dixon, 2000).Выводы исследования заключались в том, что во всех случаях окрашивания выявлялась инфекция H pylori ; однако модифицированное окрашивание по Гимзе было наиболее эффективным благодаря своей чувствительности, простоте использования, воспроизводимости и экономичности.

Практический пример 2

Цель состояла в том, чтобы исследовать разницу в емкости между различными красителями: гематоксилином и эозином, красителем толуидиновым синим, иммуноокрашиванием нейрон-специфической енолазой (NSE) и белком S 100. Эти окраски применяли для оценки присутствия нейронов и тучных клеток в острых аппендиксах. Образцы собирали из клинически острых аппендиксов, классифицированных как гистологически положительные и отрицательные.В ходе исследования все 50 срезов образцов аппендикса подвергали окрашиванию гематоксилином и эозином, окрашиванию толуидиновым синим, иммуноокрашиванию нейрон-специфической енолазой (NSE) и белку S 100. Гематоксилин и эозин применяли в качестве обычной окраски для общего исследования тканей, в то время как окраску толуидиновым синим применяли для облегчения изучения тучных клеток. Кроме того, в качестве маркера использовали иммуноокрашивание нейрон-специфической енолазой (NSE), а также белок S 100.

Результаты показали, что при сравнении окраски гематоксилином и эозином с S 100 они? показали 100% точность в идентификации денатурированных клеток слизистой оболочки.Однако комбинация этих различных методов окрашивания привела к созданию дополнительной техники, более эффективной, чем традиционный метод окрашивания, для наблюдения за изменениями и характером пораженных клеток, а также морфологической формой нервных волокон в воспаленных аппендиксах (Russell & Gordon, 2009). Кроме того, использование нескольких методов окрашивания помогло подтвердить результаты ранней диагностики окрашивания.

Методы дифференциального окрашивания – микробиология: лабораторный опыт

Просмотр бактериальных клеток

Микроскоп является очень важным инструментом в микробиологии, но существуют ограничения, когда дело доходит до его использования для наблюдения за клетками вообще и бактериальными клетками в частности.Двумя наиболее важными проблемами являются разрешение и контрастность. Разрешение — это ограничение, с которым мы ничего не можем поделать, поскольку большинство бактериальных клеток уже приближаются к пределу разрешения большинства световых микроскопов. Контрастность, однако, может быть улучшена либо с помощью другого типа оптической системы, такой как фазово-контрастный или дифференциально-интерференционно-контрастный микроскоп, либо путем окрашивания клеток (или фона) хромогенным красителем, который не только добавляет контраст, но и дает им тоже цвет.

В микробиологии используется множество различных красителей и процедур окрашивания. Некоторые из них включают одно окрашивание и всего несколько шагов, в то время как другие используют несколько окрашиваний и более сложную процедуру. Прежде чем приступить к процедуре окрашивания, клетки необходимо смонтировать (размазать) и зафиксировать на предметном стекле.

Бактериальный мазок — это просто небольшое количество культуры, нанесенное очень тонкой пленкой на поверхность предметного стекла. Чтобы предотвратить вымывание бактерий на этапах окрашивания, мазок можно химически или физически «фиксировать» на поверхности предметного стекла.Тепловая фиксация — это простой и эффективный метод, который достигается путем кратковременного пропускания предметного стекла через пламя горелки Бунзена, в результате чего биологический материал более или менее постоянно прикрепляется к поверхности стекла.

Мазки, зафиксированные нагреванием, готовы к окрашиванию. При простом окрашивании в мазок добавляются красители, которые либо притягиваются за счет заряда (катионный краситель, такой как метиленовый синий или кристаллический фиолетовый), либо отталкиваются за счет заряда (анионный краситель, такой как эозин или тушь). Катионные красители связывают бактериальные клетки, что хорошо видно на ярком фоне.Анионные красители отталкиваются клетками, поэтому клетки ярко светятся на окрашенном фоне. См. рисунки 1 и 2 для примеров обоих.

Рисунок 1. Отрицательное окрашивание Cyptococcus neoformans , инкапсулированных дрожжей. Рисунок 2. Положительная окраска Staphylococcus aureus.

Вероятно, наиболее важным признаком, который становится очевидным при окрашивании бактериальных клеток, является их клеточная морфология (не путать с колониальной морфологией, которая представляет собой появление бактериальных колоний на чашке с агаром).Большинство гетеротрофных и культивируемых бактерий имеют несколько основных форм: сферические клетки (кокки/кокки), палочковидные клетки (бациллы/бациллы) или палочковидные клетки с изгибами или изгибами (вибрионы и спириллы соответственно). Существует большее разнообразие форм среди архей и других бактерий, обитающих в экосистемах, отличных от человеческого тела.

Часто бактерии создают специфические расположения клеток, которые образуются в результате бинарного деления бактерий при их размножении. Механизмы особенно очевидны для неподвижных бактерий, потому что клетки имеют тенденцию оставаться вместе после завершения процесса деления.И форма, и расположение клеток являются характеристиками, по которым можно различать бактерии. Наиболее часто встречающиеся формы бактерий (кокки и бациллы) и их возможное расположение показаны на рисунках 3 и 4.

Рисунок 3. Возможное расположение бактериальных клеток кокков. Рисунок 4. Возможное расположение бактериальных клеток для бацилл

Дифференциальные методы окрашивания

В микробиологии методы дифференциального окрашивания используются чаще, чем простое окрашивание, как средство сбора информации о бактериях.Методы дифференциального окрашивания, которые обычно требуют более одного окрашивания и нескольких стадий, называются таковыми, потому что они позволяют дифференцировать типы клеток или клеточные структуры. Наиболее важным из них является окраска по Граму. Другие дифференциальные методы окрашивания включают окрашивание эндоспор (для выявления бактерий, образующих эндоспоры), кислотоустойчивое окрашивание (для отличия видов Mycobacterium от других бактерий), метахроматическое окрашивание для выявления гранул запаса фосфата и окрашивание капсулы (для выявления инкапсулированные бактерии).Мы будем выполнять процедуры окрашивания по Граму и эндоспор в лаборатории и просматривать подготовленные слайды, которые подчеркивают некоторые другие клеточные структуры, присутствующие в некоторых бактериях.

Краситель по грамму

Рисунок 5. Бактерии, окрашенные по Граму.

В 1884 году врач Ганс Кристиан Грам изучал этиологию (причину) респираторных заболеваний, таких как пневмония. Он разработал процедуру окрашивания, которая позволила ему идентифицировать бактерию в легочной ткани, взятой у умерших пациентов, как этиологический агент фатальной пневмонии.Хотя метод окрашивания по Граму мало помог в лечении болезни, метод окрашивания по Граму значительно облегчил диагностику причины смерти человека при вскрытии. Сегодня мы используем методы окрашивания по Граму, чтобы помочь в идентификации бактерий, начиная с предварительной классификации в одну из двух групп: грамположительные или грамотрицательные .

Дифференциальный характер окраски по Граму основан на способности некоторых бактериальных клеток сохранять первичную окраску (кристаллический фиолетовый), сопротивляясь процессу обесцвечивания.Окрашивание по Граму включает четыре этапа. Сначала клетки окрашивают кристаллическим фиолетовым, а затем добавляют закрепитель красителя (йод). Затем применяется спирт, который избирательно удаляет окраску только с грамотрицательных клеток. Наконец, добавляется вторичный краситель, сафранин, который контрастно окрашивает обесцвеченные клетки в розовый цвет.

Хотя Грам в то время этого не знал, основное различие между этими двумя типами бактериальных клеток заключается в их клеточных стенках. Стенки грамотрицательных клеток имеют внешнюю мембрану (также называемую оболочкой), которая растворяется во время промывки спиртом. Это позволяет кристаллическому фиолетовому красителю уйти. Только обесцвеченные клетки поглощают розовый краситель сафранин, что объясняет разницу в цвете между двумя типами клеток. По завершении процедуры окрашивания по Граму грамположительные клетки становятся фиолетовыми, а грамотрицательные — розовыми.

При интерпретации окрашенного по Граму мазка необходимо также описать морфологию (форму) клеток и их расположение. На рисунке 5 представлены два различных типа бактерий, которые можно различить по реакции окрашивания по Граму, а также по их форме и расположению.Ниже опишите эти характеристики для обеих бактерий:

Грамположительные бактерии: Грамотрицательная бактерия:
Морфология
Расположение

Кислотостойкий краситель

Некоторые бактерии производят восковидное вещество миколиков кислоту , когда они строят свои клеточные стенки. Миколевая кислота действует как барьер, защищая клетки от обезвоживания, а также от фагоцитоза клетками иммунной системы хозяина. Этот восковой барьер также предотвращает проникновение красителей в клетку, поэтому окрашивание по Граму не работает с микобактериями, такими как Mycobacterium , которые являются патогенами человека и животных. Для этих бактерий используется метод кислотного быстрого окрашивания .

Рисунок 6. Кислотоустойчивые палочки в мокроте

Для выполнения кислотостойкой окраски термофиксированный мазок заливают первичным красителем карбол-фуксин, а предметное стекло нагревают на водяной бане с водяным паром.Тепло «плавит» восковую клеточную стенку и позволяет клеткам поглощать краситель. Затем предметному стеклу дают остыть и добавляют раствор кислоты и спирта в качестве обесцвечивателя. Клетки, которые являются «кислотостойкими» из-за миколовой кислоты в их клеточной стенке, сопротивляются обесцвечиванию и сохраняют первичное окрашивание. Все остальные типы клеток будут обесцвечены. Затем в качестве контрастного красителя используется метиленовый синий. В конце концов, кислотоустойчивые бактерии (КУБ) будут окрашены в ярко-розовый цвет, а все остальные типы клеток будут казаться голубыми.

Методы окрашивания для выделения специфических клеточных структур

Капсула : Полисахаридная слизь, которая окружает некоторые виды бактерий и несколько типов эукариотических микробов, лучше всего визуализируется при отрицательном окрашивании клеток. В этом методе бактерии сначала смешивают с красителем, а затем каплю смеси распределяют по поверхности предметного стекла тонкой пленкой. При использовании этого метода капсулы выглядят как прозрачный слой вокруг бактериальных клеток с темным фоном.

MetaChromatic гранул или или Другие INTRACTOMETOPLAMSIC Органы : Некоторые бактерии могут содержать тела хранения, которые могут быть окрашены. Одним из примеров является грамположительная бацилла Corynebacterium , которая хранит фосфат в структурах, называемых «волютин» или метахроматических гранулах, которые находятся внутри клеточной мембраны. Различные методы окрашивания используются для визуализации внутрицитоплазматических телец у бактерий, которые часто дают ключ к идентификации при наблюдении в клетках.

Окрашивание эндоспор

Эндоспоры — это спящие формы живых бактерий, и их не следует путать с репродуктивными спорами, вырабатываемыми грибами. Эти структуры производятся несколькими родами грамположительных бактерий, почти всеми бациллами, в ответ на неблагоприятные условия окружающей среды. Двумя распространенными бактериями, которые производят эндоспоры, являются Bacillus или Clostridum . Оба живут в основном в почве и как симбионты растений и животных и производят эндоспоры, чтобы выжить в среде, которая быстро и часто меняется.

Процесс эндоспоруляции (образование эндоспор) включает несколько стадий. После того, как бактериальная клетка реплицирует свою ДНК, образуются слои пептидогликана и белка, окружающие генетический материал. После полного формирования эндоспора высвобождается из клетки и может находиться в состоянии покоя в течение нескольких дней, недель или лет. Когда преобладают более благоприятные условия окружающей среды, эндоспоры прорастают и возвращаются к активной деятельности в качестве вегетативных клеток.

Зрелые эндоспоры обладают высокой устойчивостью к условиям окружающей среды, таким как тепло и химические вещества, что позволяет бактериям выживать в течение очень длительного периода времени.Эндоспоры, образовавшиеся миллионы лет назад, были успешно возвращены к жизни, просто обеспечив их водой и пищей.

Поскольку оболочка эндоспор очень устойчива к окрашиванию, был разработан специальный метод, чтобы их было легче увидеть в светлопольном микроскопе. Этот метод, называемый окрашиванием эндоспор , использует либо тепло, либо длительное время воздействия, чтобы побудить эндоспоры принять первичное окрашивание, обычно водорастворимый краситель, такой как малахитовый зеленый, поскольку эндоспоры проницаемы для воды. После этапа обесцвечивания, при котором краситель удаляется из вегетативных клеток в мазке, применяется контрастное окрашивание сафранином для придания цвета и контраста. При окрашивании этим методом эндоспоры становятся зелеными, а вегетативные клетки окрашиваются в розовый цвет, как показано на рисунке 7.

Рисунок 7. Бактериальные клетки с эндоспорами, окрашенные красителем для эндоспор. Рисунок 8. Бациллы с эндоспорами при фазово-контрастной микроскопии.

Хотя сами эндоспоры устойчивы к окрашиванию по Граму, бактериальные клетки, захваченные в процессе создания этих структур, могут быть окрашены.В этом случае эндоспоры видны как четкие овальные или сферические участки внутри окрашенной клетки. Эндоспоры также можно непосредственно наблюдать в клетках с помощью фазово-контрастной микроскопии, как показано на рисунке 8.

Поскольку многие методы дифференциального окрашивания требуют нескольких этапов и занимают много времени, мы не будем использовать все описанные выше методы дифференциального окрашивания.

Предварительно окрашенные предметные стекла

будут использоваться для визуализации бактериальных капсул, метахроматических гранул и кислотоустойчивых бацилл.Получите по одному предметному стеклу каждой из трех бактерий, перечисленных в таблице ниже. Просматривая эти слайды, обратите внимание на «выделенные» структуры. Ваш изолят из окружающей среды может иметь одну или несколько из этих клеточных особенностей, и научиться их распознавать поможет в идентификации. Все это следует рассматривать с помощью масляного иммерсионного объектива.

Бактерия Пятно Описание или эскиз ячеек с указанным признаком
Flavobacterium capsulatum Краситель для капсул
Corynebacterium diphtheriae Метиленовый синий (метахроматические гранулы)
Микобактерии туберкулеза Кислотостойкий краситель

Краситель по Граму

Все процедуры окрашивания следует проводить над раковиной. Будет продемонстрирована процедура окрашивания по Граму, а обзор представлен в таблице 1.

Таблица 1. Этапы процедуры окрашивания по Граму.
Ступенька Процедура Результат
Первичный краситель (кристаллический фиолетовый) Добавьте к мазку несколько капель кристаллического фиолетового и оставьте на 1 минуту. Промойте слайд водой. Как грамположительные, так и грамотрицательные клетки окрашиваются кристаллическим фиолетовым в фиолетовый цвет.
Морилка (йод) Добавьте в мазок несколько капель йода и оставьте на 1 минуту. Промойте слайд водой. Йод «задает» кристаллический фиолетовый цвет, поэтому оба вида бактерий останутся фиолетовыми.
Обесцвечивание (этанол) Добавляйте капли этанола по одной по по раз по , пока сток не станет прозрачным. Промойте слайд водой. Грамположительные клетки устойчивы к обесцвечиванию и остаются фиолетовыми. Краситель высвобождается из грамотрицательных клеток.
Контрастное окрашивание (сафранин) Добавьте в мазок несколько капель сафранина и оставьте на одну минуту. Промойте предметное стекло водой и промокните насухо. Грамотрицательные клетки окрашиваются сафранином в розовый цвет. Этот краситель не действует на грамположительные клетки, которые остаются пурпурными.

Доброволец с вашего лабораторного стола должен получить культуры бактерий, которые вы будете использовать в этой лаборатории, в соответствии с указаниями вашего инструктора.Одна из культур будет грамположительной бактерией, а другая — грамотрицательной. Ниже напишите названия бактерий, которые вы будете использовать, вместе с BSL для каждой культуры:

________________________________________________________________________________________________

Возьмите два предметных стекла и приготовьте мазок каждой из двух бактериальных культур, по одной на предметное стекло, как показано на рисунке. Дать ПОЛНОСТЬЮ высохнуть на воздухе и зафиксировать теплом. Оба мазка окрасить по Граму.Рассмотрите слайды с помощью светового микроскопа с увеличением в 1000 раз и запишите свои наблюдения в таблицу ниже.

Название культуры Реакция окрашивания по Граму Клеточная морфология Расположение

Окраска по Граму «Окончательный осмотр»: приготовьте мазок, содержащий смесь грамположительных и грамотрицательных бактерий, добавив небольшое количество каждой бактерии в одну каплю воды на предметном стекле.Нагревание фиксирует мазок и окрашивает его по Граму. Вы должны быть в состоянии определить реакцию окрашивания по Граму, клеточную морфологию и расположение ОБЕИХ бактерий в этом смешанном мазке. Ваш преподаватель может попросить показать этот слайд и предложить конструктивный комментарий.

Окрашивание эндоспор

Лишь несколько родов бактерий продуцируют эндоспоры, и почти все они являются грамположительными бациллами. Наиболее примечательны виды Bacillus и Clostridium , которые естественным образом обитают в почве и являются обычными загрязнителями поверхностей.Рост Clostridium spp. обычно ограничивается анаэробной средой; Bacillus spp. могут расти аэробно и анаэробно. Эндоспорообразующие бактерии отличаются от других групп грамположительных бацилл и отличаются своими эндоспорами.

Обзор процедуры окрашивания эндоспор представлен в таблице 2.

Таблица 2. Этапы процедуры окрашивания эндоспор.
Ступенька Процедура Результат
Первичный краситель (малахитовый зеленый) Добавьте в мазок несколько капель малахитового зеленого и оставьте на 10 минут. Если пятно начинает подсыхать, добавьте дополнительные капли. Вегетативные клетки немедленно вступают в реакцию с первичным красителем. Эндоспоры устойчивы к окрашиванию, но в конечном итоге поглощают краситель.
Обесцвечивание (вода) Промойте предметное стекло под слабой струей воды в течение 10-15 секунд. После окрашивания эндоспоры остаются зелеными. Тщательное ополаскивание водой обесцвечивает вегетативные клетки.
Контрастное окрашивание (сафранин) Добавьте в мазок несколько капель сафранина и оставьте на 1 минуту.Промойте предметное стекло и промокните насухо. Обесцвеченные вегетативные клетки окрашиваются в контрастный цвет и становятся розовыми; эндоспоры светло-зеленые.

После окрашивания эндоспоры обычно выглядят как светло-зеленые овальные или сферические структуры, которые можно увидеть внутри или снаружи вегетативных клеток, которые кажутся розовыми.

Форма и расположение эндоспор внутри бактериальных клеток, а также то, расширяются ли спорангии (D) или не расширяются (ND) стороны клетки, являются важными характеристиками, которые помогают различать виды (см. Рисунок 9). .

Рисунок 9
  1. Овальный, центральный, не расширенный (ND)
  2. Овальный, терминальный, ND (и параспоральный кристалл)
  3. Овальный, концевой, расширенный (D)
  4. Овал, центральный, D
  5. Сферический, концевой, D
  6. Овальный, боковой, D

Эндоспоры достаточно устойчивы к большинству процедур окрашивания; однако в обычно окрашенном мазке они могут быть видны как «очертания» с чистым пространством внутри. Если вы наблюдаете «очертания» или то, что кажется «призраками» клеток в окрашенном по Граму мазке грамположительных бацилл, то следует также выполнить окрашивание эндоспор, чтобы подтвердить наличие или отсутствие эндоспор.

Доброволец с вашего лабораторного стола должен получить бактериальные культуры для окрашивания эндоспор в соответствии с указаниями вашего инструктора. Обратите внимание, что все они будут видами Bacillus . Подготовить мазки и окрасить каждый, используя технику окрашивания эндоспор. Рассмотрите слайды и отметьте форму и расположение эндоспоры, а также внешний вид спорангиев (набухшие или не набухшие) в таблице ниже:

Название культуры Форма эндоспор Местоположение Спорангий

Кроме того, выберите ОДНУ из указанных выше культур и окрасьте ее по Граму.Запишите свои результаты ниже в отведенных местах:

Наименование культуры, окрашенной по Граму: _________________________________________________________

Реакция окрашивания по Граму и клеточная морфология: ___________________________________________

Видны ли эндоспоры в мазке, окрашенном по Граму? _________________ Если вы видите эндоспоры, опишите, как они выглядят в препарате, окрашенном по Граму, и чем они похожи и отличаются от того, что вы видите в препарате, окрашенном эндоспорами.

 

Методы окрашивания

Поскольку микробная цитоплазма обычно прозрачна, необходимо окрасить микроорганизмы, прежде чем их можно будет увидеть в световом микроскопе. В некоторых случаях окрашивание не требуется, например, когда микроорганизмы очень большие или когда необходимо изучить подвижность, и каплю микроорганизмов можно поместить прямо на предметное стекло и наблюдать. Такая подготовка называется влажным креплением . Влажный препарат также можно приготовить, поместив каплю культуры на покровное стекло (стеклянная крышка для предметного стекла), а затем перевернув ее над выдолбленным предметным стеклом.Эта процедура называется висячей каплей .

При подготовке к окрашиванию небольшой образец микроорганизмов помещают на предметное стекло и дают ему высохнуть на воздухе. Мазок фиксируют нагреванием, быстро пропуская его над пламенем. Термофиксация убивает микроорганизмы, заставляет их прилипать к предметному стеклу и позволяет им принять краситель.

Простые методы окрашивания. Окрашивание можно проводить основными красителями, такими как кристаллический фиолетовый или метиленовый синий, положительно заряженными красителями, которые притягиваются к отрицательно заряженным материалам микробной цитоплазмы.Такой процедурой является простая процедура окрашивания . В качестве альтернативы можно использовать такие красители, как нигрозин или конго красный, кислые отрицательно заряженные красители. Они отталкиваются отрицательно заряженной цитоплазмой и собираются вокруг клеток, оставляя клетки чистыми и неокрашенными. Этот метод называется методом отрицательного окрашивания .

Методы дифференциального окрашивания. Метод дифференциального окрашивания различает два вида микроорганизмов. Примером может служить метод окрашивания по Граму. Этот дифференциальный метод разделяет бактерии на две группы: грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии. Сначала наносится кристаллический фиолетовый, а затем йодная протрава, которая фиксирует пятно (рис. ). Затем предметное стекло промывают спиртом, и грамположительные бактерии сохраняют окрашивание кристаллическим фиолетовым йодом; однако грамотрицательные бактерии теряют окраску. Затем грамотрицательные бактерии окрашивают красителем сафранином, который используется в качестве контрастного красителя. Эти бактерии кажутся красными под масляной иммерсионной линзой, в то время как грамположительные бактерии кажутся синими или пурпурными, отражая кристаллический фиолетовый цвет, оставшийся во время этапа промывки.

Еще один дифференциальный метод окраски — кислотостойкий метод . Этот метод позволяет дифференцировать виды Mycobacterium от других бактерий. Тепло или липидный растворитель используются для переноса первого красителя, карбофуксина, в клетки. Затем клетки промывают разбавленным кислотно-спиртовым раствором. Виды Mycobacterium устойчивы к воздействию кислоты-спирта и сохраняют окраску карбофуксином (ярко-красный цвет). Другие бактерии теряют окраску и приобретают последующее окрашивание метиленовым синим (синим).Таким образом, кислотоустойчивые бактерии кажутся ярко-красными, тогда как некислотоустойчивые бактерии кажутся синими при наблюдении под масляной иммерсионной микроскопией.

Другие методы окрашивания направлены на выявление различных важных бактериальных структур. Например, специальный метод окрашивания выделяет жгутиков бактерий, покрывая жгутики красителями или металлами для увеличения их ширины. Затем можно наблюдать окрашенные таким образом жгутики.

Для исследования спор бактерий используется специальный метод окраски. Малахитовый зеленый используется при нагревании, чтобы заставить краситель проникнуть в клетки и придать им цвет. Затем используется контрастное окрашивание сафранин, чтобы придать цвет неспорообразующим бактериям. В конце процедуры споры окрашиваются в зеленый цвет, а другие клетки — в красный.

Окрашивание по Граму для разделения бактерий на две группы .

Еще один метод дифференциального окрашивания – кислотостойкий метод .  Этот метод позволяет отличить виды Mycobacterium от других бактерий.Тепло или липидный растворитель используются для переноса первого красителя, карбофуксина, в клетки. Затем клетки промывают разбавленным кислотно-спиртовым раствором. Виды Mycobacterium устойчивы к действию кислоты и спирта и сохраняют окраску карбофуксином (ярко-красный). Другие бактерии теряют окраску и приобретают последующее окрашивание метиленовым синим (синим). Таким образом, кислотоустойчивые бактерии кажутся ярко-красными, тогда как некислотоустойчивые бактерии кажутся синими при наблюдении под масляной иммерсионной микроскопией.

Другие методы окрашивания направлены на выявление различных важных бактериальных структур.Например, специальный метод окрашивания выделяет жгутиков бактерий, покрывая жгутики красителями или металлами для увеличения их ширины. Затем можно наблюдать окрашенные таким образом жгутики.

Для исследования спор бактерий используется специальный метод окрашивания.  Малахитовый зеленый используется при нагревании, чтобы заставить краситель проникнуть в клетки и придать им цвет. Затем используется контрастное окрашивание сафранин, чтобы придать цвет неспорообразующим бактериям. В конце процедуры споры окрашиваются в зеленый цвет, а другие клетки — в красный.

Гистологические пятна | ДермНет NZ

Автор: Брайан Ву, доктор философии. Кандидат медицинских наук, Медицинская школа Кека, Лос-Анджелес, США; Главный редактор: д-р Аманда Окли, дерматолог, Гамильтон, Новая Зеландия, июль 2015 г.


Что такое гистологические пятна?

Гистология и гистопатология образцов биопсии важны для диагностики кожных заболеваний. Они часто используются для обнаружения и диагностики рака кожи.

  • Гистология относится к изучению отдельных частей и структур, составляющих клетку, и взаимосвязи между структурой и функцией.
  • Гистопатология относится к изучению аномальных или пораженных тканей.

Гистологические красители используются для окрашивания различных структур внутри клеток.

Обработка ткани

Перед окрашиванием предметного стекла ткань необходимо подготовить и поместить на предметное стекло.

Парафиновая техника является наиболее распространенным способом подготовки гистологического предметного стекла и включает следующие этапы:

  • Образец ткани повторно срезается и фиксируется на предметном стекле
  • Образец обезвоживают, затем заливают воском (парафином)
  • Ткань разрезана и закреплена
  • Образец ткани очищается, затем окрашивается
  • Затем ткань помещается на постоянное предметное стекло.

Другие распространенные гистологические методы включают:

  • Замороженные срезы — образцы тканей замораживают, делают срезы и срезы холодным лезвием, а затем окрашивают и исследуют
  • Полутонкий метод — ткани залиты средой, подобной эпоксидной смоле, что позволяет нарезать образец более тонкими срезами.

Какие существуют типы гистологических красителей?

Некоторые из наиболее распространенных типов пятен.

Окрашивание H&E

Это наиболее часто используемая комбинация для общего окрашивания образцов кожи, особенно полезная при диагностике и классификации рака.

  • Гемотоксилин окрашивает определенные части клетки, например ядро, в синий цвет
  • Эозин окрашивает другие части клетки, например цитоплазму, в красный или розовый цвет.

Окрашивание муцином

Окрашивание муцином лучше всего подходит для обнаружения и окрашивания мукополисахаридов. Примеры пятен муцина включают:

  • Альциановый синий
  • Муцикармин
  • Период кислоты-Шиффа (ПАШ).

Меланиновые пятна

Меланиновые пятна, как следует из названия, используются для окрашивания меланина и обычно используются для диагностики меланомы.Одним из типичных примеров окраски меланина является окраска Фонтана-Массона.

Трихромные красители

Трихромные красители используют комбинацию трех различных красителей для достижения эффекта. Они используются явно для окрашивания липидов. Общие трихромные пятна включают:

  • Трихром Гомори
  • Трихром Мэллори,
  • Суданские пятна. Один конкретный суданский краситель, известный как Red Oil O, часто используется для диагностики жировых эмболов в легких.

Какие наиболее распространенные гистологические красители?

В таблице ниже приведены примеры различных гистологических окрасок.

Каковы преимущества и недостатки традиционной гистологии?

Преимущества гистологии и гистологического окрашивания:

  • Один из самых дешевых морфологических методов
  • Позволяет исследовать большие срезы образца ткани
  • Может быть получен относительно быстро и практически без риска для пациента
  • Предоставляет клиницистам необходимый диагностический инструмент и позволяет им исследовать внутреннюю структуру различных клеток и тканей.

К недостаткам гистологии и гистологического окрашивания относятся:

  • Подготовка предметных стекол с использованием парафиновой техники может занять много времени; замороженные слайды готовятся быстрее, но это может повлиять на разрешение, особенно при использовании световой микроскопии
  • Метод подвержен человеческому фактору во время подготовки и анализа слайдов
  • Этот тип окрашивания может быть менее специфичным, чем специальные методы окрашивания, такие как иммуногистохимическое (ИГХ) окрашивание.
  • Иногда с помощью этого метода бывает сложно идентифицировать определенные типы клеток, что может снизить его ценность как диагностического инструмента.

 

Ссылки

  • Визуализация клеток, Юго-западный экологический центр наук о здоровье, Университет Аризоны, 2015 г.
  • Окрашивание для гистологии. Мир гистологии. 2014.
  • Peckham, A. Справочник по гистологии. Факультет биологических наук, Университет Лидса, 2003 г.
  • Обычное и специальное окрашивание.Лейка Биосистемс. 2014.

В сети DermNet NZ

Книги о кожных заболеваниях

Путаница при окрашивании живых/мертвых клеток для обнаружения жизненно важных микроорганизмов в биопленках ротовой полости – какой краситель подходит? | BMC Oral Health

  • Mason CA, Hamer G, Bryers JD: Гибель и лизис микроорганизмов в процессах окружающей среды. FEMS Microbiol Rev. 1986, 39: 373-401.

    Артикул Google ученый

  • Росзак Д.Б., Колвелл Р.Р.: Стратегии выживания бактерий в естественной среде.Microbiol Rev. 1987, 51: 365-379.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Капрелянц А.С., Келл Д.Б.: Экспресс-оценка жизнеспособности и жизнеспособности бактерий с помощью родамина 123 и проточной цитометрии. J Приложение Bacteriol. 1992, 72: 410-422. 10.1111/j.1365-2672.1992.tb01854.x.

    Артикул Google ученый

  • Капрелянц А.С., Готтшал Ю.К., Келл Д.Б.: Покой у неспорообразующих бактерий.FEMS Microbiol Rev. 1993, 104: 271-285.

    Артикул Google ученый

  • Decker E-M: Способность двухцветных анализов на основе прямой флуоресценции обнаруживать различные физиологические состояния оральных стрептококков. Письма Appl Microbiol. 2001, 33: 188-192. 10.1046/j.1472-765x.2001.00971.x.

    Артикул Google ученый

  • Hannig C, Basche S, Burghardt T, Al-Ahmad A, Hannig M: Влияние жидкости для полоскания рта, содержащей микрокластеры гидроксиапатита, на прилипание бактерий in situ.Клин Орал Инвест. 2013, 17: 805-814. 10.1007/s00784-012-0781-6. doi:10.1007/s00784-012-0781-6

    Статья Google ученый

  • «>

    Таваколи П.Н., Аль-Ахмад А., Хот-Ханниг В., Ханниг М., Ханниг С.: Сравнение различных окрашиваний живых/мертвых для обнаружения и количественного определения прикрепившихся микроорганизмов в исходной биопленке полости рта. Клин Орал Инвест. 2013, 17: 841-850. 10.1007/s00784-012-0792-3. doi:10.1007/s00784-012-0792-3

    Статья Google ученый

  • Netuschil L: Der Biofilmdentale Plaque – Antibakterielle Beeinflussung, Strukturaus-sagen und Modellentwicklungen auf Basis von Vitalfluoreszenzuntersuchungen [Зубной налет как биопленка – антибактериальные меры, структура и модели, разработанные на основании оценок витальной флуоресценции].Кандидат наук. диссертация, медицинский факультет Карла Густава Каруса, Технический университет Дрездена. 2004, SLUB, Библиотека Саксонского государственного университета, 1-274. Подпись 3206 400 53 001

    Google ученый

  • «>

    Рупф С., Идлиби А.Н., Маррави Ф.А., Ханниг М., Шуберт А., фон Мюллер Л., Спитцер В., Холтманн Х., Леманн А., Руппелл А., Шиндлер А.: Удаление биопленок с микроструктурированного титана ex vivo: новый подход с использованием Технология атмосферной плазмы. ПЛОС Один. 2011, 6 (10): e25893-10.1371/journal.pone.0025893. doi:10.1371/journal.pone.0025893

    PubMed ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Дэйви Х.М.: Жизнь, смерть и промежуточное состояние: значения и методы в микробиологии. Appl Environ Microbiol. 2011, 77: 5571-5576. 10.1128/АЭМ.00744-11.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Пэмп С.Дж., Штернберг С., Толкер-Нильсен Т. Взгляд на микробный многоклеточный образ жизни с помощью технологии проточных клеток и конфокальной микроскопии.Цитометрия А. 2009, 75А: 90-103. 10.1002/cyto. a.20685.

    Артикул Google ученый

  • Amor KB, Breeuwer P, Verbaarschot P, Rombouts FM, Akkermans ADL, de Vos WM, Abee T: Многопараметрическая проточная цитометрия и сортировка клеток для оценки жизнеспособных, поврежденных и мертвых клеток Bifidobacterium во время стресса солей желчных кислот. Appl Environ Microbiol. 2002, 68: 5209-5216. 10.1128/АЭМ.68.11.5209-5216.2002.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Ши Л., Гюнтер С., Хюбшманн Т., Вик Л.И., Хармс Х., Мюллер С.: Пределы содержания йодида пропидия в качестве индикатора жизнеспособности клеток экологических бактерий.Цитометрия А. 2007, 71А: 592-598. 10.1002/cyto.a.20402.

    Артикул Google ученый

  • Mailaender C, Reiling N, Engelhardt H, Bossmann S, Ehlers S, Niederweis M: Порин MspA способствует росту и повышает чувствительность к антибиотикам как Mycobacterium bovis BCG, так и Mycobacterium tuberculosis. Микробиология. 2004, 150: 853-864. 10.1099/мик.0.26902-0.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Haugland RP: Справочник – руководство по флуоресцентным зондам и технологиям маркировки.Юджин, Молекулярные зонды. 2005 г., раздел 15.3; лист мп07007, 10

    Google ученый

  • Zhu M, Takenaka S, Sato M, Hoshino E: Влияние голодания и образования биопленки на кислотоустойчивость Streptococcus mutans. Оральный микробиол иммунол. 2001, 16: 24-27. 10.1034/j.1399-302x.2001.160104.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Бюргерс Р., Витеси С., Ханель С., Госау М.: Влияние различных местных периимплантитных антисептиков на Staphylococcus epidermidis, Candida albicans и Streptococcus sanguinis.Arch Oral Biol. 2012, 57: 940-947. 10.1016/j.archoralbio.2012.01.015.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Rüttermann S, Bergmann N, Beikler T, Raab WH, Janda R: Жизнеспособность бактерий на поверхностно-модифицированных стоматологических реставрационных материалах на основе смолы. Arch Oral Biol. 2012, 57: 1512-1521. 10.1016/j.archoralbio.2012.05.005.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Pan P, Barnett ML, Coelho J, Brogdon C, Finnegan MB: Определение in situ бактерицидной активности эфирного масла для полоскания рта с использованием метода витального окрашивания.Дж. Клин Пародонтол. 2000, 27: 256-261. 10.1034/j.1600-051x.2000.027004256.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Хоуп К.К., Клементс Д., Уилсон М.: Определение пространственного распределения жизнеспособных и нежизнеспособных бактерий в гидратированных зубных налетах микрокосма путем определения профиля жизнеспособности. J Appl Microbiol. 2002, 93: 448-455. 10.1046/j.1365-2672.2002.01703.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Колдуэлл Д.Е., Вольфардт Г.М., Корбер Д.Р., Лоуренс Д.Р.: Выходят ли бактериальные сообщества за пределы дарвинизма?Adv Microb Ecol. 1997, 15: 105-191. 10.1007/978-1-4757-9074-0_4.

    Артикул Google ученый

  • Korber DR, Choi A, Wolfaardt GM, Ingham SC, Caldwell DE: Топография субстрата влияет на восприимчивость биопленок Salmonella enteritidis к тринатрийфосфату. Appl Environ Microbiol. 1997, 63: 3352-3358.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Giertsen E, Guggenheim B, Thurnheer T, Gmür R: Микробиологические аспекты модели in situ для изучения воздействия антимикробных агентов на экологию зубного налета.Eur J Oral Sci. 2000, 108: 403-411. 10.1034/j.1600-0722.2000.108005403.х.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Barcina I, Gonzalez JM, Iriberri J, Egea L: Влияние видимого света на прогрессирующий покой клеток Escherichia coli в процессе выживания в естественной пресной воде. Appl Environ Microbiol. 1989, 55: 246-251.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Barer MR, Gribbon LT, Harwood CR, Nwoguh CE: Жизнеспособная, но не культивируемая гипотеза и медицинская бактериология.Rev Med Microbiol. 1993, 4: 183-191. 10.1097/00013542-199310000-00001.

    Артикул Google ученый

  • Bogosian G, Sammons LE, Morris PJL, O’Neil JP, Heitkamp MA, Weber DB: Гибель штамма W3110 Escherichia coli K-12 в почве и воде. Appl Environ Microbiol. 1996, 62: 4114-4120.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • «>

    Bogosian G, Morris PJL, O’Neil JP: Метод выделения смешанной культуры показывает, что кишечные бактерии не переходят в жизнеспособное, но не культивируемое состояние.Appl Environ Microbiol. 1998, 64: 1736-1742.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Bowden GHW, Hamilton IR: Выживание бактерий полости рта. Crit Rev Oral Biol Med. 1998, 9: 54-85. 10.1177/104544119800

    401.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Баттон Д.К., Шут Ф., Куанг П., Мартин Р., Робертсон Б.Р.: Жизнеспособность и изоляция морских бактерий методом разбавления: теория, процедуры и первоначальные результаты.Appl Environ Microbiol. 1993, 59: 881-891.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Colwell RR: Некультивируемый, но жизнеспособный и потенциально патогенный. Централбл Бактериол. 1993, 279: 154-156. 10.1016/S0934-8840(11)80392-0.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Colwell RR, Brayton PR, Grimes DJ, Roszak DB, Huq SA, Palmer LM: Жизнеспособные, но не культивируемые Vibrio cholerae и родственные патогены в окружающей среде: значение для выпуска генетически модифицированных микроорганизмов.Биотехнологии. 1985, 3: 817-820.

    Google ученый

  • Доу Л.Л., Пенроуз В.Р. «Бактерицидное» свойство морской воды: смерть или ослабление?. Appl Environ Microbiol. 1978, 35: 829-833.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Дункан С., Гловер Л.А., Киллхэм К., Проссер Д.И.: Определение активности голодающих и жизнеспособных, но некультивируемых бактерий на основе люминесценции.Appl Environ Microbiol. 1994, 60: 1308-1316.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Гонсалес Дж.М., Ириберри Дж., Эджеа Л., Барсина И.: Характеристика культивируемости, выпаса протистан и гибели кишечных бактерий в водных экосистемах. Appl Environ Microbiol. 1992, 58: 998-1004.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Гриббон ​​Л.Т., Барер М.Р.: Окислительный метаболизм в некультивируемых клетках Helicobacter pylori и Vibrio vulnificus, изученный с помощью восстановления тетразолия с усиленным субстратом и цифровой обработки изображений.Appl Environ Microbiol. 1995, 61: 3379-3384.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Höfle M: ​​Долгосрочные изменения в хемостатных культурах Cytophaga johnsonae. Appl Environ Microbiol. 1983, 46: 1045-1053.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • «>

    Hood MA, MacDonell MT: Распространение ультрамикробактерий в эстуарии побережья Мексиканского залива и индукция ультрамикробактерий.Микроб Экол. 1987, 14: 113-127. 10.1007/BF02013017.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Келл Д.Б., Райдер Х.М., Капрелянц А.С., Вестерхофф Х.В. Количественная оценка гетерогенности: проточная цитометрия бактериальных культур. Антони Ван Левенгук. 1991, 60: 145-158. 10.1007/BF00430362.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Кох А.Л.: Какого размера должна быть бактерия? Вопрос масштаба.Энн Рев Микробиол. 1996, 50: 317-348. 10.1146/аннурев.микро.50.1.317.

    Артикул Google ученый

  • Когуре К., Симиду У., Тага Н.: предварительный прямой микроскопический метод подсчета живых морских бактерий. Может J Microbiol. 1979, 25: 415-420. 10.1139/м79-063.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Korber DR, Choi A, Wolfaardt GM, Caldwell DE: Бактериальный плазмолиз как физический показатель жизнеспособности.Appl Environ Microbiol. 1996, 62: 3939-3947.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • McKay AM: Жизнеспособные, но не культивируемые формы потенциально патогенных бактерий в воде. Lett Appl Microbiol. 1992, 14: 129-135. 10.1111/j.1472-765X.1992.tb00667.x.

    Артикул Google ученый

  • Morgan JAW, Rhodes G, Pickup RW: Выживание некультивируемых Aeromonas salmonicida в озерной воде.Appl Environ Microbiol. 1993, 59: 874-880.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Небе-фон Карон Г. , Стивенс П., Бэдли Р.А.: Оценка состояния жизнеспособности бактерий с помощью проточной цитометрии и сортировки отдельных клеток. J Appl Microbiol. 1998, 84: 988-998. 10.1046/j.1365-2672.1998.00436.x.

    Артикул Google ученый

  • Нильссон Л., Оливер Дж. Д., Кьеллеберг С.: Реанимация Vibrio vulnificus из жизнеспособного, но не культивируемого состояния.J Бактериол. 1991, 173: 5054-5059.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Нистрём Т. Испытания и невзгоды остановки роста. Тенденции микробиол. 1995, 3: 131-136. 10.1016/S0966-842X(00)88901-5.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Postgate JR: Смерть в макробах и микробах. В: Grey TRG, Postgate JR (Eds.): Выживание вегетативных микробов.Symp Soc Gen Microbiol. 1977, 26: 1-19.

    Google ученый

  • «>

    Постгейт Младший, Хантер Младший: Выживание голодающих бактерий. J Gen Microbiol. 1962, 29: 233-263. 10.1099/00221287-29-2-233.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Роуз А.С., Эллис А.Е., Манро А.С.: Доказательства против периода покоя у бактериального патогена рыб Aeromonas salmonicida subsp. сальмонициды.FEMS Microbiol Lett. 1990, 68: 105-107. 10.1111/j.1574-6968.1990.tb04131.x.

    Артикул Google ученый

  • Росзак Д.Б., Колвелл Р.Р.: Метаболическая активность бактериальных клеток, подсчитанная прямым подсчетом жизнеспособных клеток. Appl Environ Microbiol. 1987, 53: 2889-2893.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Росзак Д.Б., Граймс Д.Дж., Колвелл Р.Р.: Жизнеспособная, но неизлечимая стадия Salmonella enteritidis в водных системах. Может J Microbiol. 1984, 30: 334-338. 10.1139/м84-049.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Stevenson LH: Случай покоя бактерий в водных системах. Микроб Экол. 1978, 4: 127-133.

    Артикул Google ученый

  • Whitesides MD, Oliver JD: Реанимация vibrio vulnificus из жизнеспособного, но не культивируемого состояния. Appl Environ Microbiol. 1997, 63: 1002-1005.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Wilson M, Lindow SE: Соотношение общего количества жизнеспособных и культивируемых клеток в эпифитных популяциях Pseudomonas syringae. Appl Environ Microbiol. 1992, 58: 3908-3913.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Winterberg H: Zur Methodik der Bakterienzählung [О методах подсчета бактерий]. Zeitschr Hyg. 1898, 29: 75-93.

    Google ученый

  • Hehewerth FH: Die microscopische Zählungsmethode der Bakterien von Alex. Klein und einige Anwendungen derselben [Микроскопический метод подсчета Алекса. Кляйн и некоторые их приложения]. Арка Гиг. 1901, 39: 321-389.

    Google ученый

  • Kelly CD, Rahn O: Скорость роста отдельных бактериальных клеток.J Бактериол. 1932, 23: 147-153.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Зиглер Н.Р., Халворсон Х.О.: Применение статистики к задачам бактериологии. IV. Экспериментальное сравнение метода разбавления, подсчета на чашках и прямого подсчета для определения популяций бактерий. J Бактериол. 1935, 29: 609-634.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • «>

    Дженнисон М.В.: Взаимосвязь между чашечным подсчетом и прямым микроскопическим подсчетом Escherichia coli в течение логарифмического периода роста.J Бактериол. 1937, 33: 461-477.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Jannasch HW, Jones GE: Бактериальные популяции в морской воде, определенные различными методами подсчета. Лимнол океаногр. 1959, 4: 128-139. 10.4319/ло.1959.4.2.0128.

    Артикул Google ученый

  • Разумов А.С.: Микробиология. 1932, 1: 131-146. как цитируется Стейли и Конопкой, 1985 (см.[62, 63])

    Google ученый

  • Staley JT, Konopka A: Измерение in situ активности нефотосинтезирующих микроорганизмов в водных и наземных обитателях. Энн Рев Микробиол. 1985, 39: 321-346. 10.1146/аннурев.ми.39.100185.001541.

    Артикул Google ученый

  • «>

    Аманн Р.И., Людвиг В., Шлейфер К-Х: Филогенетическая идентификация и обнаружение in situ отдельных микробных клеток без культивирования.Microbiol Rev. 1995, 59: 143-169.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Fraser CG: Действие метиленового синего и некоторых других красителей на живые и мертвые дрожжи. J Phys Chem. 1920, 24: 741-748.

    Артикул Google ученый

  • Henrici AT: Дифференциальный подсчет живых и мертвых клеток бактерий. Proc Soc Exp Biol Med. 1923, 20: 293-295.10.3181/00379727-20-143.

    Артикул Google ученый

  • Rahn O, Barnes MN: Экспериментальное сравнение различных критериев гибели дрожжей. J Gen Physiol. 1933, 16: 579-592. 10.1085/jgp.16.4.579.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • «>

    Гей Ф.П., Кларк А.Р.: Отличие живых бактерий от мертвых с помощью реакций окрашивания.J Бактериол. 1934, 27: 175-189.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Strugger S: Die fluoreszenzmikroskopische Unterscheidung lebender und toter Zellen mit Hilfe der Acridinorangefärbung [Флуоресцентно-микроскопическая дифференциация живых и мертвых клеток с помощью окрашивания акридинооранжем]. Dtsch Tierärztl Wschr. 1941, 49: 525-527.

    Google ученый

  • Postgate JR: Подсчет жизнеспособности и жизнеспособность.Мет микробиол. 1969, 1: 611-628.

    Артикул Google ученый

  • Азам Ф. Введение, история и обзор: «методы» нашего безумия. Мет микробиол. 2001, 30: 1-12.

    Артикул Google ученый

  • «>

    Хоуп К.К., Уилсон М.: Анализ влияния хлоргексидина и пероральной биопленки на жизнеспособность и структуру, основанный на профилировании жизнеспособности и индикаторе целостности мембраны.Противомикробные агенты Chemother. 2004, 48: 1461-1468. 10.1128/ААС.48.5.1461-1468.2004.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Аманн Р., Спрингер Н., Людвиг В., Герц Х.Д., Шлейфер К.Х.: Идентификация in situ и филогения некультивируемых бактериальных эндосимбионтов. Природа. 1991, 351: 161-163. 10.1038/351161а0.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Vollertsen J, Jahn A, Nielsen JL, Hvitved-Jacobsen T, Nielsen PH: Сравнение методов определения микробной биомассы в сточных водах.Вода Res. 2001, 35: 1649-1658. 10.1016/S0043-1354(00)00450-4.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Барер М.Р., Смит Р.Дж., Куни Р.П., Киммитт П.Т.: Взаимосвязь между культивируемостью, активностью и вирулентностью патогенных бактерий. J заразить Chemother. 2000, 6: 108-111. 10.1007/PL00012148.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Colwell RR: Жизнеспособные, но некультивируемые бактерии: стратегия выживания.J заразить Chemother. 2000, 6: 121-125. 10.1007/PL00012151.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Келл Д.Б., Капрелянц А.С., Вейхарт Д.Х., Харвуд К.Р., Барер М.Р. Жизнеспособность и активность легко культивируемых бактерий: обзор и обсуждение практических вопросов. Антони фон Левенгук. 1998, 73: 169-187. 10.1023/А:1000664013047.

    Артикул Google ученый

  • Нистром Т: Не совсем мертв: о бактериальной жизни, культивируемости, старении и смерти. Арка микробиол. 2001, 176: 159-164. 10.1007/s002030100314.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Yamamoto H: Жизнеспособное, но некультивируемое состояние как общий феномен неспорообразующих бактерий и его моделирование. J заразить Chemother. 2000, 6: 112-114. 10.1007/PL00012149.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Lahtinen SJ, Ahokoski H, Reinikainen JP, Gueimonde M, Nurmi J, Ouwehand AC, Salminen SJ: Деградация 16S рРНК и признаки жизнеспособности жизнеспособных, но некультивируемых пробиотических бактерий.Lett Appl Microbiol. 2008, 46: 693-698. 10.1111/j.1472-765X.2008.02374.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Lahtinen SJ, Gueimonde M, Ouwehand A, Reinikainen JP, Salminen S: Пробиотические бактерии могут стать бездействующими во время хранения. Appl Environ Microbiol. 2005, 71: 1662-1663. 10.1128/АЭМ.71.3.1662-1663.2005.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Молекулярные зонды: Информация о продукте LIVE/DEAD ® BacLight™ Набор для определения жизнеспособности бактерий.2001

    Google ученый

  • Stocks SM: Механизм и использование имеющегося в продаже красителя BacLight. Цитометрия А. 2004, 61А: 189-195. 10.1002/cyto.a.20069.

    Артикул Google ученый

  • Berney M, Hammes F, Bosshard F, Weilenmann H-U, Egli T: Оценка и интерпретация жизнеспособности бактерий с использованием набора LIVE/DEAD BacLight Kit в сочетании с проточной цитометрией.Приложение Окружающая среда Microbiol. 2007, 73: 3283-3290. 10.1128/АЭМ.02750-06.

    Артикул Google ученый

  • «>

    Haffajee AD, Socransky SS, Feres M, Ximenez-Fyvie LA: Микробиология зубного налета в норме и при заболеваниях. Повторный осмотр зубного налета. Под редакцией: Newman HN, Wilson M. 1999, Chippenham: BioLine Antony Rowe Ltd., 255-282.

    Google ученый

  • Otten MPT, Busscher HJ, van der Mei HC, Abbas F: Сохранение антимикробной активности в зубном налете и слюне после использования ополаскивателя для полости рта in vivo.Кариес рез. 2010, 44: 459-464. 10.1159/000320267.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Lahtinen SJ, Gueimonde M, Ouwehand AC, Reinikainen JP, Salminen SJ: Сравнение четырех методов подсчета пробиотических бифидобактерий в ферментированных пищевых продуктах. Пищевой микробиол. 2006, 23: 571-577. 10.1016/j.fm.2005.09.001.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Бюргерс Р., Эйдт А., Франкенбергер Р., Розентритт М., Швейкль Х., Гендель Г., Ханель С.: Противоадгезионная активность и бактерицидный эффект добавок микрочастиц серебра в композитных полимерных материалах.Arch Oral Biol. 2009, 54: 595-601. 10.1016/j.archoralbio.2009.03.004.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Госау М., Ханель С., Шварц Ф., Герлах Т., Райхерт Т.Е., Бюргерс Р.: Влияние шести различных методов дезинфекции периимплантита на пероральную биопленку человека in vivo. Clin Oral Implants Res. 2010, 21: 866-872.

    ПабМед Google ученый

  • Томас И., Гарсия-Кабальеро Л., Кусидо М.С., Лимерес Дж., Альварес М., Диз П.: Оценка действия хлоргексидина на флору слюны с помощью эпифлуоресцентной микроскопии.Оральный Дис. 2009, 15: 428-433. 10.1111/j.1601-0825.2009.01570.х.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Cousido MC, Tomás Carmona I, Garcia-Caballero L, Limeres J, Álvarez M, Diz P: Существенность ополаскивателей для полости рта 0,12% и 0,2% хлоргексидина in vivo на слюнных бактериях. Клин Орал Инвест. 2010, 14: 397-402. 10.1007/s00784-009-0320-2.

    Артикул Google ученый

  • Tomás I, Cousido MC, García-Caballero L, Rubido S, Limeres J, Diz P: Существенность одной жидкости для полоскания рта хлоргексидином на флору слюны: влияние внутренних и внешних факторов.Дж Стоматология. 2010, 38: 541-546. 10.1016/j.jdent.2010.03.012.

    Артикул Google ученый

  • Filoche SK, Coleman MJ, Angker L, Sissons CH: Флуоресцентный анализ для определения жизнеспособной биомассы биопленок микрокосма зубного налета. J Микробиологические методы. 2007, 69: 489-496. 10.1016/j.mimet.2007.02.015.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Quéric N-V, Soltwedel T, Arntz WE: Применение метода быстрого прямого подсчета жизнеспособности к бактериям из глубоководных отложений.J Микробиологические методы. 2004, 57: 351-367. 10.1016/j.mimet.2004.02.005.

    ПабМед Статья Google ученый

  • van der Mei HC, White DJ, Atema-Smit J, van de Belt-Gritter E, Busscher HJ: Метод изучения устойчивой антимикробной активности компонентов ополаскивателя и средства для ухода за зубами на жизнеспособность биопленки in vivo. Дж. Клин Пародонтол. 2006, 33: 14-20. 10.1111/j.1600-051X.2005.00859.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Neilands J, Petersson LG, Beighton D, Svensäter G: Молоко с добавлением фтора подавляет кислотоустойчивость биопленок корневого кариеса.Кариес рез. 2012, 46: 156-160. 10.1159/000337390.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Shen Y, Stojicic S, Haapasalo M: Бактериальная жизнеспособность в истощенных и восстановленных биопленках: сравнение окрашивания жизнеспособности и прямой культуры. Дж Эндод. 2010, 36: 1820-1823. 10.1016/j.joen.2010.08.029.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Alakomi H-L, Mättö J, Virkajärvi I, Saarela M: Применение анализа флуорохромного окрашивания в масштабе микропланшета для оценки жизнеспособности пробиотических препаратов.J Microbiol Meth. 2005, 62: 25-35. 10.1016/j.mimet.2005.01.005.

    Артикул Google ученый

  • Welin-Neilands J, Svensäter G: Кислотоустойчивость клеток биопленки Streptococcus mutans. Appl Environ Microbiol. 2007, 73: 5633-5638. 10.1128/АЭМ.01049-07.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Tomás I, Cousido MC, Tomás M, Limeres J, García-Caballero L, Diz P: бактерицидный эффект in vivo 0. 2% хлоргексидина, но не 0,12% на облигатных анаэробах слюны. Arch Oral Biol. 2008, 53: 1186-1191. 10.1016/j.archoralbio.2008.07.009.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Пан П.Х., Финнеган М.Б., Стурдивант Л., Барнетт М.Л.: Сравнительная антимикробная активность эфирного масла и ополаскивателя для полости рта с фторидом амина/фторидом олова in vitro. Дж. Клин Пародонтол. 1999, 26: 474-476. 10.1034/j.1600-051X.1999.260710.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Fine DH, Furgang D, Barnett ML: Сравнительная антимикробная активность антисептических ополаскивателей для полости рта против изогенных планктонных и биопленочных форм Actinobacillus actinomycetemcomitans.Дж. Клин Пародонтол. 2001, 28: 697-700. 10.1034/j.1600-051x.2001.028007697.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Davey HM, Kell DB, Weichart DH, Kaprelyants AS: Оценка жизнеспособности микробов с помощью проточной цитометрии. Карр Проток Цитом. 2004, 11: 11.3.1–11.3.21

    Google ученый

  • Lloyd D, Hayes AJ: Сила, жизнеспособность и жизнеспособность микроорганизмов.FEMS Microbiol Lett. 1995, 133: 1-7. 10.1111/j.1574-6968.1995.tb07852.x.

    Артикул Google ученый

  • Небе-фон-Карон Г., Стивенс П.Дж., Хьюитт К.Дж., Пауэлл Д.Р., Бадли Р.А.: Анализ бактериальной функции с помощью многоцветной флуоресцентной проточной цитометрии и сортировки отдельных клеток. J Микробиологические методы. 2000, 42: 97-114. 10.1016/С0167-7012(00)00181-0.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auty MAE, Gardiner GE, McBrearty SJ, O’Sullivan E, Mulvihill DM, Collins JK, Fitzgerald GF, Stanton C, Ross RP: Прямая оценка жизнеспособности бактерий в пробиотических молочных продуктах in situ с использованием окрашивания жизнеспособности в сочетании с конфокальная сканирующая лазерная микроскопия. Appl Environ Microbiol. 2001, 55: 420-425.

    Артикул Google ученый

  • Brehm-Stecher BF, Johnson EA: Одноклеточная микробиология: инструменты, технологии и приложения. Microbiol Mol Biol Rev. 2004, 68: 538-559. 10.1128/ММБР.68.3.538-559.2004.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Keijser BJ, Zaura E, Huse SM, van der Vossen JM, Schuren FH, Montijn RC, ten Cate JM, Crielaard W: Пиросеквенирование микрофлоры ротовой полости здоровых взрослых.Джей Дент Рез. 2008, 87: 1016-1020. 10.1177/154405

  • 8701104.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Weiger R, Netuschil L, Brecx M: Взаимосвязь между количеством бактерий, жизнеспособностью микробов и накоплением наддесневого зубного налета у людей. J Пародонт Res. 1992, 27: 575-580. 10.1111/j.1600-0765.1992.tb01739.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Weiger R, Netuschil L, von Ohle C, Brecx M: Микробная жизнеспособность наддесневого зубного налета на начальных стадиях экспериментального гингивита у людей.J Пародонт Res. 1995, 30: 204-209. 10.1111/j.1600-0765.1995.tb01275.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Нетушил Л., Вейгер Р., Прейслер Р., Брекс М.: Подсчет и жизнеспособность бактерий зубного налета во время полосканий рта хлоргексидином, меридолом и листерином. Eur J Oral Sci. 1995, 103: 355-361. 10.1111/j.1600-0722.1995.tb01857.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Mikkelsen L: Влияние потребления сахарозы на слюну и количество микроорганизмов и ацидогенный потенциал раннего зубного налета.Microb Ecol Health Дис. 1993, 6: 253-264. 10.3109/08

    930

    34.

    Артикул Google ученый

  • Netuschil L, Reich E, Brecx M: Прямое измерение бактерицидного действия хлоргексидина на зубной налет человека. Дж. Клин Пародонтол. 1989, 16: 484-488. 10.1111/j.1600-051X.1989.tb02324.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Arweiler N, Donos N, Netuschil L, Sculean A, Reich E: Клинический и антибактериальный эффект масла чайного дерева.Клин Орал Инвест. 2000, 4: 70-73. 10.1007/s007840050118.

    Артикул Google ученый

  • Weiger R, Netuschil L, Brecx M: Сравнение раннего образования зубного налета у человека на вестибулярной и апроксимальной поверхностях эмали in situ. J West Soc Periodontol Periodontal Abstr. 1992, 40: 101-104. / Опечатка 41: 10

    PubMed Google ученый

  • «>

    Weiger R, Friedrich C, Netuschil L, Schlagenhauf U: Влияние лака, содержащего хлоргексидин (Cervitec®), на жизнеспособность микробов и накопление наддесневого зубного налета у людей.Кариес рез. 1994, 28: 267-271. 10.1159/000261984.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Guilbault GG, Kramer DN: Флуорометрическое определение липазы, ацилазы, альфа- и гамма-химотрипсина и ингибиторов этих ферментов. Анальная хим. 1964, 36: 409-412. 10.1021/ac60208a052.

    Артикул Google ученый

  • Медзон Э.Л., Брэди М.Л.: Прямое измерение ацетилэстеразы в живых клетках простейших.J Бактериол. 1969, 97: 402-415.

    ПабМед ПабМед Центральный Google ученый

  • Netuschil L: Vitalfärbung von Plaque-Mikroorganismen mit Fluoresceindiacetat und Ethidiumbromid [Окрашивание микроорганизмов зубного налета диацетатом флуоресцеина и бромистым этидием]. Dtsch zahnärztl Z. 1983, 38: 914-917.

    ПабМед Google ученый

  • Netuschil L, Reich E, Unteregger G, Sculean A, Brecx M: Пилотное исследование конфокальной лазерной сканирующей микроскопии для оценки жизнеспособности и топографии ненарушенной зубной бляшки.Arch Oral Biol. 1998, 43: 277-285. 10.1016/S0003-9969(97)00121-0.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Brecx M, Netuschil L, Reichert B, Schreil G: Эффективность ополаскивателей для полости рта Listerine, Meridol и Chlorhexidine в отношении зубного налета, гингивита и жизнеспособности бактерий зубного налета. Дж. Клин Пародонтол. 1990, 17: 292-297. 10.1111/j.1600-051X.1990.tb01092.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Хан Р., Вайгер Р., Нетушил Л., Брюх М.: Накопление микробов и жизнеспособность на различных реставрационных материалах. Дент Матер. 1993, 9: 312-316. 10.1016/0109-5641(93)

    -В.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Gehlen I, Netuschil L, Georg T, Reich E, Berg R, Katsaros C: Влияние ополаскивателя для полости рта с содержанием 0,2% хлоргексидина на повторный рост зубного налета у ортодонтических пациентов. Рандомизированное проспективное исследование. Часть 2: бактериологические параметры. Дж Орофак Ортоп. 2000, 61: 138-148. 10.1007/BF01300355.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Schlagenhauf U, Horlacher V, Netuschil L, Brecx M: Повторные поддесневые кислородные ирригации у нелеченых пародонтологических пациентов.Дж. Клин Пародонтол. 1994, 21: 48-50. 10.1111/j.1600-051X.1994.tb00276.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auschill TM, Arweiler NB, Brecx M, Reich E, Sculean A, Netuschil L: Влияние стоматологических реставрационных материалов на зубную биопленку. Eur J Oral Sci. 2002, 110: 48-53. 10.1046/j.0909-8836.2001.101160.х.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Brecx M, Brownstone E, MacDonald L, Gelskey S, Cheang M: Эффективность ополаскивателей для полости рта Listerine®, Meridol® и хлоргексидина в качестве дополнения к регулярной чистке зубов.Дж. Клин Пародонтол. 1992, 19: 202-207. 10.1111/j.1600-051X.1992.tb00640.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Brecx M, MacDonald LL, Legary K, Cheang M, Forgay MGE: Долговременное воздействие Meridol® и ополаскивателей для полости рта с хлоргексидином на зубной налет, гингивит, окрашивание и жизнеспособность бактерий. Джей Дент Рез. 1993, 72: 1194-1197. 10.1177/00220345930720080601.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Гелски С., Брекс М., Нетушил Л. , Макдональд Л., Браунстоун Э., Стоддарт М.: Витальная флуоресценция: новый показатель эффективности пародонтологического лечения.J Can Dent Assoc. 1993, 59: 615-618.

    ПабМед Google ученый

  • von Ohle C, Weiger R, Decker E, Schlagenhauf U, Brecx M: Эффективность ирригации из одного кармана на жизнеспособность поддесневых микробов. Клин Орал Инвест. 1998, 2: 84-90. 10.1007/s007840050050.

    Артикул Google ученый

  • Arweiler NB, Netuschil L, Reich E: Растворы для полоскания рта, не содержащие спирта, для уменьшения повторного роста наддесневого зубного налета и жизнеспособности.Контролируемое клиническое исследование. Дж. Клин Пародонтол. 2001, 28: 168-174. 10.1034/j.1600-051x.2001.028002168.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Sculean A, Auschill TM, Donos N, Brecx M, Arweiler NB: Влияние производного белка матрикса эмали (Emdogain®) на жизнеспособность зубного налета ex vivo. Дж. Клин Пародонтол. 2001, 28: 1074-1078. 10.1034/j.1600-051X.2001.281113.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auschill TM, Arweiler NB, Netuschil L, Brecx M, Reich E, Sculean A: Пространственное распределение живых и мертвых микроорганизмов в зубных биопленках.Arch Oral Biol. 2001, 46: 471-476. 10.1016/С0003-9969(00)00136-9.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Arweiler NB, Auschill TM, Donos N, Sculean A: Антибактериальный эффект производного эмалевого матрикса на жизнеспособность зубной биопленки in vivo. Клин Орал Инвест. 2002, 6: 205-209. 10.1007/s00784-002-0185-0.

    Артикул Google ученый

  • Arweiler NB, Auschill TM, Baguley N, Netuschil L, Sculean A: Эффективность ополаскивателя для полости рта с аминофторидом и триклозаном по сравнению с отдельными активными ингредиентами. Дж. Клин Пародонтол. 2003, 30: 192-196. 10.1034/j.1600-051X.2003.10250.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auschill TM, Hellwig E, Sculean A, Hein N, Arweiler NB: Влияние внутриротового расположения на скорость роста биопленки. Клин Орал Инвест. 2004, 8: 97-101.

    Артикул Google ученый

  • Arweiler NB, Hellwig E, Sculean A, Hein N, Auschill TM: Индивидуальная картина жизнеспособности зубных биопленок in situ в разных местах полости рта.Кариес рез. 2004, 38: 442-447. 10.1159/000079625.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auschill TM, Hein N, Hellwig E, Follo M, Sculean A, Arweiler NB: Влияние двух противомикробных агентов на раннее формирование биопленки in situ. Дж. Клин Пародонтол. 2005, 32: 147-152. 10.1111/j.1600-051X.2005.00650. x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Arweiler NB, Böhnke N, Sculean A, Hellwig E, Auschill TM: Различия в эффективности двух коммерческих 0.2% растворы для полоскания рта с хлоргексидином: 4-дневное исследование повторного роста зубного налета. Дж. Клин Пародонтол. 2006, 33: 334-339. 10.1111/j.1600-051X.2006.00917.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Auschill TM, Deimling D, Hellwig E, Arweiler NB: Антибактериальный эффект двух зубных паст после одной чистки. Здоровье полости рта Prev Dent. 2007, 5: 25-32.

    ПабМед Google ученый

  • Al-Ahmad A, Wiedmann-Al-Ahmad M, Auschill TM, Follo M, Braun G, Hellwig E, Arweiler NB: Влияние обычно используемых пищевых консервантов на образование биопленки Streptococcus mutans in vitro.Arch Oral Biol. 2008, 53: 765-772. 10.1016/j.archoralbio.2008.02.014.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Arweiler NB, Lenz R, Sculean A, Al-Ahmad A, Hellwig E, Auschill TM: Влияние пищевых консервантов на формирование биопленки in situ. Клин Орал Инвест. 2008, 12: 203-208. 10.1007/s00784-008-0188-6.

    Артикул Google ученый

  • Arweiler NB, Pergola G, Kuenz J, Hellwig E, Sculean A, Auschill TM: Клинический и антибактериальный эффект противовоспалительной зубной пасты с экстрактом Scutellaria baicalensis при экспериментальном гингивите.Клин Орал Инвест. 2011, 15: 909-913. 10.1007/s00784-010-0471-1.

    Артикул Google ученый

  • Arweiler NB, Auschill TM, Sculean A: Антибактериальный эффект тауролодина (2%) на установленную биопленку зубного налета. Клин Орал Инвест. 2012, 16: 499-504. 10.1007/с00784-011-0526-у.

    Артикул Google ученый

  • Арвейлер Н.Б., Нетушил Л., Бейер Д., Грюнерт С., Хойманн С., Альтенбургер М.Дж., Скулеан А., Надь К., Аль-Ахмад А., Аушилль ТМ: Действие пищевых консервантов на 14-дневное формирование зубной биопленки, жизнеспособность биопленки , и деминерализация эмали, полученная из биопленки in situ.Клин Орал Инвест. 2013 г., [Epub перед печатью] doi:10.1007/s00784-013-1053-9

    Google ученый

  • Botzenhart K, Heizmann W, Sedaghat S, Heeg P, Hahn T: Бактериальная колонизация и появление легионеллы пневмофилы в теплой и холодной воде, в аэраторах кранов и в стоках больниц. Збл Бакт Хыг. 1986, Б183: 79-85.

    Google ученый

  • Рундегрен Дж., Хвид Э., Йоханссон М., Астрём М.: Влияние 4-дневного полоскания рта делмопинолом или хлоргексидином на жизнеспособность бактерий зубного налета. Дж. Клин Пародонтол. 1992, 19: 322-325. 10.1111/j.1600-051X.1992.tb00653.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Herles S, Olsen S, Afflitto J, Gaffar A: Система проточных ячеек Chemostat: модель in vitro для оценки средств против зубного налета. Джей Дент Рез. 1994, 73: 1748-1755.

    ПабМед Google ученый

  • Куркоута С., Уолш Т.Ф., Дэвис Л.Г.: Влияние фарфоровых виниров на здоровье десен и характеристики бактериального налета.Дж. Клин Пародонтол. 1994, 21: 638-640. 10.1111/j.1600-051X.1994.tb00756.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Гаффар А., Аффлитто Дж., Наби Н., Херлес С., Крюгер И., Олсен С.: Последние достижения в области технологий профилактики зубного налета, гингивита, зубного камня и кариеса. Стажер Дент Дж. 1994, 44: 63-70.

    Google ученый

  • Гаффар А., Аффлитто Дж., Наби Н. Химические средства для борьбы с зубным налетом и микрофлорой зубного налета: обзор.Eur J Oral Sci. 1997, 105: 502-507. 10.1111/j.1600-0722.1997.tb00237.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Маллалли Б.Х., Джеймс Дж.А., Коултер В.А., Линден Г.Дж.: Эффективность зубной пасты на основе трав в борьбе с зубным налетом и гингивитом. Дж. Клин Пародонтол. 1995, 22: 686-689. 10.1111/j.1600-051X.1995.tb00827.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Уолш Т.Ф., Юнсал Э., Дэвис Л.Г., Йилмаз Ö: Влияние орошения хлоргексидином или физиологическим раствором на жизнеспособность зубного налета.Дж. Клин Пародонтол. 1995, 22: 262-264.

    ПабМед Статья Google ученый

  • «>

    Walsh TF, Ünsal E, Varella-Centelles P: Сравнение цифровых и визуальных измерений жизнеспособности бляшек. Дж. Клин Пародонтол. 1995, 22: 653-654. 10.1111/j.1600-051X.1995.tb00820.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Zaura-Arite E, van Marle J, ten Cate JM: Исследование с помощью конфокальной микроскопии неповрежденной и обработанной хлоргексидином зубной биопленки.Джей Дент Рез. 2001, 80: 1436-1440. 10.1177/00220345010800051001.

    ПабМед Статья Google ученый

  • König J, Storcks V, Kocher T, Bössmann K, Plagmann H-C: Противозубный эффект ополаскивателя с 0,2% хлоргексидином: исследование in vivo. Дж. Клин Пародонтол. 2002, 29: 207-210. 10.1034/j.1600-051x.2002.2.x.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Hannig C, Hannig M, Rehmer O, Braun G, Hellwig E, Al-Ahmad A: Флуоресцентная микроскопическая визуализация и количественная оценка начальной бактериальной колонизации эмали in situ. Arch устные биол. 2007, 52: 1048-1056. 10.1016/j.archoralbio.2007.05.006.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Wojcik K, Dobrucki JW: Взаимодействие интеркалятора ДНК DRAQ5 и связывателя малой бороздки SYTO17 с хроматином в живых клетках – влияние организации хроматина и взаимодействия гистонов и ДНК. Цитометрия А. 2008, 73: 555-562.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Цифровой синтез гистологических красителей с использованием микроструктурированного и мультиплексного виртуального окрашивания тканей без меток

    Сбор данных

    Неокрашенные ткани почек, фиксированные формалином и залитые парафином (FFPE), были разделены на тонкие срезы толщиной 2 мкм и фиксируются на стандартных предметных стеклах микроскопа.Набор данных для обучения и проверки для каждого пятна состоял из изображений, полученных из 12 тонких срезов тканей, полученных от уникальных пациентов. Набор тестовых данных состоял из четырех срезов тканей дополнительных уникальных пациентов. Соседние срезы тканей каждого из этих пациентов использовали для каждого из трех окрашиваний. Этическое разрешение на использование этих срезов тканей было получено под номером UCLA IRB 18–001029. С помощью обычного широкопольного флуоресцентного микроскопа (IX83, Olympus), оснащенного объективом 20×/0.Объектив 75 NA (Olympus UPLSAPO) и два отдельных блока фильтров, DAPI (OSFI3-DAPI-5060C, EX 377/50 нм, EM 447/60 нм, Semrock) и Texas Red (OSFI3-TXRED-4040C, EX 562/40 нм EM 624/40 nm, Semrock) была выполнена автофлуоресцентная визуализация этих немеченых срезов ткани. Срезы ткани не депарафинизировали и не закрывали покровным стеклом перед визуализацией с помощью флуоресцентной микроскопии. Время экспозиции для канала DAPI составляло 50 мс, а для канала Texas Red — 300 мс. После получения аутофлуоресцентных изображений предметные стекла подвергали гистохимическому окрашиванию с использованием стандартного красителя H&E, серебра Джонса или трихрома Массона, а затем закрывали покровным стеклом. Окрашивание предметных стекол проводилось в Центральной лаборатории трансляционной патологии Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе (TPCL). Затем гистохимически окрашенные слайды визуализировали с помощью сканирующего микроскопа (Aperio AT, Leica Biosystems, объектив 20×/0,75 NA с адаптером 2×) для создания целевых меток, используемых для обучения, проверки и тестирования наших моделей нейронных сетей.

    Мы использовали два немаркированных аутофлуоресцентных изображения одного и того же образца ткани в сочетании с цифровой матрицей окрашивания, чтобы выбрать пятно или набор пятен, которые должны быть сгенерированы в качестве входных данных для нейронной сети.Этот ввод был преобразован условно-классовой генеративной состязательной сетью в эквивалентное изображение окрашенного среза ткани с тем же полем зрения.

    Предварительная обработка изображений и совместная регистрация

    Поскольку целью глубокой нейронной сети было обучение преобразованию немеченых аутофлуоресцентных изображений образца ткани в изображение окрашенного образца, было важно, чтобы поля зрения были точными. выровнены. Кроме того, поскольку в качестве входных данных сети использовалось более одного канала автофлуоресценции, необходимо было согласовать различные каналы фильтра.Чтобы использовать три разных красителя (H&E, трихром Массона и серебро Джонса), мы реализовали предварительную обработку и выравнивание изображений для каждой пары входных и целевых изображений из трех наборов данных окрашивания по отдельности.

    Этапы регистрации для сопоставления автофлуоресцентных изображений и изображений в светлом поле соответствовали процессу, описанному Rivenson et al. 15 . Одним из основных дополнений является то, что когда несколько каналов автофлуоресценции (например, DAPI и Texas Red) используются в качестве входных данных сети, они должны быть выровнены, даже если изображения в обоих каналах получены с использованием одного и того же микроскопа; соответствующие FOV из двух каналов точно не выровнены на уровне субпикселей, особенно по краям FOV.Поэтому мы применили эластичный пирамидальный алгоритм регистрации для точного выравнивания нескольких каналов автофлуоресценции. Этот эластичный алгоритм регистрации сопоставляет локальные особенности двух каналов изображения, иерархически разбивая изображение на все более мелкие блоки и затем сопоставляя соответствующие блоки 10 . Алгоритм эластичной регистрации начинается с разделения изображения на сетку из 5 × 5 блоков и вычисления поблочной взаимной корреляции. Расстояние между местом с пиковой корреляцией и центром блока используется для расчета сдвига, поскольку область с пиковой корреляцией является точкой с максимальным сходством между двумя изображениями.Используя средневзвешенное значение вектора перемещения для каждого блока, была создана карта перемещения размером 2048 × 2048 пикселей. Затем эта карта перевода была применена к изображению Texas Red, чтобы учесть различия между ним и изображением DAPI. Для достижения точной совместной регистрации изображение итеративно разбивалось на все более мелкие блоки, пока не был достигнут размер блока 100 × 100 пикселей. Окончательная рассчитанная карта преобразования была затем применена к изображениям Texas Red, чтобы убедиться, что они совмещены с соответствующими изображениями в канале DAPI. Пример использования этой карты эластичного преобразования можно увидеть на рис. 5. Наконец, мы совместили выровненные изображения из обоих каналов, чтобы получить изображения всего слайда образцов, содержащих каналы DAPI и Texas Red.

    Рис. 5: Пример совместной регистрации каналов изображения DAPI и Texas Red.

    Карта трансляции была рассчитана с использованием эластичного пирамидального алгоритма регистрации, а затем применена к каналу изображения Texas Red. Этот процесс обеспечил точную совместную регистрацию двух каналов изображения по отношению друг к другу

    Совместная регистрация флуоресцентных и светлопольных изображений началась с общей регистрации и продолжалась с постепенным выравниванием в меньших масштабах до совместной регистрации на уровне субпикселей. была достигнута.Этот первый шаг этого процесса заключался в том, чтобы найти грубое соответствие путем выделения области светлопольного изображения с самой высокой взаимной корреляцией с версией изображения DAPI с обращенным контрастом. Затем эти изображения были дополнительно выровнены с использованием мультимодальной функции регистрации изображений MATLAB 23 . После этого процесса регистрации нейронная сеть обучалась с использованием фрагментов этих грубо совпадающих изображений. Используя эту сеть, изображения автофлуоресценции затем виртуально окрашивались. Однако, поскольку к этому моменту была достигнута только грубая совместная регистрация, точность результатов виртуального окрашивания не могла быть удовлетворительной.Поэтому затем была применена эластичная пирамидальная совместная регистрация, чтобы сопоставить гистохимически окрашенные изображения с исходными виртуально окрашенными изображениями, в результате чего была получена совпадающая пара изображений.

    Перед подачей выровненных пар в нейронную сеть мы выполнили нормализацию изображений всего слайда, созданных на основе изображений DAPI и Texas Red. Эта нормализация всего предметного стекла была выполнена путем вычитания среднего значения всего образца ткани и деления на стандартное отклонение значений пикселей (обратите внимание, что фоновые области были исключены при расчете среднего значения и стандартного отклонения).

    Архитектура глубокой нейронной сети, обучение и проверка

    В этом исследовании мы использовали класс-условную архитектуру GAN, чтобы изучить преобразование входных изображений неокрашенной автофлуоресценции без меток в соответствующее изображение в светлом поле с использованием трех разных красителей (H&E , трихром Массона и серебро Джонса). После совместной регистрации автофлуоресцентных изображений и изображений в светлом поле точно выровненные FOV были случайным образом разделены на перекрывающиеся участки размером 256 × 256 пикселей и дополнительно увеличены путем вращения и отражения.Затем патчи использовались для обучения GAN. Во время процесса обучения эта условная классом GAN использовала набор матриц с горячим кодированием, вместе называемых матрицей цифрового окрашивания, которая была объединена с 256   × 256 патчами входного изображения / стека изображений в сети, с каждой матрицей, соответствующей к другому пятну. Один из способов представить это условие:

    $$\tilde c = \left[ {c_1,c_2,c_3} \right]$$

    (2)

    , где [·] обозначает конкатенацию, а c i представляет собой матрицу 256 × 256 меток для i -го типа пятен (в данном примере H&E, трихром Массона или серебро Джонса). Для пары входных и целевых изображений из набора данных i -th пятна, c i была установлена ​​как матрица «все единицы», а всем остальным матрицам были присвоены нулевые значения.

    GAN состоит из двух глубоких нейронных сетей, генератора и дискриминатора (рис. 6). Во время обучения GAN генератор учится выполнять статистическое преобразование для создания виртуально окрашенного изображения, в то время как дискриминатор пытается различать гистохимически окрашенные изображения и их виртуально окрашенные аналоги.Сети совершенствуются, учась друг у друга, улучшая качество виртуально окрашенных изображений. Для этой задачи мы определили функции потерь генератора и дискриминатора как:

    $$\begin{array}{l}\ell _{\mathrm{генератор}} = L_1\left\{ {{\it{z }} _ {\ mathrm {метка}}, G \ влево ( {x _ {\ mathrm {вход}}, \ тильда c} \ вправо)} \ вправо \} + \ lambda \ times {\ mathrm {TV}} \ влево \ { {G \ влево ( {{x} _ {\ mathrm {вход}}, \ тильда с} \ вправо)} \ вправо \} + \ альфа \ раз \ влево ( {1 — D ( {G ( { x_{\mathrm{вход}},\тильда c}),\тильда c})} \right)^2\\ \ell _{\mathrm{дискриминатор}} = D\left( {G( {x_{\ mathrm{input}},\tilde c}),\tilde c} \right)^2 + \left( {1 — D( {z _{\mathrm{label}},\tilde c})} \right)^ 2\конец{массив}$$

    (3)

    , где оператор полной вариации (TV) и средняя абсолютная ошибка ( L 1 -норма) используются для упорядочения выходного сигнала генератора и обеспечения его высокой точности. Телевизионный оператор и L 1 -норма определяются как: \limits_q |z_{p\, + \,1,q} — z_{p,q}| + |z_{p,q + 1} — z_{p,q}|$$

    (4)

    $$L_1\left( {z,G} \right) = \frac{1}{{\mathrm{P} \times {\mathrm{Q}}}}\mathop {\sum}\limits_p \mathop {\sum}\limits_q |z_{p,q} — G\left({x_{\mathrm{input}},\tilde c} \right)_{p,q}|$$

    (5)

    , где D (·) и G (·) относятся к выходам цепей дискриминатора и генератора соответственно; z этикетка обозначает светлопольное изображение гистохимически окрашенной ткани; и x ввод представляет ввод в нейронную сеть.P и Q представляют количество пикселей по вертикали и горизонтали, соответственно, фрагмента изображения, а p и q представляют местоположения пикселей. Параметры регуляризации ( λ и α ) были установлены равными 0,02 и 2000, соответственно, чтобы приспособиться к полному вариационному члену потерь примерно в 2% от L 1 потерь и дискриминаторному члену потерь в 98% от общие потери генератора.

    Рис. 6: Схема, показывающая сетевую архитектуру GAN, используемую для выполнения преобразования.

    a Генераторная сеть. b Сеть дискриминатора

    Для генератора была принята модифицированная версия архитектуры U-net 24 , как показано на рис. 6а. Эта U-сеть состоит из четырех «нижних блоков», за которыми следуют четыре «восходящих блока». Каждый из нижних блоков состоит из трех сверточных слоев и их функций активации, которые вместе удваивают количество каналов. За этими сверточными слоями следует средний объединяющий слой с размером шага и ядра, равным двум, который эффективно понижает частоту дискретизации изображения.Блоки повышения сначала билинейно изменяют размер тензоров, повышая их дискретизацию в два раза. Далее следуют три сверточных слоя и их функции активации. Эти сверточные слои вместе уменьшают количество каналов в четыре раза. Между каждым из up- и down-блоков одного уровня используется скиповое соединение. Эти пропускные соединения объединяют выходные данные понижающих блоков со значениями, подвергнутыми повышающей дискретизации, что позволяет передавать данные на каждом уровне. После этих нисходящих и восходящих блоков используется сверточный слой для уменьшения количества каналов до трех, что соответствует трем цветовым каналам в светлопольном изображении.

    Сеть дискриминатора, представленная на рис. 6б, получает шесть входных каналов. Три канала (цветовая карта YCbCr) поступают либо с выхода генератора, либо с мишени/метки, а три — с матрицы цифрового окрашивания с горячим кодированием. Архитектура дискриминатора содержит сверточный слой, который преобразует эти входные данные в 64-канальную карту признаков, которая, в свою очередь, проходит через набор из пяти блоков, каждый из которых состоит из двух сверточных слоев и соответствующих им функций активации.Второй из этих сверточных слоев удваивает количество каналов и имеет шаг, равный двум. За этими пятью блоками следуют два полносвязных слоя, которые уменьшают размерность до одного канала, на который действует сигмовидная функция активации.

    Размер сверточного фильтра в сети GAN установлен равным 3 × 3; на выходы этих фильтров действует функция активации Leaky ReLU, которая описывается как: *{20}{c}} \!\!\!\!\!{x\;\mathrm{for}\;{\it{x}}\, > \,0} \\ {0.1x\;\mathrm{иначе}} \end{массив}} \right.$$

    (6)

    Во время обучения обучаемые параметры были обновлены с использованием оптимизатора адаптивной оценки момента (Adam) со скоростью обучения 1 × 10 −4 для сети генератора и 2 × 10 −6 для сети дискриминатора. Для каждого шага обучения дискриминатора выполнялось десять итераций обучения генераторной сети. Размер партии для обучения был установлен на 8.

    Виртуальное окрашивание немеченых изображений тканей одним пятном

    После обучения сети метка с горячим кодированием \(\тильда c\) использовалась для подготовки сети к получению желаемых окрашенных изображений. Другими словами, для получения только i -го пятна матрица c i была установлена ​​как матрица, состоящая из единиц, а остальные матрицы были установлены как все нули.

    Смешивание красителей и микроструктурное виртуальное окрашивание немеченых изображений тканей

    Следуя процессу обучения модели нейронной сети, мы можем использовать условные матрицы способами, отличными от тех, в которых модель была обучена для виртуального создания новых типов пятен .{N_{\mathrm{пятна}}} c_i,_j,_k = 1$$

    (7)

    Другими словами, для заданного набора индексов j и k сумма по количеству пятен, на которых обучалась сеть ( N пятен  = 3 в нашем примере) должна быть равна 1. Модифицируя матрицы кодирования классов для использования смеси нескольких классов, можно смешивать различные пятна, создавая уникальные пятна с характеристиками, унаследованными от различных пятен, изученных искусственной нейронной сетью.{N_{\mathrm{stains}}} c_i,_j,_k = 1\, \quad\mathrm{for}\;{\it{j,k}} \subseteq \mathrm{ROI}$ $

    (8)

    , где ROI — это определенная область интереса в поле зрения образца. Можно определить несколько непересекающихся областей интереса в поле зрения, при этом разные красители применяются к разным областям интереса или микроструктурам. Они могут быть определены пользователем или сгенерированы алгоритмически. Например, пользователь может вручную определить различные области ткани с помощью графического пользовательского интерфейса и окрасить их разными красителями.Это приведет к тому, что разные составляющие ткани будут окрашиваться по-разному, как показано на рис. 1 и 3. Мы реализовали эту функцию селективного окрашивания ROI (микроструктурное окрашивание) с помощью пакета сегментации Python Labelme 25 . Используя этот пакет, мы можем генерировать логические маски в соответствии с помеченными ROI, которые затем обрабатываются как метки \(\tilde c_{ROI}\) для определенных микроскопических областей. Другие ручные, программные или гибридные подходы также могут быть использованы для осуществления выбора определенных тканевых структур.

    Сеть с одним пятном, используемая для расчетов SSIM

    Для создания виртуально окрашенных изображений с использованием сети с одним пятном использовалась сеть с той же архитектурой, но без матрицы цифрового окрашивания. Отдельная сеть была обучена для каждого из трех пятен, используя часть набора данных, характерную для этого пятна. Эта сеть с одним пятном была реализована в соответствии с подходом, о котором сообщалось ранее 15 .

    Сведения о реализации

    Виртуальная сеть окрашивания была реализована с использованием Python версии 3.6.0 с фреймворком TensorFlow версии 1.11.0. Мы внедрили программное обеспечение на настольный компьютер с процессором Intel Xeon W-2195 с частотой 2,30 ГГц и 256 ГБ оперативной памяти под управлением операционной системы Microsoft Windows 10. Обучение и тестирование сети проводились с использованием одного графического процессора NVIDIA GeForce RTX 2080 Ti. Сеть была обучена 21 000 шагов обучения дискриминатора в течение 47 часов. Используя один графический процессор, вывод может быть выполнен со скоростью 3,9 с на 1 мм 2 немеченой ткани.

    Система обучения гистологии Приложение A

    Приложение A: Окрашивание и обычно используемые красители

    Чтобы усилить контраст в обычно бесцветных срезах тканей, срезы тканей обычно окрашивают. Для световых микроскопических исследований применяют красящие вещества (хромофоры). Для электронного микроскопа используются электронно-плотные соли тяжелых металлов (например, цитрат свинца, уранилацетат).

    Первые гистологи использовали естественные красители для окрашивания срезов. С изобретением химических красителей стало доступно большее количество пятен. Хотя есть некоторое понимание механизмов окрашивания, даже сегодня точный механизм многих пятен неизвестен.

    Студенты часто слышат или читают, что некоторые красители являются либо основными, либо кислотными.Это связано с тем, что синтетические красители готовятся таким образом, что окрашивающая часть красителя является либо кислотной (анионной), либо основной (катионной) по своему химическому поведению. Катионный или основной краситель имеет сродство к ядрам и рибосомам, которые существуют в ткани с общим отрицательным зарядом и называются базофильными; анионный или кислотный краситель имеет сродство к положительно заряженной цитоплазме и другим компонентам, таким как митохондрии и реснички, которые затем называются ацидофильными структурами. Таким образом:

    Основной краситель:    [краситель]+ OH-
    окрашивает базофильные структуры, напр.г., ядра, рибосомы, ГАГ

    Кислотное окрашивание:    [краситель]- H+
    окрашивает ацидофильные структуры, например, митохондрии, коллаген

    Срез ткани содержит множество белков, различающихся своими изоэлектрическими точками. При идеальном pH некоторые компоненты ткани будут демонстрировать относительную ацидофилию, тогда как другие — относительную базофилию.

    Часто основные красители (метиленовый синий, толуидиновый синий, тионин) реагируют с определенным компонентом ткани и придают ему цвет, отличный от цвета самого красителя.Это явление называется метахромазией, а компоненты клеток или тканей, в которых оно проявляется, называются метахроматическими.

    Ниже приводится алфавитный список красителей, обычно используемых в световой микроскопии гистологии. Некоторые из них являются красителями общего назначения, а некоторые используются для демонстрации определенных материалов в срезах. Примеры предметных стекол микроскопа, которые иллюстрируют описанное пятно, приведены в скобках [#] в конце описания.

    1. Краситель H&E (гематоксилин и эозин)
    Наиболее широко используемая и важная комбинация красителей общего назначения.Может использоваться после любой фиксации, кроме фиксации четырехокисью осмия. Гематоксилин, натуральный краситель, действует как основной краситель, окрашивающий в синий или черный цвет. Ядерный гетерохроматин окрашивается в синий цвет, цитоплазма клеток, богатых рибонуклеопротеином, также окрашивается в синий цвет. Цитоплазма клеток с минимальным количеством рибонуклеопротеина имеет бледно-лиловый цвет. Анилиновый краситель эозин — кислотный краситель, окрашивающий цитоплазму, мышцы и соединительные ткани в различные оттенки розового и оранжевого цветов. Эта разница в интенсивности окрашивания полезна для дифференциации одной ткани от другой.Хотя это эстетически приятная комбинация и широко используется, ее способность дифференцировать цитоплазматические органеллы ограничена. Обычные основные красители, часто заменяемые гематоксилином, включают метиленовый синий, толуидиновый синий, тионин, кармин, основной фуксин и азур II. Обычно замещенные кислотные красители включают оранжевый G или филоксин.

    Многие предметные стекла для микроскопа готовятся с использованием материала, залитого в пластик, а не в парафин. Используемый пластик представляет собой метакрилат гликоля, и он обычно используется в гистологии и патологии, поскольку можно в значительной степени избежать некоторых артефактов (усадки и искажения), вызванных горячим парафином.Кроме того, пластиковые встроенные секции можно нарезать толщиной 1 или 2 микрометра, что позволяет улучшить визуализацию ткани. Поскольку пятна H&E могут быть проблематичными при использовании метакрилата, часть встроенного в пластик материала окрашивается комбинацией красителей-заменителей, которые похожи на H&E, но не вызывают проблем. В качестве основного красителя часто используется голубой целестин, который окрашивает нуклеиновые кислоты в синий цвет; кислотный краситель представляет собой раствор понсо де ксилинина и кислого фуксина, который окрашивает коллаген и мышечные волокна в оранжево-красный цвет, а гранулы эозинофилов — в красный цвет. [Слайд №125]

    2. Краситель Lee (метиленовый синий и основной фуксин)
    Этот краситель часто используется для окрашивания тканей общего назначения, поскольку он лучше подходит для мышечной ткани, чем H&E. Ядра окрашиваются в синий цвет; цитоплазма митохондрий, реснички и некоторые клеточные гранулы окрашиваются в оттенки красного и розового цветов; хрящи и большинство клеточных гранул окрашиваются от синего до фиолетового. [Слайд №109, «голубая» секция]

    3. Пятно для соединительной ткани по Мэллори (трихромное по Мэллори)
    Один из самых красивых красителей.Разработано несколько модификаций исходного метода. Его часто используют для дифференциации ацидофильных внеклеточных волокон от ацидофильной цитоплазмы. Основными ингредиентами являются кислота фуксин, анилиновый синий, оранжевый G и фосфорно-вольфрамовая кислота. Коллагеновые и ретикулярные волокна окрашиваются в синий цвет; ядра и гладкие мышцы окрашиваются в красный цвет; эластические волокна окрашиваются в розовый цвет; эритроциты и миелин окрашиваются в оранжевый цвет. [Слайд №53]

    4. Периодический кислотно-шиффовский метод (PAS)
    В основном используется для демонстрации структур, богатых углеводными макромолекулами, такими как гликоген, гликопротеин и протеогликаны, обнаруженные в основном веществе соединительной ткани, базальных мембранах и слизи.Этот метод основан на избирательном окислении периодической кислотой свободных гидроксильных групп на двух соседних гидроксильных группах, превращая спирты в альдегиды. Затем альдегиды обнаруживают с помощью реактива Шиффа, который окрашивает их в красновато-фиолетовый цвет. Другие компоненты ткани окрашиваются в соответствии с используемым контрастным красителем. Свинцовый гематоксилин или другой основной краситель часто является контрастным красителем. [Слайд №122]

    5. Гематоксилин фосфорно-вольфрамовой кислоты (PTAH)
    Это идеальное окрашивание для демонстрации поперечнополосатых мышечных волокон и митохондрий, которые окрашиваются в синий цвет.Контрастное окрашивание часто не используется. [Слайд № 38, без контрастного окрашивания]

    6. Серебряные красители
    Некоторые компоненты ткани, называемые аргирфильными, имеют естественное сродство к солям серебра. Гликопротеины в этих материалах восстанавливают соли серебра до металлического серебра, оставляя черное пятно вокруг аргирофильных материалов. Ретикулярные волокна и гранулы в диффузных эндокринных клетках аргирофильны. Обычно контрокраску не используют, а неокрашенные клеточные элементы видны как бесцветные тени.[Слайд № 70, без контрастного окрашивания]

    7. Суданские красители
    Суданские красители используются для окрашивания липидов. Суданские красители, например судан IV, растворяются в каплях, содержащих триглицериды, и интенсивно их окрашивают. Чтобы применить этот краситель, необходимо соблюдать осторожность во время подготовки ткани, чтобы сохранить липиды, которые часто вымываются стандартными процедурами подготовки тканей. [Слайд №9]

    8. Пятно Райта
    Пятно Райта представляет собой нейтральное пятно, полученное в результате взаимодействия кислотного и основного красителей с образованием большой молекулы соли с окрашенным красителем в обеих ее частях. Смеси типа Романовского (включая красители Райта и Гимзы) являются наиболее известными из этих нейтральных красителей и образуются при взаимодействии метиленового синего и эозина.

    При окрашивании по Райту клетки крови проявляют четыре основных свойства окрашивания, которые позволяют различать типы клеток. Базофилия (сродство к метиленовому синему), азурофилия (сродство к продуктам окисления метиленового синего, называемым азурами, которые имеют красновато-фиолетовый цвет), ацидофилия (сродство к эозину) и нейтрофилия (сродство к комплексу красителей в смеси, которые имеют бледный цвет). сирень).В окрашенном мазке крови эритроциты связывают эозин и кажутся от оранжевых до розовых, ядра пурпурно-голубыми, базофильные гранулы очень темными голубовато-фиолетовыми, эозинофильные гранулы от красных до красно-оранжевых, нейтрофильные гранулы от красновато-коричневых до сиреневых, тромбоциты от фиолетовых до пурпурных, а цитоплазма лимфоцитов пятна бледно-голубые. [Слайд №18]

    9. Verhoeff Stain
    Хороший краситель для соединительной ткани, особенно эластина. Эластин окрашивается в темно-коричнево-черный цвет. Встречный краситель может использоваться или не использоваться с красителем Верхоффа.[Слайд № 29, без контрастного окрашивания]

    Красители, используемые в электронной микроскопии
    Соли тяжелых металлов используются для окрашивания биологических материалов для исследования в просвечивающем электронном микроскопе. Большинство популярных электронных красителей являются красителями общего назначения и не очень специфичны. Уранилацетат окрашивает мембранные структуры и структуры, содержащие нуклеиновые кислоты. Цитрат свинца является другим широко используемым красителем. Свинец связывается с РНК-содержащими структурами и гидроксильными группами углеводов.[Слайд ЭМ № 01]

    Идти к:
    [Главная страница||Главный указатель|Анатомический рисунок|Схема/диаграмма|Эскиз|Номер слайда|Ключевое слово]

    © 2002 Издательство Оксфордского университета

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.